東 紅，劉 毅

(1.天津中新藥業(yè)集團股份有限公司達仁堂制藥廠，天津 300457； 2.天津藥物研究院，天津 300193)

復(fù)方益腎膠囊是由山茱萸、枸杞、熟地黃、骨碎補等多味中藥制成的復(fù)方制劑，其主要組成藥味山茱萸具有補肝腎的功效，以往選定山茱萸中的熊果酸作為含量測定指標，但根據(jù)藥理研究，熊果酸是降血糖的有效成分[1]，且專屬性不強，而馬錢苷為山茱萸中具有調(diào)節(jié)機體免疫功能的主要活性成分[2]，故選擇馬錢苷作為控制本品質(zhì)量的指標成分。有關(guān)馬錢苷的含量測定，已有報道，方法包括薄層掃描法、高效液相色譜法[2，3]等。本試驗采用高效液相色譜法對復(fù)方益腎膠囊中馬錢苷含量進行定量分析，建立了該產(chǎn)品的質(zhì)量標準定量控制方法。該方法具有專屬性強、分離效果好、靈敏準確等優(yōu)點。

1 儀器和試藥

HP1100系列高效液相色譜儀，G1310A泵，G1313A自動進樣器，G1316A柱溫箱，G1314A紫外檢測器，HP1100色譜工作站。馬錢苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號111640-200401 ，純度98%以上)，復(fù)方益腎膠囊(批號為090515，090518，090522)及陰性樣品由本實驗室自制。乙腈為色譜純，水為去離子水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Kromasil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)天和填裝；流動相：乙腈-水(12∶88)；檢測波長：238 nm；體積流量：1.0 ml/min；柱溫：室溫。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取馬錢苷對照品11.57 mg，置50 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成0.2314 mg/ml的溶液，作為對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液1ml，置10 ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備 取復(fù)方益腎膠囊5粒，傾出內(nèi)容物，混勻，取約0.2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 ml，稱定重量，加熱回流20 min，取下，放冷，稱重，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻；濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4陰性溶液的制備 取除去山茱萸的其余藥味，按處方配比，照制備工藝制成缺山茱萸的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法處理，作為陰性溶液。按上述色譜條件測定，結(jié)果表明，陰性溶液在馬錢苷色譜峰相應(yīng)位置上無色譜峰，陰性溶液無干擾，見圖1。

1．馬錢苷

2.5線性關(guān)系考察 精密量取馬錢苷對照品儲備液(0.2314 mg/ml)0.5、1.0、2.0、3.0和5.0 ml分別置10 ml量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20 μl，測定峰面積。以馬錢苷的量(μg) 為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算回歸方程Y=1 598.1X+10.2(r=0.999 9)。結(jié)果表明：在0.2314～2.314 μg范圍內(nèi)，馬錢苷峰面積值與進樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.6精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液20 μl，重復(fù)進樣6次，記錄馬錢苷峰面積值，計算其RSD值為0.58%。

2.7穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液于0、1、2、4、8和24 h分別測定，每次進樣20 μl，記錄馬錢苷的峰面積，結(jié)果其RSD值為1.56%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.8重現(xiàn)性試驗 按供試品溶液的制備方法，對同一批號的樣品分別制備6份供試品溶液，進樣20 μl測定，計算馬錢苷的含量，結(jié)果其RSD值為0.86%。

2.9回收率試驗 采用加樣回收法。取已知馬錢苷含量的復(fù)方益腎膠囊090518批內(nèi)容物0.1 g，精密稱定6份，分別精密加入馬錢苷對照品溶液(0.231 4 mg/ml)1.0 ml，照供試品溶液制備方法制備，進樣20 μl測定，結(jié)果平均回收率為99.55%，RSD為0.91%。見表1。

2.10樣品的測定 取3批不同批號樣品，按供試品溶液制備方法操作，即得供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20 μl，按上述色譜條件測定馬錢苷的含量，結(jié)果見表2。

表1 馬錢苷回收率試驗結(jié)果

表2 復(fù)方益腎膠囊中馬錢苷的含量測定結(jié)果(n=2)

3 討論

采用幾種樣品提取溶劑進行考察，結(jié)果，用甲醇作提取溶劑，含量較低，而且，色譜峰峰底過寬；70%甲醇、50%甲醇和30%甲醇作提取溶劑三者含量結(jié)果沒有顯著性差異，考慮到本品中有水提和醇提兩種工藝，因此采用50%甲醇作為提取溶劑。在本實驗色譜條件下，制劑中馬錢苷與其他組分間有較好的分離度，而且，樣品分析時間短，準確度、精密度均較好，完全可以用于該產(chǎn)品的定量控制方法。

1 張明發(fā)，沈雅琴．齊墩果酸和熊果酸的抗糖尿病藥理．上海醫(yī)藥，2010，31(8)：347

2 宋梅．山茱萸含量測定和藥理作用研究進展．江蘇中醫(yī)藥，2010，42(9)：80.

3 屠萬倩，張留記，劉怡，等.知柏地黃泡騰顆粒的質(zhì)量標準研究.中國新藥雜志，2010，19(5)：439