逯素珍，戴淑琴，宋 敏

(1.寧夏第五人民醫(yī)院二部，銀川 753000； 2.寧夏石嘴山市第一人民醫(yī)院，石嘴山 753000 ； 3.陜西中醫(yī)學(xué)院，咸陽(yáng) 721046)

葛根素衍生物是以葛根素為原料合成的藥物，用于治療心腦血管病，由于在合成過程中引入了乙醇、乙酸乙酯和吡啶3種有機(jī)溶劑，從臨床用藥的安全性角度考慮，需對(duì)本品進(jìn)行有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定[1]。

1 儀器與試藥

Agilent 6890 N氣相色譜儀，帶FID檢測(cè)器；Agilent 7694型頂空自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent chemstation工作站。乙醇、乙酸乙酯、吡啶、N,N-二甲基甲酰胺為色譜純。葛根素衍生物樣品(陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系自制，批號(hào)100403、100425、100508)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管色譜柱(30 mm×0.53 mm)，載氣：N2；流速：2.0 ml/min；柱溫：40 ℃保持3.5 min，再以15 ℃/min升至180 ℃保持5 min；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；檢測(cè)器溫度：250 ℃；進(jìn)樣量：1 ml；分流比:10∶1；瓶溫：120 ℃；定量環(huán)溫度：130 ℃，傳輸管溫度：140 ℃。

2.2溶液的制備

2.2.1混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取乙醇1.001 6 g、乙酸乙酯1.006 3 g、吡啶0.042 8 g分別置于100 ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液備液；取2.5 ml于50 ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，即得上述3種試劑的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取乙醇1.001 6 g、乙酸乙酯1.006 3 g、吡啶0.042 8 g分置于3個(gè)不同的100 ml量瓶中，分別用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，再分別取2.5 ml于3個(gè)不同的50 ml量瓶中，分別用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，即得3種試劑的對(duì)照品溶液。

2.3專屬性試驗(yàn) 按上述色譜條件，分別精密量取N,N-二甲基甲酰胺、混合對(duì)照品溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液各5 ml，置頂空瓶中，立即密封，在120 ℃恒溫平衡30 min后進(jìn)樣，色譜圖見圖1。

1.乙醇 2.乙酸乙酯 3.吡啶

2.4線性關(guān)系試驗(yàn) 分別量取混合對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液0.1、2.0、2.5、3.0和10.0 ml，置50 ml量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，制成對(duì)照品溶液的系列濃度，各精密量取5 ml，置頂空瓶中，按上述色譜條件檢測(cè)，分別以各色譜峰面積為縱坐標(biāo)(Y),以各自的濃度(μg/ ml)為橫坐標(biāo)(X)，按最小二乘法進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 回歸方程與線性范圍試驗(yàn)結(jié)果

2.5精密度試驗(yàn) 精密量取上述混合對(duì)照溶液6份各5ml，分別置6個(gè)頂空瓶中，按上述色譜條件檢測(cè)各對(duì)照溶液峰面積，并分別計(jì)算RSD，結(jié)果乙醇、吡啶、乙酸乙酯的RSD分別為1.0%、1.5%和1.3%；試驗(yàn)結(jié)果表明上述3種對(duì)照溶液精密度均良好。

2.6檢測(cè)限試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋信噪比3∶1時(shí)，測(cè)出3種對(duì)照溶液的檢測(cè)限為：乙醇0.012 μg/ml、吡啶0.02 μg/ml、乙酸乙酯0.025 μg/ml。結(jié)果表明，混合對(duì)照溶液中3種溶劑的濃度均高于檢測(cè)限，說明上述檢測(cè)方法是可靠的。

2.7定量限試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋信噪比10∶1時(shí)，測(cè)出3種對(duì)照溶液的定量限為：乙醇0.036 μg/ml、吡啶0.06 μg/ml、乙酸乙酯0.075 μg/ml。結(jié)果表明，混合對(duì)照溶液中3種溶劑的濃度均高于定量限，說明上述檢測(cè)方法是可靠的。

2.8回收率試驗(yàn) 取批號(hào)為100403的樣品約0.5 g共3份，精密稱定，分別置3 個(gè)頂空瓶中，再精密量取80%混合對(duì)照品溶液5 ml，分別置上述3 個(gè)頂空瓶中，密封瓶口，作為80%回收的供試品溶液；取批號(hào)為100403的樣品約0.5 g共3份，精密稱定，分別置3 個(gè)頂空瓶中，再精密量取100%混合對(duì)照品溶液5 ml，分別置上述3 個(gè)頂空瓶中，密封瓶口，作為100%回收的供試品溶液；取批號(hào)為100403的樣品約0.5 g共3份，精密稱定，分別置3 個(gè)頂空瓶中，再分別精密量取120%混合對(duì)照品溶液5 ml，置上述3 個(gè)頂空瓶中，作為120%回收的供試品溶液。 以精密度試驗(yàn)中混合對(duì)照品溶液作對(duì)照；按規(guī)定色譜條件測(cè)定回收率，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率，結(jié)果乙醇、吡啶、乙酸乙酯的平均回收率分別為99.3%、98.8%和99.1%，由試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，該方法的回收率良好。見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9殘留溶劑測(cè)定 分別取批號(hào)為100403、100425、100508的樣品各約0.5 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入空白溶液5 ml，密封瓶口，作為供試品溶液。 依照上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣，測(cè)定結(jié)果見表3。結(jié)果3批樣品殘留溶劑均符合規(guī)定。

表3 葛根素衍生物殘留溶劑測(cè)定結(jié)果

3 討論

上述3種溶劑能與N,N-二甲基甲酰胺任意比互溶，葛根素衍生物在水中的溶解度小，本試驗(yàn)采用N，N-二甲基甲酰胺作為殘留溶劑測(cè)定用的溶劑，結(jié)果表明完全能滿足殘留溶劑限度檢查的要求，且不干擾待測(cè)溶劑的測(cè)定。

本試驗(yàn)待測(cè)溶劑為3個(gè)，數(shù)量雖少，但極性方面差異較大，選用中極性色譜柱：6%氰丙基苯基-94%二甲基聚氧硅烷為固定液的毛細(xì)管色譜柱，并采用頂空進(jìn)樣系統(tǒng)程序升溫法，結(jié)果各溶劑分離較好。

通過對(duì)3 個(gè)溫度(100、120和140 ℃)進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)吡啶峰面積變化不大，而乙醇和乙酸乙酯的峰面積隨溫度升高明顯增大，故選擇120 ℃作為平衡溫度。

對(duì)頂空瓶的平衡時(shí)間(20、30和40 min)進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果乙醇、乙酸乙酯30 min后峰面積變化不大，但30 min比20 min峰面積響應(yīng)值明顯增大；吡啶20 min與30 min峰面積變化不大，但40 min后峰面積反而變小。所以選擇30 min作為平衡時(shí)間。

1 中國(guó)藥典.二部.2005：附錄54