馬文龍 王海峰 張 紅 陜西楊凌示范區(qū)醫(yī)院(楊凌 712100)

康婦炎膠囊由蒲公英、敗醬草、薏苡仁等十三味中藥組成,具有清熱解毒,化瘀行滯的功效。用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、附件炎、陰道炎、子宮內(nèi)膜炎及盆腔炎等婦科炎癥。方中君藥蒲公英,主要有效成分為咖啡酸,故以咖啡酸作為制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)成分。其含量測定方法,已報道的有紫外分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法等[1][2],其中高效液相色譜法具有專屬性強(qiáng)、可靠、靈敏度高、干擾小等特點,可作為該制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 P200 Π高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司)、UV-160A紫外可見分光光度計 (日本島津制作所)、Kromasil C18色譜柱5 μ m 250mm× 4.6mm.(天津特納科學(xué)儀器有限公司);甲醇為色譜純(美國 MERCK),其余試劑均為分析純。咖啡酸對照品購自中國藥品生物制品鑒定所(批號:110885-200102供含量測定用)。

1.2 色譜條件 色譜柱:用十八烷基鍵合硅膠為填充劑;流動相:甲醇-磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鈉1.56g,加水使溶解成 1000mL,再加 1%的磷酸溶液調(diào)節(jié) PH值至 3.8～4.0,即得)(21∶79)為流動相;檢測波長:323nm,柱溫:30℃。流量 1.0mL/min。此條件下咖啡酸與其它組分分離效果良好,理論塔板數(shù)為3200,故確定理論塔板數(shù)以咖啡酸峰計,不得低于3000。

1.3 溶液的制備 1.3.1 對照品溶液的制備:精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥 24h的咖啡酸對照品1.25mg,置 50mL容量瓶中,加 5%甲酸甲醇溶液使溶解并至刻度,搖勻,即得。

1.3.2 供試品溶液制備:咖啡酸易溶于酸性甲醇溶液中,我們采用 5%甲酸甲醇溶液超聲處理的方法制備供試品溶液,我們對甲醇超聲提取時間進(jìn)行了考察。

考察方法:取本品 20粒,除去膠囊,研細(xì),取 1.2g,精密稱定,置 50mL具塞錐形瓶中,精密加 5%甲酸甲醇溶液 10mL,密塞,稱定重量,分別超聲處理(功率 250W,頻率 40kHz)20min、30min、40min,取出 ,放冷,稱重,用 5%甲酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量。濾過,取續(xù)濾液,用 0.45um的微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得 1～6號供試品溶液。精密吸取 1～6號供試品溶液各 20 μL,分別注入液相色譜儀。按上述條件測定咖啡酸面積積分值,數(shù)據(jù)表明咖啡酸在超聲提取 20min時提取不徹底,超聲提取 30min時提取率最高,故取樣品加 5%甲酸甲醇超聲提取 30min,作為本品含量測定項下供試品溶液制備的最佳工藝條件。即供試品制備方法確定為:取本品 20粒,除去膠囊,研細(xì),稱取 1.2g,精密稱定,置 50mL具塞錐形瓶中,精密加 5%甲酸甲醇溶液 10mL,密塞,搖勻,稱定重量,超聲處理(功率 250W,頻率 40kHz)30min,取出 ,放冷 ,稱重 ,用5%甲酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量。濾過,取續(xù)濾液,用0.45um的微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。

2 方法學(xué)考察

2.1 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液2mL、4mL、 6mL、8mL、10m L分別置 10mL容量瓶中 ,加 5%甲酸甲醇溶液至刻度,搖勻,分別作為對照品溶液 1～5,精密吸取對照品溶液 1～5各 20 μL,按照上述色譜條件測定峰面積,可見咖啡酸量在 5.00～25.00 μ g/mL之間峰面積與量呈線性關(guān)系。計算得回歸方程Y=1.7359X+ 0.2005,r=0.9999。

2.2 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液 3,重復(fù)進(jìn)樣 5次,每次 20 μL,按上述色譜條件測定峰面積,峰面積積分值標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2.05%。

2.3 穩(wěn)定性試驗 取批號為 040701的樣品,照供試品制備項下的方法制備供試品溶液,分別于 0、1、2、4、8、12h精密吸取 20 μL,按上述色譜條件測定峰面積積分值,峰面積積分值標(biāo)準(zhǔn)偏差為 1.79%,表明供試品溶液在 12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 重復(fù)性試驗 取批號為 040701的同批樣品5份,照供試品制備項下的方法制備供試品溶液,分別取 20 μL進(jìn)樣,在上述色譜條件下,分別測定,含量測定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差為 1.33%。

2.5 回收率試驗 采用加樣回收法,取已知含量(0.063mg/粒)的 040701批康婦炎膠囊樣品 0.6g、0.9g各 3份,精密稱定,分別加入咖啡酸對照品 5%甲酸甲醇溶液 (0.046mg/mL)2mL、1mL,揮干,按正文方法測定,按下式計算回收率,結(jié)果見附表,表明本品具有良好的回收率。

附表 加樣回收試驗

2.6 樣品測定 按正文方法分別測定不同生產(chǎn)批號的九批樣品,九批樣品的平均含量為 0.0657 mg/粒。

3 討 論

3.1 康婦炎膠囊過去的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中只測定芍藥苷,現(xiàn)在在原標(biāo)準(zhǔn)增加了咖啡酸的含量測定,是由于該制劑方中君藥蒲公英,主要有效成分為咖啡酸,故以咖啡酸作為制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)成分之一,結(jié)合芍藥苷的含量測定,能更好的控制制劑的質(zhì)量。

3.2 含量測定時,在樣品的正確處理決定最后的測定結(jié)果,因此我們對樣品處理的關(guān)鍵步驟甲醇超聲提取時間進(jìn)行了考察,發(fā)現(xiàn)咖啡酸在 30min超聲提取時提取效果最好。

3.3 康婦炎膠囊 040701批產(chǎn)品所使用的蒲公英藥材咖啡酸的含量為 0.038%?？祴D炎膠囊每粒含蒲公英原藥材 360mg,040701批產(chǎn)品咖啡酸含量為 0.063mg/粒,則咖啡酸在制劑中的轉(zhuǎn)移率為 46.05% ,通過對藥材中有效成分轉(zhuǎn)移率的測定,有利于從原藥材開始對該制劑進(jìn)行質(zhì)量控制。

[1]陳發(fā)奎主編.常用中草藥有效成分含量測定[M],北京:人民衛(wèi)生出版社,1997:436.

[2]苗明山.李振國.現(xiàn)代實用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:923.