刁巖 任宏濤 王西京 馬小斌 代志軍

乳腺癌是一種嚴(yán)重威脅婦女健康的常見病和多發(fā)病。近年來，我國乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，在大城市，乳腺癌已位居女性惡性腫瘤發(fā)病率之首，且年齡有明顯提前趨勢(shì)。乳腺癌導(dǎo)致死亡的主要原因是全身轉(zhuǎn)移，如肝轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、腦轉(zhuǎn)移等。PCNA是增殖細(xì)胞合成DNA所必需的核蛋白，PCNA表達(dá)反映細(xì)胞增殖活性，一般增殖活性高的細(xì)胞由于細(xì)胞間張力增大，粘附性降低，更易于脫離原發(fā)灶向遠(yuǎn)處擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移。MMP-2是一類與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的蛋白降解酶。通過降解基底膜及細(xì)胞外基質(zhì),為血管內(nèi)皮的遷移和新生血管的延伸創(chuàng)造了必要條件。本試驗(yàn)通過免疫組化法檢測PCNA、MMP-2在PR陽性的乳腺癌中的表達(dá)，分析它們之間及它們與其他臨床病理參數(shù)的關(guān)系，探討PCNA、MMP-2在乳腺癌中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

隨機(jī)抽取西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院腫瘤外科2004年1月至2007年6月手術(shù)切除的存檔蠟塊40例。全部病例均經(jīng)手術(shù)和病理證實(shí),為孕激素受體陽性的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌。手術(shù)方式均為保留胸大肌和胸小肌的乳腺癌改良根治術(shù)。40例標(biāo)本均取自女性?；颊吣挲g37～71歲，平均52歲。臨床TNM分期按第五版美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）分期系統(tǒng)進(jìn)行。TNM分期：Ⅰ期13例；Ⅱ期21例；Ⅲ期6例。40例浸潤性導(dǎo)管癌中腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1～3個(gè)5例，≥4個(gè)8例。全部標(biāo)本入選條件：①臨床資料完整。②手術(shù)后病理確診。③術(shù)前未行放化療及內(nèi)分泌治療。④乳腺癌患者無其他惡性腫瘤病史。檢測試劑盒購自武漢博士德公司，免疫組化（Streptavidin-Peroxidase）SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

免疫組織化學(xué)SP法（鏈霉素親和生物素蛋白——過氧化物酶法）測定乳腺癌組織標(biāo)本中PCNA、MMP-2的表達(dá)。染色步驟按試劑說明書，抗原修復(fù)采用微波修復(fù)法，孵育條件為37℃,用二氨基聯(lián)苯胺和過氧化氫顯色，蘇木素復(fù)染。

1.3 結(jié)果判斷

PCNA陽性細(xì)胞為細(xì)胞核染色，MMP-2為胞漿染色。(-):整個(gè)切片未見陽性染色，(+):細(xì)胞數(shù)≤25%，(++):細(xì)胞數(shù)為26%～50%，(+++):細(xì)胞數(shù)51%～75%，(++++):細(xì)胞數(shù)＞75%。(+～++)為低表達(dá),(+++～++++)稱為高表達(dá)或過度表達(dá)[1]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：x2檢驗(yàn)及Fisher Exact Test將各組試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，判定有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCNA的表達(dá)結(jié)果

按腫瘤大小分組中：原發(fā)腫瘤大小≤2cm，PCNA陽性表達(dá)率為42.9%，＞2cm組為92.3%，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=11.87，P＜0.01）。

按TNM分期中，PCNA的陽性表達(dá)率在Ⅰ期為46.2%，在Ⅱ、Ⅲ期為88.9%，其差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=10.06，P＜0.02）。

表1 PCNA表達(dá)和臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組PCNA陽性表達(dá)率為70.4%，而腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組為84.6%，轉(zhuǎn)移陽性組雖高于陰性組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=0.95，P＞0.05）。在腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1～3個(gè)組，PCNA≥＋＋的表達(dá)率為62.5%，在腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移大于等于4個(gè)組，表達(dá)率為100%，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義（P=0.04）（見表1）。

2.2 MMP-2的表達(dá)結(jié)果

按腋窩淋巴結(jié)狀況分組中，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組MMP-2陽性表達(dá)率為63.0%，而腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組為100.0%，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.01）（見表2）。

表2 MMP-2表達(dá)和臨床病理的關(guān)系

3 討論

通常把乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤大小，雌、孕激素受體等因素看作是乳腺癌的預(yù)后標(biāo)準(zhǔn)，但是結(jié)果不是十分滿意。近年來國外一些研究表明PCNA與多種腫瘤的預(yù)后關(guān)系密切，有關(guān)PCNA與乳腺癌預(yù)后關(guān)系的研究也有少量的報(bào)道，認(rèn)為PCNA表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)。PCNA表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示乳腺癌中增殖活性高的癌細(xì)胞浸潤性轉(zhuǎn)移的可能性大，預(yù)后較差。Takashima[2]檢測了112例有4枚以上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌標(biāo)本，認(rèn)為在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者中，PCNA表達(dá)低者預(yù)后較好。PCNA與腫瘤的臨床行為密切相關(guān)，瘤細(xì)胞增殖活性高者，PCNA高表達(dá)，就易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，說明PCNA過度表達(dá)增加了瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移趨勢(shì)的危險(xiǎn)性[3]，故認(rèn)為PCNA表達(dá)可以作為判斷乳腺癌預(yù)后的可靠指標(biāo)。

