于 蕾，賀春朋，張小敏，于 娜，謝樂瓊

(1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱 150076;2.國家教育部抗腫瘤天然藥物工程研究中心，哈爾濱 150076)

野西瓜(Capparis spinosa L.)為山柑科山柑屬植物，又稱老鼠瓜(新疆)、狼西瓜(維吾爾名譯意)、刺山柑、槌果藤等，在我國主要產(chǎn)于新疆(北疆到東疆，烏魯木齊到烏蘇一帶最常見)、西藏(札達)［1］.近年來，國內(nèi)外對野西瓜的化學(xué)和藥理研究逐漸增多，據(jù)文獻報道，野西瓜具有保肝作用［2］、抗氧化應(yīng)激［3］、降血糖［4］、保護軟骨細胞作用［5］、保護成纖維細胞作用［6］、抑制腫瘤細胞生長作用等作用［7］.采用DPPH·法比較野西瓜不同極性萃取部位的抗氧化活性，并對其中抗氧化活性部位——乙酸乙酯部位進行分離純化，以其找到野西瓜抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ).

1 儀器與材料

野西瓜購于新疆烏魯木齊，經(jīng)黑龍江省藥檢所王清華教授鑒定為山柑科山柑屬植物野西瓜(Capparis spinosa L.)的成熟干燥果實.Bruker－500MHz型核磁共振儀(TMS內(nèi)標，德國Bruker公司);UV－1601紫外可見雙光分光光度計(日本島津公司).薄層色譜及制備薄層色譜用硅膠GF－254(青島海洋化工廠);柱色譜用硅膠(200－300目，青島海洋化工廠);DPPH·(Sigma公司);維生素C(哈藥集團中藥二廠).

2 提取、分離及抗氧化活性測定

2.1 野西瓜果實萃取物的提取及抗氧化活性的比較

取野西瓜干燥果實5 kg粉碎，加8倍量95%乙醇浸泡24 h，再用熱回流法提取3次，合并藥液減壓濃縮，回收溶劑，藥膏揮至無醇味，得浸膏300 g.加水適量使其混懸，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚組分80 g，氯仿組分40 g，乙酸乙酯組分57 g，正丁醇組分90 g.抗氧化活性用清除DPPH·自由基能力大小表示［8］.利用DPPH溶液的特征紫紅色團517 nm的吸收峰，用UV－1601型紫外－可見分光光度測定加入維生素C或野西瓜各萃取物后A517吸收的下降表示其對有機自由基的清除能力［9］.

實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，石油醚萃取部位的DPPH清除能力為1.98mL/mg，氯仿部位的DPPH清除能力為2.125mL/mg，乙酸乙酯部位的清除能力為6.25mL/mg，正丁醇部位的清除能力為2.34mL/mg，水層的清除能力為3.02mL/mg，的清除能力，由于VC的抗氧化作用明顯、清除自由基顯著，因此用VC作為對照組.由上可知，根據(jù)自由基清除能力大小，不同供試樣品對DPPH·的清除能力次序為VC＞乙酸乙酯萃取物＞水提取物＞正丁醇萃取物＞氯仿萃取物＞石油醚萃取物，所以野西瓜抗氧化活性部位為其乙酸乙酯萃取部位.

2.2 野西瓜抗氧化活性部位的單體分離、結(jié)果鑒定及其抗氧化活性測定

取乙酸乙酯萃取物(57.0 g)反復(fù)硅膠吸附柱層析，以氯仿－甲醇梯度洗脫，TLC跟蹤檢識，紫外熒光顯色，碘蒸氣顯色，茴香醛顯色，合并相同組分.Fr.Ⅰ經(jīng)硅膠吸附柱層析，石油醚－乙酸乙酯(10∶1)洗脫得到化合物1，F(xiàn)r.Ⅱ經(jīng)硅膠吸附柱層析，石油醚－乙酸乙酯(4∶1)，凝膠柱得到化合物2和3.

