孫志國，高國峰

三棵針為小檗科植物擬豪豬刺 Berberissoulieana Schneid.、小黃連刺 Berberis wilsonae Hemsl.、細葉小檗 Berberis poiretii Schneid.或匙葉小檗 Berberisvernae Schneid.等同屬數種植物的干燥根[1]，味苦、性寒，歸肺、脾、胃、大腸經，具清熱燥濕、瀉火解毒功效，主要用于痢疾、腸炎、黃疸、上呼吸道感染、急性中耳炎等癥[1]。為控制藥材質量，筆者對三棵針的質量標準進行了研究，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀;Waters 2487型紫外檢測器。樣品均為市售品，經鑒定均為正品;鹽酸小檗堿對照品(批號為110713－200609，中國藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純，水為娃哈哈超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 性狀

本品呈類圓柱形，稍扭曲，有少數分枝，長10～15 cm，直徑1～3 cm。根頭粗大，向下漸細。外皮灰棕色，有細皺紋，易剝落。質堅硬，不易折斷，切面鮮黃色，稍顯放射狀紋理，髓部棕黃色。氣微，味苦。

2.2 薄層色譜鑒別

取樣品粉末1.0 g，加甲醇 20 mL，超聲處理 20 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇－醋酸－水(2∶0.5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點。薄層色譜圖見圖1。

圖1 薄層色譜圖

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Agilent C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流動相:乙腈 －0.02 mol/L 磷酸二氫鉀(24∶76);檢測波長:265 nm;進樣量:10μL。在此條件下，色譜圖見圖2。

2.3.2 溶液制備

取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含20μg的溶液，即得對照品溶液。取樣品粉末(過四號篩)約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)60 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3.3 方法學考察

線性關系考察:分別精密吸取對照品溶液(0.010 006 g/L)5，10，15，20，25 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以進樣量為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=251 109X－33 442，r=1.000 0(n=5)。結果表明，鹽酸小檗堿進樣量在0.050 03～0.250 15μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:取鹽酸小檗堿對照品溶液，連續(xù)進樣5次。結果峰面積值的 RSD=0.5%(n=5)，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，室溫放置，分別在0，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5，20.0，22.5 h 時進樣測定。結果的RSD為1.6%(n=10)，表明供試品溶液在22.5 h內基本穩(wěn)定。

重復性試驗:取同一編號(編號1)的樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結果的 RSD為0.5%(n=6)，表明方法重復性良好。

圖2 高效液相色譜圖

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗結果(n=6)

加樣回收試驗:精密稱取同一編號(編號1)的樣品6份，精密加入鹽酸小檗堿對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結果見表1。

2.3.4 樣品含量測定

結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

取鹽酸小檗堿對照品溶液和供試品溶液在200～400 nm紫外波長下掃描，結果在265 nm和347 nm波長處均有最大吸收，參考2005年《中國藥典(一部)》，選擇265 nm為檢測波長。

由于三棵針的質量標準無鹽酸小檗堿的含量測定，而鹽酸小檗堿為其中主要成分，故選擇鹽酸小檗堿為指標成分。2005年版《中國藥典(一部)》黃柏[1]品種項下采用外標法控制了鹽酸小檗堿的含量，故將鹽酸小檗堿的含量測定方法確定為外標法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業(yè)出版社，2005:168，附錄Ⅵ B.