韓 耘,封柯宇,李洪濤,李叔偉,田 偉,王麗新,陶淑清,龐雅君,鄭德富

(哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司,黑龍江哈爾濱150030)

雞新城疫是禽類主要病毒性傳染病之一,對(duì)養(yǎng)雞業(yè)的危害極大(蔡寶祥等,1993)。近年來(lái),ND在我國(guó)有普遍蔓延的趨勢(shì),目前許多雞場(chǎng)仍將采用接種疫苗的方式來(lái)預(yù)防該病。對(duì)于新城疫疫苗,我國(guó)主要是引進(jìn)國(guó)外的一些弱毒株,如V4株、LaSota株和B1株等(嚴(yán)維巍等,2000),由于弱毒苗成本低廉,操作方便等因素,我國(guó)許多養(yǎng)雞場(chǎng),尤其是肉用雞場(chǎng),廣泛采用弱毒苗免疫來(lái)預(yù)防雞ND。目前用普通雞胚生產(chǎn)疫苗成本較低,但疫苗質(zhì)量卻比不上SPF胚蛋。用普通雞胚制造疫苗存在主要問(wèn)題是外源病原的污染,這種污染既有細(xì)菌、支原體,也有病毒的可能性。為了摸清SPF胚蛋和普通胚蛋在疫苗生產(chǎn)方面所存在的差異,本試驗(yàn)對(duì)這兩種胚蛋生產(chǎn)疫苗在現(xiàn)地應(yīng)用中抗體效價(jià)的差別,進(jìn)一步說(shuō)明禽用疫苗SPF化的重要性,對(duì)提高疫苗的純凈度,減少疫苗質(zhì)量本身帶來(lái)的防疫隱患;提升疫苗生產(chǎn)行業(yè)的實(shí)力;增強(qiáng)國(guó)產(chǎn)生物制品的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力有重要的理論與現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF雞胚,7日齡商品雛雞200只,由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,21日齡現(xiàn)地商品蛋雛雞10 000只,某養(yǎng)殖場(chǎng)。200日齡產(chǎn)蛋雞8 000只,某雞場(chǎng)。

1.2 試驗(yàn)用藥 SPF疫苗:(哈藥疫苗)L系活疫苗20090942、20090940,L-H120活疫苗 200943,LH52活疫苗20090911。普通瓶疫苗:(國(guó)內(nèi)某廠家)L系活疫苗,L-H120活疫苗,L-H52活疫苗。枸櫞酸鈉、ND標(biāo)準(zhǔn)抗原及陽(yáng)性血清購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將雛雞、育成雞、產(chǎn)蛋雞分別隨機(jī)分成兩組,根據(jù)血凝抑制(HI)試驗(yàn)和疫苗病毒半數(shù)感染量(EID50)的測(cè)定,說(shuō)明新城疫SPF疫苗和普通疫苗對(duì)雞體免疫效果對(duì)比。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 雛雞疫苗效力對(duì)比試驗(yàn) 選7日齡商品雛雞200只,隨機(jī)分成兩組,每組100只,分別使用普通疫苗和SPF疫苗滴鼻免疫,免疫劑量1羽份/只。免疫前隨機(jī)選取20只雛雞采血測(cè)定基礎(chǔ)抗體,HI抗體效價(jià)為4.9。免疫后每周隨機(jī)選取20只檢測(cè)抗體HI效價(jià),連續(xù)檢測(cè)5周,并計(jì)算平均值。

1.4.2 現(xiàn)地育成雞疫苗效力對(duì)比試驗(yàn) 21日齡商品蛋雛雞10 000只,在相同飼養(yǎng)條件下隨機(jī)分成兩組,每組5 000只。根據(jù)孵化場(chǎng)提供免疫程序,分別使用普通瓶疫苗和SPF疫苗在21日齡、42日齡、84日齡分別免疫L系活疫苗、L-H120活疫苗、L-H52活疫苗飲水免疫,免疫劑量2羽份/只。免疫前隨機(jī)選取20只育成雞,采血測(cè)定母源抗體,HI抗體效價(jià)為3.8。免疫后連續(xù)10周從每組中隨機(jī)選取20只雞采血,測(cè)定兩組雞抗體HI效價(jià),并計(jì)算平均值。

1.4.3 現(xiàn)地產(chǎn)蛋雞疫苗效力對(duì)比試驗(yàn) 200日齡產(chǎn)蛋雞8 000只,雞群狀態(tài)良好,產(chǎn)蛋率正常。相同飼養(yǎng)條件下隨機(jī)分成兩組,每組4 000只,分別使用普通瓶疫苗和SPF新城疫L系活疫苗進(jìn)行飲水免疫,免疫劑量2羽份/只。免疫前隨機(jī)選取20只采血測(cè)定基礎(chǔ)抗體,HI抗體效價(jià)為8.9。免疫后連續(xù)10周從每組中隨機(jī)選取20只雞采血,測(cè)定兩組雞HI抗體效價(jià),并計(jì)算平均值。

