吳楚棠 劉斌 索志榮

銀柴顆粒是由柴胡、忍冬藤、枇杷葉、薄荷、蘆根五味中藥制備而成的中成藥[1]。具有清熱、解表、止咳的功效。主要用于風(fēng)熱感冒，發(fā)熱咳嗽。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第十三冊中[2]?，F(xiàn)行的銀柴顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系只有對銀柴顆粒中的有效成分薄荷的含量進(jìn)行測定的規(guī)定，文獻(xiàn)主要采用薄層層析、氣相色譜等檢測方法[3-6]，但是對銀柴中的皂苷類成分的含量缺乏必要的控制，這為其應(yīng)用的安全性和有效性帶來了極大的不便。本文以銀柴顆粒為研究對象，采用簡便、快捷、準(zhǔn)確的檢測方法對其中柴胡總皂苷類成分的含量進(jìn)行測定，為進(jìn)一步完善的該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其合理使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試藥

柴胡皂苷a對照品：由中國藥品生物制品檢定所提供，純度均大于99.5%；水為超純水，對二甲氨基苯甲醛(Fisher)、甲醇、無水乙醇、濃氨水、磷酸均為分析純。

1.2 儀器

UNIC7200型可見分光光度計(jì)(龍尼柯儀器有限公司)；UV-2102C 型紫外可見分光光度計(jì)(龍尼柯儀器有限公司)；FA1104電子天平(上海上天儀器有限公司，最小稱量0.0001 g)；優(yōu)普超純水制造系統(tǒng)(上海優(yōu)普實(shí)業(yè)有限公司)；KQ5200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HH-S4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)；SENCO R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申順生物科技有限公司)。

1.3 樣品

三個(gè)不同廠家的銀柴感冒顆粒購自醫(yī)藥超市，規(guī)格為每袋裝12 g，廠家及批次分別為：太極重慶制藥二廠(100326)、太極南充制藥廠(091230)、四川彩虹制藥廠(091221)。

1.4 溶液制備

1.4.1 供試品溶液 將銀柴顆粒研細(xì)，取本品粉末1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入含5%濃氨試液的60 % (V/V)甲醇溶液10 ml，密塞，浸泡30分鐘，30℃水溫超聲處理(功率200 W，頻率40 kHz) 30分鐘，濾過，用甲醇20 ml分2次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取其續(xù)濾液，即得[7]。

1.4.2 對照品溶液 準(zhǔn)確稱取對照品柴胡皂苷a 3.8 mg，置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶液定溶，搖勻，得對照品溶液，作為儲(chǔ)備液，其他不同濃度的對照品溶液由儲(chǔ)備液經(jīng)甲醇溶液稀釋得到。

1.5 測定方法

以甲醇溶液5 ml作為空白溶液，供試品溶液與對照品溶液各精密吸取0.2 ml，分別加入0.1%對二甲氨基苯甲醛乙醇液0.1 ml，70℃溫?zé)?0分鐘，取出放冷，加入磷酸4.0 ml，70℃反應(yīng)30分鐘，放冷，在波長545 nm處分別測定供試品溶液與對品溶液的吸光度(A)，計(jì)算，即得[8]。

2 方法學(xué)考察與樣品測定結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取對照品溶液適量，置10 ml具塞比色管中，加甲醇至1 ml，配制成濃度分別為：0.038、0.076、0.114、0.152、0.190、0.228、0.266、0.304、0.342、0.380 mg·ml-1的對照品溶液。分別精密移取 0.2 ml置10 ml具塞比色管中，精密加入0.1%對二甲氨基苯甲醛乙醇溶液0.1 ml搖勻，于70℃反應(yīng)10分鐘，取出，放冷，加入磷酸4.0 ml，70℃反應(yīng)30分鐘，取出，放冷，于545 nm處測定吸收度?；貧w方程為: Y=0.4458 C+0.0068,r=0.9997。其中Y為吸光度，C為柴胡皂苷a對照品的濃度(mg·ml-1)。表明柴胡皂苷在0.038～0.380 mg·ml-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度考察