本研究發(fā)現(xiàn)PCNA在乳腺癌中存在高表達(dá)，且腫瘤越大，分期越晚，細(xì)胞增殖越活躍，惡性程度越高。PCNA陽性表達(dá)的高低能反映乳腺癌細(xì)胞的增殖狀態(tài)和惡性程度，不直接反映腫瘤細(xì)胞的侵襲性。本研究發(fā)現(xiàn)PCNA的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，但在腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1～3個(gè)組，PCNA≥＋＋的表達(dá)率為62.5%，在腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移大于等于4個(gè)組，表達(dá)率為100%，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義。而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否是關(guān)系到患者預(yù)后的重要指標(biāo)。關(guān)于PCNA表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，各家報(bào)道不一[4]，本研究得出此結(jié)論，我們認(rèn)為可能是因?yàn)镻CNA與細(xì)胞增殖有關(guān)，而不直接表腫瘤組織的侵襲性，所以腫瘤體積越大PCNA表達(dá)越強(qiáng)，但不斷的生長和增殖是腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的前提，當(dāng)多個(gè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)，PCNA過表達(dá)較明顯，因此仍可作為判斷乳腺癌預(yù)后的重要指標(biāo)。

乳腺癌組織的研究表明，MMP-2活性增強(qiáng)，基質(zhì)水解蛋白酶增加，是乳腺癌細(xì)胞侵襲行為的生化機(jī)制。Nakopoulou[5]研究了135例浸潤性乳腺癌，發(fā)現(xiàn) MMP-2與腫瘤體積（Φ≥2cm）有明顯相關(guān)性。Li HC[6]研究了270例淋巴結(jié)陰性的乳腺癌病人，發(fā)現(xiàn)MMP-2陽性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)顯著相關(guān)（P＜0.001），與腫瘤體積相關(guān)（P＜0.05）。

本試驗(yàn)陽性表達(dá)率為75%。按腋窩淋巴結(jié)狀況分組中，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組MMP-2陽性表達(dá)率為63.0%，而腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組為100.0%，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.01）。這與眾多已知的實(shí)驗(yàn)結(jié)果吻合，說明MMP-2可能通過降解細(xì)胞外基質(zhì)、破壞基底膜，使腫瘤細(xì)胞更易于浸潤淋巴管，加速腫瘤向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

此次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明在孕激素受體陽性的乳腺癌中，PCNA與MMP-2與一些相應(yīng)的臨床相關(guān)參數(shù)有關(guān)，而這些指標(biāo)都對(duì)乳腺癌的治療預(yù)后判斷有指導(dǎo)意義，PCNA與MMP-2有希望成為指導(dǎo)乳腺癌治療，評(píng)價(jià)乳腺癌預(yù)后的分子生物學(xué)指標(biāo)。PCNA，MMP-2在乳腺癌浸潤轉(zhuǎn)移中的作用及其表達(dá)的意義，使其有望成為預(yù)測乳腺癌內(nèi)分泌治療效果和預(yù)后的指標(biāo)，為乳腺癌的個(gè)體化治療提供重要參考。

[1]牛昀,郎榮剛,傅西林,等.乳腺浸潤性小葉癌中PCNA和P53蛋白表達(dá)及臨床意義[J].中國腫瘤臨床,1999,26(12):889-891.

[2]Takashima T,Onoda N,Ishikawa T,et al.Proliferating cell nuclear antigen labeling index and p53 expression predict outcome for breast cancer patients with four or more lymph node metastases[J].Int J Mol Med,2001,8(2):159－163.

[3]朱亞明,袁剛.結(jié)腸癌中p53蛋白、PCNA表達(dá)與預(yù)后的探討[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2009，15(30):1-2.

[4]蘇文利，熊斌.增殖細(xì)胞核抗原在大腸癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].中國腫瘤臨床與康復(fù)，2004,11(6):501-502.

[5]Nakopoulou L,Tsirmpa I,Alexandrou P,et al.MMP-2 protein in invasive breast cancer and the impact of MMP-2/TIMP-2 phenotype on overall survival[J].BreastCancer Res Treat,2003 Jan,77(2):145-155.

[6]Li HC,Cao DC,Liu Y,et al.Prognostic value of matrix metalloproteinases(MMP-2 and MMP-9) in patients with lymph node negative breast carcinoma[J].Breast Cancer ResTreat,2004 Nov,88(1):75-78.