薛士榮

(天津市大港藥品檢驗(yàn)所，大港 300270)

鹽酸乙胺丁醇是一種抗結(jié)核病藥物，常與異煙肼、鏈霉素等聯(lián)合用藥，以增強(qiáng)療效，并延緩細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。由于鹽酸乙胺丁醇沒(méi)有紫外吸收官能團(tuán)，不能通過(guò)常規(guī)的高效液相色譜-紫外檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)，《中國(guó)藥典》2005年版中是采用非水滴定法進(jìn)行含量測(cè)定[1]。本文根據(jù)鹽酸乙胺丁醇與銅離子絡(luò)合得到的絡(luò)合物有較強(qiáng)的紫外吸收,在酸性條件下該絡(luò)合物與庚烷磺酸鈉形成離子對(duì),用反相離子對(duì)色譜法可測(cè)定鹽酸乙胺丁醇的含量[2-4]。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀 LC-2010C，島津高效液相色譜儀工作站LC-Solution，鹽酸乙胺丁醇對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100165-200103)，四氫呋喃、磷酸、庚烷磺酸鈉均為色譜純，硫酸銅為分析純，水為純化水。鹽酸乙胺丁醇片(沈陽(yáng)某藥廠，批號(hào)0902101、0909131、0910111)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Diamond C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動(dòng)相：四氫呋喃-0.4%庚烷磺酸鈉(含有0.016%硫酸銅,用磷酸調(diào)pH至4.5±0.5)(25∶75)；流速1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng) 258 nm;柱溫:40 ℃，進(jìn)樣量20 μl。

2.2溶液的配制

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 取鹽酸乙胺丁醇對(duì)照品置干燥箱中105 ℃干燥2 h后，精密稱取9.87 mg，置50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml含0.197 4 mg鹽酸乙胺丁醇的對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品10片,研成細(xì)粉,混合均勻,精密稱取適量(約相當(dāng)于含鹽酸乙胺丁醇20 mg)置于100 ml量瓶中,加入水適量,振搖使主藥溶解,再用水稀釋至刻度,搖勻,過(guò)濾,作為供試品溶液。

2.2.3空白輔料溶液的制備 按處方比例制備不含鹽酸乙胺丁醇的空白樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成空白輔料溶液。精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶液各20 μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。色譜見(jiàn)圖1。

1.鹽酸乙胺丁醇

2.3線性關(guān)系的考查 精密吸取含有2.55 mg/ml鹽酸乙胺丁醇對(duì)照品溶液1、2、4、6、8和10 ml，分別置50 ml量瓶中，加水稀釋至刻度搖勻。按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，分別進(jìn)樣20 μl，記錄峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析，得回歸方程Y=16 129 145.2X-11 184.9(r=0.999 6)。結(jié)果表明：鹽酸乙胺丁醇濃度在0.051～0.51 mg/ml范圍時(shí)，線性關(guān)系良好。

2.4精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積值的RSD為0.06%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.5重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)0910111)6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法配制供試品溶液，采用“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測(cè)定鹽酸乙胺丁醇的含量，結(jié)果測(cè)得鹽酸乙胺丁醇的平均含量為97.99%，RSD為0.08%。表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品(批號(hào)0910111)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法配制，每隔3 h進(jìn)樣1次，共5次，結(jié)果RSD為0.18%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7加樣回收 精密稱取已知含量同一批樣品(批號(hào)0910111)細(xì)粉約相當(dāng)于含鹽酸乙胺丁醇10 mg(本法測(cè)得樣品含量97.99%)共6份，分別精密加入濃度為1.02 mg/ml鹽酸乙胺丁醇對(duì)照品溶液10 ml。按“2.2.2”項(xiàng)下方法配制，按“2.1”色譜條件測(cè)定鹽酸乙胺丁醇的含量，鹽酸乙胺丁醇的平均回收率為99.4%，RSD為0.68%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.8含量測(cè)定 取3批樣品，分別按供試品溶液的制備方法制備待測(cè)溶液。精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中鹽酸乙胺丁醇的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 鹽酸乙胺丁醇片劑含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1流動(dòng)相的選擇 分別采用乙腈、四氫呋喃為有機(jī)相試驗(yàn)，前者峰形不好，理論塔板數(shù)偏低。四氫呋喃雖黏度稍大，但分離度、峰形均很好，保留時(shí)間穩(wěn)定，故選擇四氫呋喃為有機(jī)相。

3.2流動(dòng)相pH的影響 在本實(shí)驗(yàn)中,考查了流動(dòng)相不同pH值(3.0、4.0、5.0、6.0用磷酸或氨水調(diào)節(jié))對(duì)測(cè)定的影響。當(dāng)流動(dòng)相的pH值逐漸增大時(shí), EMB的峰形隨之變得尖銳和狹窄。然而,當(dāng)pH值調(diào)節(jié)為4～5時(shí),色譜圖的峰形變化不大，并且理論塔板數(shù)(n)均大于6 000、拖尾因子(T)均在0.95～1.05之間。故選擇流動(dòng)相pH值為4.5±0.5。

3.3含量測(cè)定方法的選擇 本文測(cè)定鹽酸乙胺丁醇片含量用《中國(guó)藥典》2005年版方法和HPLC法做了比較。《中國(guó)藥典》方法采用三氯甲烷多次提取的非水滴定法，其中有機(jī)溶劑的大量使用易對(duì)人體造成危害，并且在提取液濾過(guò)時(shí)，取無(wú)水硫酸鈉的量對(duì)結(jié)果也有一定的影響，不易得到平行結(jié)果，此法操作較煩瑣。HPLC法測(cè)定了鹽酸乙胺丁醇片的含量，溶劑為水，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，靈敏度高。適用于鹽酸乙胺丁醇片的質(zhì)量控制。

1 中國(guó)藥典. 二部.2005：456

2 孫進(jìn)，宋洪濤，張?zhí)旌?，?柱前衍生化高效液相色譜法測(cè)定固定劑量復(fù)方抗結(jié)核制劑中鹽酸乙胺丁醇的含量和溶出度.色譜，2006,24(2)：164

3 戚燕,楊慶云,吳松. 反相離子對(duì)高效液相色譜法測(cè)定四聯(lián)抗結(jié)核復(fù)方制劑中鹽酸乙胺丁醇的含量.藥物分析雜志，2009,29(4):645

4 趙瑞仙，胡萍，吳秀玲，等.RP-HPLC法測(cè)定鹽酸乙胺丁醇片的含量.大理學(xué)院學(xué)報(bào)，2007,6(10):10