化合物1(Q1):白色無定型粉末(甲醇)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、乙醚中，能溶于甲醇，難溶于水.1H－NMR(DMSO 500 MHz)，顯示4個甲基信號 1.819(3H，s)，1.239(3H，d，J=6.5 Hz)，0.914(3H，s)，0.934(3H，s)，2 個偕偶的亞甲基信號 2.428(1H，d，J=17 Hz)，2.369(1H，d，J=17 Hz)，1個糖端基質(zhì)子信號4.188(1H，d，J=5.5 Hz)，1 個連氧次甲基氫信號4.749(1H，m)，1個烯氫信號2個反式偶合的烯氫信號 5.681(1H，d，J=3.5 Hz)，5.786(1H，s)，5.018(1H，d，J=3.5 Hz).數(shù)據(jù)歸屬信息詳見表1，與文獻對照［10］基本一致，因此鑒定該化合物為長壽花糖苷，分子式為C13H2OO3，結(jié)構(gòu)圖見圖1.

圖1 化合物1結(jié)構(gòu)圖

表1 化合物1的氫譜數(shù)據(jù)

化合物2(Q2):白色晶體(甲醇)，易溶于氯仿、乙酸乙酯、乙醚中，能溶于甲醇.溴甲酚綠反應(yīng)陽性，從而現(xiàn)示結(jié)構(gòu)中含有羧基.1H－NMR(DMSO 500MHz)，顯示一個羧基信號 12.19(2H，s)，一個亞甲基信號2.42(4H，q).數(shù)據(jù)歸屬信息詳見表2，與文獻對照［11］基本一致，因此鑒定該化合物為琥珀酸，分子式為C4H6O4，結(jié)構(gòu)圖見圖2.

圖2 化合物2結(jié)構(gòu)圖

表2 化合物2的氫譜數(shù)據(jù)

化合物3(Q3):淡黃色油狀(甲醇)，易溶與氯仿、乙酸乙酯.紫外燈下無暗斑.碘化秘鉀顯紅色，1H－NMR(DMSO 500MHz)，顯示存在3個甲基信號，氮上兩個甲基信號分別為 δ2.705，δ3.367，且為單峰.δ3.751為連氧甲基信號，其余氫信號的偶合裂分說明存在環(huán)上氫信號.數(shù)據(jù)歸屬信息詳見表 3，與文獻對照［11－12］基本一致，因此鑒定該化合物為水蘇堿甲酯，分子式為C8H16NO2，結(jié)構(gòu)圖見圖3.

圖3 化合物3結(jié)構(gòu)圖

表3 化合物3的氫譜數(shù)據(jù)

同樣采用DPPH·法對三個分離出來的單體化合物進行抗氧化活性的測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)化合物1長壽花糖苷的清除自由基效果顯著，清除率達到了31.14%.琥珀酸和水蘇堿甲酯的清除效果不明顯，基本可以忽略不計.因此可以得出結(jié)論:從乙酸乙酯部位分離得到的3個單體化合物中，清除能力最強的是長壽花糖苷，說明長壽花糖苷是乙酸乙酯部位的抗氧化活性成分之一.

3 討論

本實驗采用95%乙醇熱回流對野西瓜果實進行初步提取，95%乙醇能夠充分提取果實中的有效成分，提取液濃縮干燥，用石油醚脫脂后，分別用石油醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇萃取，氯仿的極性比石油醚大些，可是在實驗結(jié)果上可以看出清除能力的改變并不是變化很大，說明氯仿部位的清除能力沒有隨著極性的增大而增大.乙酸乙酯部位的清除能力明顯比石油醚和氯仿部位的高，說明乙酸乙酯部位里的抗氧化成分比石油醚部位和氯仿部位的數(shù)目多或者活性強，極性部位正丁醇部位的清除能力沒有隨著極性的變大而增大，說明正丁醇部位的抗氧化成分少或者活性弱.水層的清除能力也沒有乙酸乙酯部位的高，可能是水層的成分抗氧化能力弱的原因.VC的清除能力相對于其他部位來說很高，因為VC是抗氧化劑，在日常生活中可以用來預(yù)防氧化，由于其抗氧化作用明顯、清除自由基顯著，因此用VC作為對照組.由此，實驗確定了野西瓜抗氧化活性部位為乙酸乙酯部位.

接下來對乙酸乙酯部位進行單體化合物的分離與結(jié)構(gòu)鑒定，共分離得到3個化合物，根據(jù)理化常數(shù)，光譜數(shù)據(jù)以及核對文獻等手段，分別鑒定為化合物1長壽花糖苷，化合物2為琥珀酸，化合物3為水蘇堿甲酯.在對3個單體化合物的抗氧化活性測定中發(fā)現(xiàn)，長壽花糖苷清除能力最強，并且其消除率高于乙酸乙酯部位，說明長壽花糖苷是乙酸乙酯部位的活性成分之一.

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