伍 莉,朱周福

(1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系,重慶榮昌402460;2.重慶市獸藥工程技術(shù)研究中心,重慶北碚400715)

鴨病毒性肝炎是雛鴨的一種傳播迅速的高致死性病毒病,本病可由5種不同類型的病毒引起,稱為鴨甲肝病毒(duck hepatitis A virus,DHAV)的1、2、3型和鴨星狀病毒的2個(gè)型。這5種獨(dú)立的病原體,對(duì)患病雛鴨造成相似的病理變化,均以引起肝炎為其主要特征。DHAV-1呈世界性分布,在我國(guó),1958～1962年發(fā)生了DHAV-1的初次流行,20世紀(jì)80年代初期起本病在我國(guó)再次流行,其后,各地疫情此起彼伏。本試驗(yàn)以DHAV-1標(biāo)準(zhǔn)毒株感染健康的花邊鴨,對(duì)感染雛鴨的肝、脾、腎、胰等器官組織變化進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察,旨在尋求DHAV-1的病理變化規(guī)律,為該病發(fā)病機(jī)理的研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 100只3日齡未接種疫苗、其親代也未接種鴨病毒性肝炎疫苗的健康花邊雛鴨,購(gòu)于榮昌縣清升鎮(zhèn)孵化場(chǎng),經(jīng)預(yù)試驗(yàn)證明該場(chǎng)雛鴨為鴨肝炎病毒敏感鴨。隨機(jī)分成感染組50只,對(duì)照組50只,并分別飼養(yǎng),自由采食、飲水,飼養(yǎng)觀察2 d,鴨群精神狀態(tài)、采食、飲水均正常,羽毛蓬松有光澤。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)毒株 DHAV-1型標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株,由重慶永健生物技術(shù)有限公司實(shí)驗(yàn)中心提供,經(jīng)雛鴨半數(shù)致死量試驗(yàn),確定毒株的半數(shù)致死量LD50為10-4/mL。

1.3 人工感染方法 6日齡花邊鴨雛鴨50只,每只雛鴨腿部肌肉注射上述制備的肝組織勻漿0.2 mL;對(duì)照組雛鴨50只,每只雛鴨腿部肌肉注射滅菌生理鹽水0.2 mL。

1.4 組織取材及處理 于感染后 12、24、48、72、96、168、336 h,在對(duì)照組和感染組中各取5只雛鴨剖殺,分別取其心 、腦、肝、脾 、腎 、胰、腔上囊等組織,包音氏(Bouin′s)固定液固定,常規(guī)石蠟包埋切片,H.E.染色,光鏡觀察。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀 臨床觀察發(fā)現(xiàn),雛鴨接毒前精神狀況良好,采食、飲水正常。接毒后12～24 h,大部分雛鴨表現(xiàn)呆滯,精神沉郁,垂翅縮頸拱背,不愿走動(dòng),采食量、飲水量明顯減少。一部分鴨出現(xiàn)神經(jīng)癥狀,表現(xiàn)為精神緊張,對(duì)外來(lái)刺激敏感,抽搐,運(yùn)動(dòng)失調(diào)等;一部分鴨開(kāi)始臥地打滾,頭往后背,兩腿呈劃水樣姿勢(shì)。神經(jīng)癥狀出現(xiàn)后20～120 min雛鴨陸續(xù)死亡,死亡雛鴨表現(xiàn)為典型的角弓反張姿勢(shì)。雛鴨從接毒后24 h開(kāi)始死亡,死亡高峰期為接毒后24～48 h,接毒后96 h死亡停止。

2.2 剖檢病理變化 死亡雛鴨表現(xiàn)為:肝臟腫大、質(zhì)地易脆,呈淡紅色,表面密布有點(diǎn)狀、斑點(diǎn)狀出血或壞死灶(見(jiàn)中插彩版圖1A),切開(kāi)肝臟可見(jiàn)切面外翻、多汁,結(jié)構(gòu)模糊;膽囊明顯腫大,膽汁充盈呈墨綠色;心包積液,心肌色淡變軟,心室擴(kuò)張;脾臟柔軟、腫大,表面呈紅白相間的斑駁狀,切面外翻、多汁(見(jiàn)中插彩版圖1B);胰臟腫大,表面有出血,有的表面分布細(xì)小的白色病灶;腎臟呈黃白色、腫大,表面血管明顯(見(jiàn)中插彩版圖1C);部分雛鴨腔上囊腫大;腦表面血管明顯易見(jiàn)、淤血,擴(kuò)張如樹(shù)枝狀(見(jiàn)中插彩版圖1D);其他臟器未見(jiàn)眼觀變化。