取供試品溶液(批號(hào)：100326)，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行測定，結(jié)果吸光值的RSD=2.4%,表明儀器精密度符合要求。

2.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱量同一批號(hào)的樣品6份(批號(hào)：100326)，按“1.4”項(xiàng)的操作制備供試品溶液，進(jìn)行測定，總皂苷含量的RSD為3.0%，表明該方法的重現(xiàn)性較好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取適量供試品溶液(批號(hào)：100326)在室溫下放置，按上述條件每隔2小時(shí)測定1次，在8小時(shí)內(nèi)共測定5次，記錄柴胡總皂苷的吸光值，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=2.9%，表明樣品在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 加樣回收率試驗(yàn)

精確稱取已測得含量的銀柴顆粒樣品(批號(hào)：100326)粉末約0.5 g，共6份，每份分別準(zhǔn)確加入柴胡皂苷a對照品儲(chǔ)備液30 μl，按“2.1”項(xiàng)方法制備所需溶液后，按上述測定方法測得其中柴胡皂苷a的含量,并計(jì)算平均加樣回收率為97.63%, RSD為1.8% (n=6)。

2.6 樣品的測定

分別取不同廠家的銀柴顆粒各1 g，按“1.4”項(xiàng)下操作制備供試品溶液，按上述測定方法進(jìn)行測定，記錄A，計(jì)算含量，結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定結(jié)果(mg·g-1)

3 討論

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道和實(shí)際測定，在柴胡中柴胡皂苷a的含量最大，且較為穩(wěn)定，柴胡皂苷b含量少且穩(wěn)定性差，所以采用柴胡皂苷a作為對照品。

取適量對照品和供試品溶液，分別按“1.5”項(xiàng)顯色處理并在340～600 nm波長之間掃描，結(jié)果，對照品和供試品溶液均在545 nm有最大吸收，故可選用545 nm為測定波長。同時(shí)，采用陰性對照測定，結(jié)果顯示，提取劑對測定結(jié)果無任何影響，可直接用甲醇作為空白對照。

精密稱取供試品10份，分別用20%、40%、60%、80%、100%的甲醇溶液和含5%濃氨試液的以上5個(gè)濃度甲醇溶液，超聲提取30分鐘。分別按“1.5”項(xiàng)顯色方法測定其吸光度，計(jì)算總皂苷的含量。結(jié)果顯示，含5%濃氨試液的60%甲醇濃度超聲提取效果最好。查找文獻(xiàn)可知，溶液加氨水后呈堿性，減少了皂苷的轉(zhuǎn)化和損失。故選用60%濃度的氨水甲醇溶液進(jìn)行提取。

文獻(xiàn)檢索顯示，關(guān)于銀柴顆粒中柴胡總皂苷含量測定的方法尚未報(bào)道。本文以銀柴顆粒為研究對象，對其中總柴胡皂苷類成分的含量測定方法進(jìn)行研究，建立一種檢測銀柴顆粒中總皂苷含量的方法，該法簡單、快捷，重現(xiàn)性好，為進(jìn)一步完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其合理使用提供參考。

[1] 徐國均,何宏賢,徐珞珊,等.中國藥材學(xué)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 1996: 1535-1538.

[2] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑第十三冊) [S].北京：人民衛(wèi)生出版社, 1993: 187.

[3] 董林,李毅，鄧曉鴻.銀柴顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥,2004,26(1):29-32.

[4] 周思敏. 銀柴顆粒中薄荷腦鑒別方法的改進(jìn)[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2006,7(3):15-16.

[5] 黃士芙,王益平.關(guān)于銀柴顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的商榷[J].中成藥,1999,21(8):438.

[6] 孔衛(wèi)東,羅敏. 氣相色譜法測定銀柴顆粒中薄荷腦的含量[J].中成藥,2007,29(11):1711-1712.

[7] 陳發(fā)奎,王玉珍,王維彬,等.常用中草藥有效成分含量測定[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1997.

[8] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(—部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社, 2005: 338.