1.4.4 疫苗病毒半數(shù)感染量(EID50)的測(cè)定 將雞胚孵化至10日齡,以500倍稀釋ND種毒,接種雞胚尿囊腔,繼續(xù)孵育96 h,其間每 6 h照胚1次,棄去死胚,記錄48 h,72 h和96 h死胚總數(shù)。在96 h收獲活胚尿囊液,測(cè)其血凝價(jià)和EID50。試驗(yàn)中兩種雞胚生產(chǎn)工藝、操作方法、生產(chǎn)環(huán)境和生產(chǎn)時(shí)間等方面均保持一致。

2 結(jié)果與分析

結(jié)果分析:由表1和圖1結(jié)果顯示新城疫SPF瓶疫苗在免疫后抗體效價(jià)明顯高于普通瓶疫苗,而且持續(xù)期較長(zhǎng)。

表1 SPF瓶和普通瓶L系活疫苗免疫7日齡雛雞HI抗體效價(jià)(log2)

結(jié)果分析:由表2和圖2結(jié)果表明免疫后所有雞都達(dá)到了較高的抗體效價(jià),但是用SPF新城疫弱毒活疫苗免疫雞產(chǎn)生的抗體效價(jià)明顯高于普通瓶疫苗,SPF疫苗免疫的雞產(chǎn)生的抗體更快,HI效價(jià)更高。

圖1 7日齡雛雞免疫SPF和普通L系活疫苗后HI抗體消長(zhǎng)規(guī)律

結(jié)果分析:由表3和圖3結(jié)果表明免疫后所有雞都達(dá)到了較高的抗體效價(jià),SPF新城疫弱毒活疫苗免疫雞產(chǎn)生的抗體效價(jià)明顯高于普通瓶 L系疫苗,免疫持續(xù)期更長(zhǎng)。

結(jié)果分析:由圖4和表4可知,采用SPF雞胚生產(chǎn)收獲的EID50比普通胚蛋高,是因?yàn)镾PF雞胚無(wú)新城疫母源抗體和其他抗體存在,避免了抗體的干擾,使得病毒繁殖良好。

3 討論

3.1 新城疫SPF疫苗與普通疫苗對(duì)雞體抗體效價(jià)對(duì)比 《規(guī)程》中明確規(guī)定,對(duì)于新城疫HI抗體的檢測(cè),要求在免疫后21 d免疫雞血清中的HI抗體≥6log2,本試驗(yàn)新城疫L系活疫苗HI抗體滿足規(guī)程。本試驗(yàn)使用新城疫SPF L系活疫苗和普通L系活疫苗對(duì)7日齡雞進(jìn)行免疫,并于7、14、21、28、35、42日齡檢測(cè)瓊擴(kuò)抗體,結(jié)果顯示SPF疫苗在免疫后抗體效價(jià)明顯高于普通瓶疫苗,而且持續(xù)期較長(zhǎng),并且在28日齡抗體效價(jià)達(dá)到高峰,普通疫苗:ND抗體為6.1log2;SPF疫苗:ND抗體為6.8log2。

表2 SPF瓶和普通瓶L系活疫苗免疫21日齡雛雞后的HI抗體效價(jià)(log2)

表3 SPF瓶和普通瓶L系活疫苗免疫200日齡產(chǎn)蛋雞后的HI抗體效價(jià)(log2)

圖2 21日齡雛雞免疫SPF和普通L系活疫苗后HI抗體消長(zhǎng)規(guī)律

圖3 產(chǎn)蛋免疫SPF瓶和普通瓶疫苗后的新城疫HI抗體消長(zhǎng)規(guī)律

表4 疫苗病毒半數(shù)感染量(EID50)

圖4 新城疫SPF疫苗和新城疫普通疫苗病毒半數(shù)感染量對(duì)比

對(duì)21日齡雛雞進(jìn)行免疫,免疫抗體監(jiān)測(cè)表明,在免疫2周后,ND抗體達(dá)到了最高,SPF疫苗ND抗體為9.8log2;普通疫苗ND抗體為9log2。SPF疫苗ND抗體在達(dá)到高峰后一直持續(xù)較高水平,免疫后第10周ND抗體保持較高水平,ND抗體也在7.1log2以上。通過(guò)產(chǎn)蛋雞的疫苗免疫雞免后15 d～60 d的抗體檢測(cè):ND效價(jià)＞7.8log2、VA效價(jià)＞21.5,主要因?yàn)槭荢PF疫苗是用SPF雞胚制作的,疫苗具有較高效價(jià),為后代提供母源抗體防止ND對(duì)雛雞的感染。

試驗(yàn)還通過(guò)對(duì)200日齡的產(chǎn)蛋雞進(jìn)行免疫,免疫后三周抗體效價(jià)達(dá)到最高峰,SPF疫苗ND抗體為10.8log2;普通疫苗ND抗體為10.1log2,結(jié)果表明,免疫后所有雞都達(dá)到了較高的抗體效價(jià),但SPF新城疫弱毒活疫苗免疫雞產(chǎn)生的抗體效價(jià)明顯高于普通瓶疫苗,免疫持續(xù)期更長(zhǎng)。