2.3 病理組織學(xué)變化 肝臟:接毒后24 h雛鴨,肝細(xì)胞輕度腫脹、變性,胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不等的空泡,輕度淤血,嚴(yán)重者呈氣球樣,胞核淡染、濃縮或消失,病變肝組織間分布有大量聚集成團(tuán)的紅細(xì)胞,局部組織有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主)(見(jiàn)中插彩版圖1E)。接毒后48 h,肝細(xì)胞高度腫脹,多數(shù)細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)大的空泡,并見(jiàn)有局灶性出血和嗜酸性小體。接毒后72～168 h,肝細(xì)胞呈廣泛嚴(yán)重的水泡變性,匯管區(qū)小膽管增生,淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。

對(duì)照組雛鴨肝組織結(jié)構(gòu)正常,未見(jiàn)異常組織病理變化。

胰臟:接毒后24 h,腺泡之間水腫,血管擴(kuò)張、充血,在血管周圍有大量淋巴樣細(xì)胞呈結(jié)節(jié)狀或彌漫性增生(見(jiàn)中插彩版圖1F)。接毒后24～48 h,胰臟均出現(xiàn)大小不等的壞死灶,腺細(xì)胞呈均質(zhì)紅染,其中可見(jiàn)濃縮或碎裂的細(xì)胞核,在血管或胰島附近出現(xiàn)大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。接毒后48 h,胰腺細(xì)胞間分布的空泡數(shù)量明顯增多,有大小不一的一個(gè)至多個(gè)壞死灶,壞死灶中有淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn);接毒后72～168 h,胰腺外分泌細(xì)胞間的空泡數(shù)量逐漸減少,但可見(jiàn)胰腺血管壁增厚,血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,突出于管腔,血管周圍和胰腺細(xì)胞間也出現(xiàn)中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),數(shù)量逐漸增多。接毒后336 h,胰腺細(xì)胞間空泡消失,但細(xì)胞及血管周圍有明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。

對(duì)照組雛鴨胰臟結(jié)構(gòu)正常,未見(jiàn)異常組織病理變化。

脾臟:接毒后24 h,脾臟組織結(jié)構(gòu)紊亂,紅白髓不易分辯,網(wǎng)狀細(xì)胞腫大呈氣球樣,胞核濃縮、碎裂甚至消失(見(jiàn)中插彩版圖1G)。接毒后48 h,脾臟除有上述病變外,還表現(xiàn)為單核巨噬細(xì)胞活躍,在脾組織及血管中有大量的含吞噬顆粒的巨噬細(xì)胞和多核巨細(xì)胞。接毒后72～168 h,脾臟紅、白髓結(jié)構(gòu)清楚,脾小體明顯且體積增大、數(shù)量增多,淋巴細(xì)胞數(shù)目增多。

對(duì)照組雛鴨脾臟結(jié)構(gòu)正常,未見(jiàn)異常組織病理變化。

腎臟:感染后不同時(shí)期雛鴨,腎臟均表現(xiàn)較一致的病變,可見(jiàn)大部分腎小管結(jié)構(gòu)紊亂,嚴(yán)重淤血,腎小管上皮細(xì)胞腫脹、脫落,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大小不一的空泡,核固縮,管腔縮小至消失,尤以接毒后24 h,受損的腎小管數(shù)量多,范圍廣,程度嚴(yán)重。有的腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)溶解,細(xì)胞核消失(見(jiàn)中插彩版圖1H),腎小管僅殘存基底膜;有的腎小管擴(kuò)張,管腔內(nèi)有圓形均質(zhì)紅染物,有的腎小體淤血,有蛋白漿液滲出;在腎小葉邊緣有聚集成團(tuán)的紅細(xì)胞和淋巴細(xì)胞;血管內(nèi)充滿紅細(xì)胞。

