唐德智

廣西南寧食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530001

補(bǔ)血益氣口服液是由熟地黃、當(dāng)歸、山藥、淫羊藿、黃精等九味藥材制成的中藥制劑，具有補(bǔ)腎氣，養(yǎng)血健脾的功效，臨床用于治療腎陽虛，血?dú)獠蛔闼碌年栁缧?，體弱等癥。方中淫羊藿為君藥，具有補(bǔ)腎陽，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕的功效，現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中尚無該藥相關(guān)有效成分含量測定方法［1］。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證療效，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測定補(bǔ)血益氣口服液中淫羊藿的含量。實(shí)驗(yàn)證明該方法操作簡便、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好，為提高和完善本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

LC－2010A HT高效液相色譜儀 (日本島津公司);KQ－300型超聲波清洗器 (江蘇昆山市超聲儀器有限公司);淫羊藿苷對照品 (中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號:110737－200414);補(bǔ)血益氣口服液 (河南永馨制藥有限公司 市售藥品 批號:20090326，20090514，20100713，20100827);乙腈為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent TC－C18(250mm×4.6mm，5μm);流動相:乙腈－水 (24:76);檢測波長:270nm;流速:1.0mL·min－1;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10μL。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取淫羊藿苷對照品9.51mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.1902mg·mL－1對照品貯備溶液，精密量取5mL置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取本品10ml，置50ml容量瓶中，加入稀乙醇約25m l，超聲處理30min(功率250W，頻率33kHz)，取出，放冷，用稀乙醇加至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，微孔濾膜 (O．45μm)濾過，濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性供試品溶液的制備

按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的處方，按制備工藝制成缺淫羊藿的陰性供試品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性供試品溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。結(jié)果陰性供試品在淫羊藿苷保留時間的相應(yīng)位置上無淫羊藿苷峰出現(xiàn)，此方法專屬性強(qiáng)，陰性對照無干擾。

2.6 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2”項(xiàng)下對照品貯備溶液0.5，1.0，3.0，5.0，7.0，9.0mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。分取上述不同濃度對照品溶液10μL，依次進(jìn)樣，測定峰面積，以峰面積積分值 (Y)對淫羊藿苷對照品量(μg)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為:Y=2.76×105x+1.26×103，r=0.9999(n=6)。結(jié)果表明，淫羊藿苷在0.095～1.712μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定淫羊藿苷峰面積，結(jié)果RSD為0.56%，表明儀器精密度良好。2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液 (批號:20100713)，按上述色譜條件，分別于0，2，4，6，8，10，12 h進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，RSD為1.68%，表明在12h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號樣品 (批號:20100713)，按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，分別按上述色譜條件測定，計算淫羊藿苷含量，其平均含量為0.428mg·mL－1，RSD為1.32%(n=6)。表明方法重復(fù)性良好。

2.10 回收率試驗(yàn)

取已知淫羊藿苷含量 (批號:20100713淫羊藿苷含量為0.428mg·mL－1)的樣品約5ml共6份，精密稱定，分別精密加入一定量的淫羊藿苷對照品，照“2.3”項(xiàng)下方法操作，分別按上述色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果淫羊藿苷平均加樣回收率為99.0%，RSD為1.20%，測定結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.11 樣品測定結(jié)果

取4批樣品，分別按“2.3”項(xiàng)下的方法處理，取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另取對照品溶液同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算樣品中淫羊藿苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 補(bǔ)血益氣口服液的含量測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

3.1 對淫羊藿苷提取溶劑的選擇，本實(shí)驗(yàn)分別以乙醇、稀乙醇、甲醇為溶劑進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用稀乙醇作為提取溶劑時，測得含量最高，故本法采用稀乙醇作為提取溶劑。

3.2 用HPLC法測定淫羊藿苷含量，文獻(xiàn)中有多種流動相獻(xiàn)［2～3］，本試驗(yàn)比較了多種比例的流動相，以乙腈 －水(24:76)為優(yōu)，保留時間適中。

［1］衛(wèi)生部藥典委員會．中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑(第4冊)WS3－B－0866－91［S］．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，1998．

［2］顧利紅，張瑩．HPLC測定護(hù)心膠囊中淫養(yǎng)藿苷的含量［J］．中成藥，2008，30(7):1092－附3．

［3］袁萍．HPLC法測定刺烏養(yǎng)心口服液中淫養(yǎng)藿苷的含量［J］．海峽藥學(xué)，2010，22(7):108－109．