3.2 新城疫SPF疫苗與普通疫苗病毒半數(shù)感染量對(duì)比 普通胚蛋接毒后死胚率比SPF雞胚低,其原因是因?yàn)槠胀ㄅ叩按嬖谀冈纯贵w中和了部分病毒,降低了病毒對(duì)雞胚的致病能力。因此在使用SPF蛋生產(chǎn)疫苗時(shí),針對(duì)其母源抗體為零的特征,建議適當(dāng)增加接毒稀釋倍數(shù),通過(guò)減小病毒數(shù)量來(lái)降低致病力,從而降低死胚率和提高生產(chǎn)利用率。

采用SPF雞胚生產(chǎn)收獲的毒液血凝價(jià)和EID50比普通胚蛋高,主要原因是SPF雞胚無(wú)新城疫母源抗體和其他抗體存在,避免了抗體的干擾,使得病毒繁殖良好。采用SPF雞胚所生產(chǎn)的疫苗質(zhì)量高,不僅免疫效力較高,而且有效地避免了雞白血病,支原體等病原的傳播。

3.3 新城疫SPF疫苗與普通疫苗比較 SPF疫苗與普通疫苗相比,其生產(chǎn)工藝過(guò)程完全一致,主要區(qū)別在于疫苗的內(nèi)在質(zhì)量。

種蛋來(lái)源生產(chǎn)SPF疫苗原材料采用SPF種蛋生產(chǎn),SPF雞種蛋不含有雞新城疫、雞傳染性腔上囊病等近20種疫病抗體,種蛋純凈,適于培養(yǎng)病毒(吳長(zhǎng)新等,2003),從根本上剔除了多種特定抗體或病原的干擾;用SPF雞胚,可杜絕母源抗體的干擾,獲得在非SPF雞胚中達(dá)不到的病毒滴度,提高了單胚抗原的產(chǎn)出量,不僅保證疫苗的純凈,而且生產(chǎn)過(guò)程中可大大提高疫苗的效力。原材料不帶有多種特定病源微生物和寄生蟲,而且在疫苗生產(chǎn)過(guò)程中,增加了抗原超濾工藝,去除了抗原中的雜質(zhì)和異體蛋白,從原材料和生產(chǎn)工藝雙重環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)管,提高純凈度,減少應(yīng)激反應(yīng),讓產(chǎn)品使用更安全。

疫苗檢驗(yàn)上的要求按照農(nóng)業(yè)部2000年版《獸用生物制品規(guī)程》的規(guī)定要求,對(duì)生產(chǎn)疫苗的原材料(動(dòng)物、組織、胚胎、細(xì)胞培養(yǎng)物)需做外源病毒檢驗(yàn)。而用SPF動(dòng)物的組織、胚胎、細(xì)胞培養(yǎng)物制備的疫苗可不做外源病毒檢驗(yàn)。根據(jù)疫苗生產(chǎn)所用種蛋來(lái)源看,普通種蛋很難保證不含外源病毒,SPF種蛋無(wú)雜菌污染,因此普通疫苗不如SPF疫苗純凈(靖寧,2007)。

質(zhì)量上的區(qū)別從以上所述可以看出,普通疫苗很難根除外源污染,動(dòng)物的一些傳染病,如禽類的雞白痢、雞支原體病、禽白血病、禽腦脊髓炎、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生綜合征、禽腺病毒病、產(chǎn)蛋下降綜合征等可經(jīng)蛋傳播,如果這些病原不根除,很有可能經(jīng)蛋帶入疫苗而傳染給接種疫苗的雞群。而SPF疫苗所含有的抗原純凈。在疫苗接種雞群后,普通苗的免疫要受到外源病毒的干擾而產(chǎn)生部分免疫抑制,影響免疫效果,這樣就需要反復(fù)強(qiáng)化免疫;SPF疫苗可以避免外界病毒干擾,免疫效果好,達(dá)到免疫防病的目的。

雖然接種普通疫苗的雞群可能不出現(xiàn)明顯的癥狀,即便是普通疫苗病毒產(chǎn)量高或抗體增長(zhǎng)高,但如果有攜帶外源病毒可在雞群中緩慢傳播,對(duì)雞群的生長(zhǎng)、發(fā)育不利,也會(huì)影響正常的疫苗免疫接種,從而造成惡性循環(huán),一代影響一代,導(dǎo)致整個(gè)雞群飼料報(bào)酬過(guò)高,增加飼養(yǎng)成本,影響整個(gè)養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。而使用SPF疫苗,正好可以解決這些問(wèn)題,也有利于根除某些傳染病的流行,使養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展。

價(jià)格比較,因飼養(yǎng)SPF雞條件要求很高,所以SPF疫苗比普通疫苗成本要高,但SPF疫苗無(wú)特定外源病原干擾,純凈度高,免疫效果好,可據(jù)監(jiān)測(cè)減少免疫次數(shù),同時(shí)減少治療藥物使用的成本,達(dá)到理想的養(yǎng)殖生產(chǎn)性能,從總體上看,使用SPF疫苗還是比普通疫苗性價(jià)比更高。

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