張榮泉，王 蓮，米 沙，呂 方

(天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津 300020)

藿精片是由淫羊藿、黃精、菟絲子等中藥材提取制成，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰，滋補(bǔ)肝腎等功效。淫羊藿苷(icariin，ica)是淫羊藿中的主要活性成分，具有保護(hù)心血管系統(tǒng)、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、影響內(nèi)分泌等多種重要的生物活性[1]。為了保證制劑質(zhì)量，有效控制藿精片中淫羊藿苷的含量，本實(shí)驗(yàn)特采用超聲處理提取，利用高效液相色譜法對淫羊藿苷進(jìn)行含量測定，方法可行，操作簡便，誤差較小，結(jié)果較為滿意。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(日本島津公司)，AB204-E型電子天平(萬分之一精度)， KQ-100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號110737-200415)；藿精片(天津市醫(yī)藥研究開發(fā)公司提供，批號20100429、20100516、20100717)；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：依利特Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm，10 μm)；流動相：甲醇-水(55∶45)；流速1.0 ml/min；檢測波長270 nm；進(jìn)樣量20 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品0.009 9 g，置于50 ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，混勻，即得濃度為198 μg/ml的對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液2.0 ml，置于5 ml量瓶中，加入甲醇至刻度，混勻，即得濃度為79.2 μg/ml的對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取藿精片10片(片重約為0.70 g，批號20100429)，研細(xì)，精密稱取供試品約0.05 g，置于25 ml量瓶中，加入50%甲醇15 ml，超聲處理提取30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，混勻，即得藿精片供試品溶液。

2.2.3陰性對照品溶液的制備 按照處方制備不含淫羊藿的陰性對照品，取該陰性對照品10片(片重約為0.70 g)，研細(xì)，精密稱取約0.05 g，置于25 ml量瓶中，加入50%甲醇15 ml，超聲處理提取30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，混勻，即得藿精片陰性對照品溶液。

2.3干擾試驗(yàn) 按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各20 μl分別進(jìn)樣，進(jìn)行HPLC測定。結(jié)果顯示供試品溶液色譜圖與對照品溶液色譜圖中的相同位置(約16 min處)，有相同的色譜峰出現(xiàn)，而陰性對照溶液在此處無峰，表明處方中其他成分對淫羊藿苷含量測定無干擾，見圖1。

2.4線性關(guān)系考查 精密吸取對照品儲備液0.5、1.0、2.0、3.0和4.0 ml，置于5 ml量瓶中，加入甲醇至刻度，并以對照品儲備液為第6個濃度梯度。按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，將以上6個濃度的對照品溶液分別注入液相色譜儀中測定，以溶液濃度(X)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為Y=50 988X-1 021.9(n=6，r=0.999 8)。結(jié)果表明淫羊藿苷進(jìn)樣濃度在19.8～198 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn) 按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，取對照品溶液20 μl連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果峰面積值的RSD為0.39%(n=6)，符合精密度要求。

2.6重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取同一批(20100429)供試品5份，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，各取20 μl進(jìn)樣，進(jìn)行HPLC測定，計(jì)算含量。結(jié)果含量的RSD為1.06%(n=5)，符合重現(xiàn)性要求。

1.淫羊藿苷

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液(批號20100429)，分別在0、1、2、4、6、8和24 h時進(jìn)樣，測定峰面積。結(jié)果峰面積的RSD為0.36%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8加樣回收試驗(yàn) 精密稱取淫羊藿苷含量為4.10%的供試品(批號20100429)0.03 g，共6份，分別精密加入對照品儲備液2、4和6 ml各2份，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再分別注入液相色譜儀中進(jìn)行測定，計(jì)算含量。結(jié)果平均回收率為99.94%，RSD為0.30%(n=6)，表明加樣回收率良好，見表1。

2.9供試品含量測定 取3批樣品(批號20100429、20100516、20100717)按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行HPLC測定。結(jié)果供試品中淫羊藿苷含量分別為4.10%、4.15%和4.13%。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1檢測波長的選擇 取淫羊藿苷對照品和藿精片供試品配制成適宜濃度的溶液，于190～700 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果表明：淫羊藿苷對照品最大吸收波長為270.2 nm，藿精片供試品最大吸收波長為269.0 nm，故本實(shí)驗(yàn)含量測定選擇波長為270 nm。

3.2提取方法的選擇 本實(shí)驗(yàn)比較了回餾提取同超聲提取的差別，在保證提取完全的前提下，使用回餾提取的方法制備供試品溶液時，操作較為復(fù)雜，并且由于過程中含有溶液轉(zhuǎn)移等操作，存在一定的誤差。而采用超聲提取不僅操作簡便，而且可以有效減少中間過程，誤差較小 。

3.3提取時間的選擇 取同一批次供試品，按照“2.2.2”項(xiàng)下操作，對供試品分別超聲處理30 min和60 min，在同一色譜條件下進(jìn)行高效液相測定。結(jié)果顯示，二者淫羊藿苷含量無顯著差異，故本實(shí)驗(yàn)超聲提取時間選擇為30 min。藿精片中含有中藥提取物，易吸潮，使片質(zhì)地堅(jiān)硬，過程中溶解較慢，故應(yīng)干燥儲存，在超聲提取前注意研細(xì)，以使之提取完全。

3.4流動相的選擇 在《中國藥典》2010年版一部[2]中，中藥材淫羊藿的主要成分淫羊藿苷含量測定方法是高效液相法，但其流動相選擇的是乙腈-水系統(tǒng)，由于乙腈毒性較大，價格較高，本實(shí)驗(yàn)采用甲醇-水系統(tǒng)，在保證分離效果的前提下，不僅能夠有效降低實(shí)驗(yàn)過程毒性，而且取得了較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3.5HPLC法測定藿精片中淫羊藿苷含量的方法學(xué)實(shí)驗(yàn)研究證明，本方法簡便，準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可作為藿精片的質(zhì)量控制方法。

1 劉雪花.淫羊藿苷藥理研究進(jìn)展.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2009，47(21)：49

2 中國藥典.一部.2010：306-308