對(duì)照組雛鴨腎臟結(jié)構(gòu)正常,未見(jiàn)異常組織病理變化。

3 討論

3.1 鴨病毒性肝炎的病理變化特點(diǎn) 本試驗(yàn)對(duì)死亡雛鴨的組織病理學(xué)檢查結(jié)果表明,鴨肝炎病毒主要侵害肝、胰、脾、腎等組織,造成實(shí)質(zhì)器官變性壞死,并在不同階段呈現(xiàn)較明顯的差異。接毒后12 h,這些臟器組織以變性為主;接毒后24 h呈現(xiàn)明顯的壞死性病變;而接毒后72～168 h,則出現(xiàn)較為明顯的增生性變化。試驗(yàn)中DHAV-1感染雛鴨引起鴨肝炎的發(fā)生,疾病潛伏期短、發(fā)病急、病程短,此結(jié)果與蘇敬良[2]和胡薛英等[3]人報(bào)道的結(jié)果基本一致。結(jié)合其他學(xué)者[4-5]所作DHAV-1感染雛鴨的血清及肝組織生化指標(biāo)的研究結(jié)果分析,接毒后24 h,血清生化指標(biāo)表現(xiàn)為轉(zhuǎn)氨酶升高等特性,此時(shí)病毒在各器官組織中廣泛分布,機(jī)體結(jié)構(gòu)與功能均致嚴(yán)重的病理?yè)p傷;但接毒72 h后,血清指標(biāo)漸趨正常,病毒分布亦減少。綜合上述動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,不難解釋在臨床上為何雛鴨感染DHAV-1后死亡高峰為24～48 h,而72 h后,病鴨死亡逐漸減少。

3.2 鴨病毒性肝炎引起組織病變的原因 據(jù)目前所知,脾臟受抗原刺激引起細(xì)胞免疫反應(yīng)時(shí),T淋巴細(xì)胞大量增殖,動(dòng)脈周圍淋巴鞘明顯增厚[6]。本試驗(yàn)研究顯示,在接毒后24 h,脾淋巴細(xì)胞明顯減少,網(wǎng)狀細(xì)胞變性、壞死,表明此時(shí)脾臟受損,免疫功能受到抑制,因而病毒大量增殖。隨感染時(shí)間延長(zhǎng),接毒后72 h,脾臟脾小體體積增大、淋巴細(xì)胞數(shù)目增多,表明機(jī)體的免疫反應(yīng)增強(qiáng)。據(jù)Davis和Hanant報(bào)道2日齡鴨免疫后4 d可產(chǎn)生中和抗體,新生雛鴨肌肉注射DHAV-1型肝炎病毒的毒株后3 d內(nèi)產(chǎn)生抵抗力[7],此時(shí)可能正是抗體水平升高的時(shí)候。由于免疫功能的增強(qiáng),使病毒增殖受到限制,機(jī)體受損的組織細(xì)胞開(kāi)始修復(fù),血液某些生化指標(biāo)逐漸趨于正常,因而促使機(jī)體趨于恢復(fù)。殷震等[8]認(rèn)為,體液免疫是抗 DHAV-1感染的主要因素,所以在DVH發(fā)病之后,注射高免血清和高免卵黃液等輸入抗體的方法可以治療該病,有效地控制疾病繼續(xù)發(fā)展。

[1]李永明,張時(shí)彥,溫俊板,等.雛鴨病毒性肝炎的研究[J].貴州農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào),1990,9(2):43-48.

[2]蘇敬良,黃瑜,賀榮連,等.新型鴨肝炎病毒的分離及初步鑒定[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,2002,32(1):15-16.

[3]胡薛英,蘇敬良,程國(guó)富,等.新型鴨肝炎病毒試驗(yàn)感染雛鴨的組織病理學(xué)[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2002,22(6):549-551.

[4]王丙云,趙海全,馮軍,等.不同毒力鴨肝炎病毒對(duì)雛鴨肝臟抗氧化功能的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2002,22(5):450-452.

[5]Yates D M,Portillo V,Wolstenholme A J,et al.T he avermectin receptors of Haemonchus contortus and Caeno rhabditis elegans[J].International J Parasitology,2003,33(11):1183-1193.

[6]上海第一醫(yī)學(xué)院.組織學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1981:590.

[7]卡爾尼克B W.禽病學(xué)[M].高福,劉文軍,譯.9版.北京:北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1991:510-519.

[8]殷震,劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,1997:510-511.