吳 茵 高 海 西安市新城區(qū)中醫(yī)院(西安 710001)

常松八味沉香膠囊為民族藥的復方中藥制劑,由紅花、沉香、廣棗、檀香、降香、肉豆蔻、天竺黃、萊菔等藥材組成。具有清心安神,行氣降壓。用于氣血不調(diào),胸悶氣促,胸背疼痛,高血壓,心血管疾病,用于冠心病、心律失常 。臨床用于治療心肌缺血、心絞痛、心肌梗死、風濕性心臟病、動脈硬化、高血脂、更年期綜合征等。為了有效控制其質(zhì)量,對處方中紅花的主要成分羥基紅花黃色素 A進行含量測定的研究?，F(xiàn)報道如下:

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀(日本日立公司)。N2010型色譜工作站,BS110S型分析天平(德國賽多利斯公司)。 UV7502-PC紫外分光光度儀(上海產(chǎn))。

1.2 試藥 羥基紅花黃色素 A對照品(批號111637-200301,供含量測定用),甲醇、乙腈為色譜純,進口分裝,其余所用試劑均為分析純。常松八味沉香膠囊樣品均為自制品(每粒 0.5g),批號分別為 090301、090302、 090303。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 用十八烷基鍵合硅膠為填充劑;甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液 (26∶2∶ 72)為流動相;檢測波長 403nm;柱溫 30℃;理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計算應不低于 3000。

2.2 對照品與供試品溶液的制備 取羥基紅花黃色素 A對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每 1mL含 48.40 μ g的溶液,作為對照品溶液。取本品研細粉末1.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入 25%甲醇25mL,稱定重量,超聲處理 (功率 300W,頻率 50kHz)20、 30、 40、 50、 60min,放冷 ,再稱定重量 ,用 25% 甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,作為供試品溶液。取缺紅花的陰性對照樣品同法制成陰性對照溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 波長選擇:取對照品,加 25%甲醇制成每1mL含 10 μ g的溶液,作為對照品溶液。照分光光度法(中國藥典 2005年版一部附錄 V A)試驗,結果羥基紅花黃色素 A對照品溶液的最大吸收波長為 403nm。

2.3.2 干擾性試驗:取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照樣品溶液各 10 μL,在上述色譜條件下進樣,記錄色譜圖,結果在羥基紅花黃色素 A對照品色譜峰的相應位置上,供試品有色譜峰被檢出,而空白樣品無色譜峰被檢出。表明以 HPLC法進行測定,在上述色譜條件下,其余藥材中的成分對羥基紅花黃色素A的含量測定不會產(chǎn)生干擾。見圖 1。

2.3.3 線性關系考察:取羥基紅花黃色素 A對照品適量,精密稱定,加 25%甲醇制成每 1mL含 48.40 μ g的溶液,作為對照品溶液。精密吸取對照品溶液4、8、12、 16、20 μL,進樣測定 ,以羥基紅花黃色素 A的進樣量(μ g)作為橫坐標(X),以羥基紅花黃色素 A峰面積積分值作為縱坐標(Y),繪制標準曲線并進行回歸分析,得回歸方程為 Y= 0.000041 X+1.730318,相關系數(shù) r=0.9996。說明羥基紅花黃色素 A的進樣量在 0.1936～0.9680 μ g之間有良好的線性關系。

2.3.4 精密度試驗:取對照品溶液,在上述色譜條件下連續(xù)進樣 5次,記錄色譜圖及峰面積積分值,以羥基紅花黃色素 A峰面積積分值進行考察,結果 5次進樣峰面積積分值的相對標準偏差 RSD為 0.11%。

2.3.5 重復性試驗:取同一批號的樣品,共 5份,照上述供試品制備項下的方法制備供試品溶液,分別取供試品及對照品溶液各 10 μL,在上述色譜條件下進樣測定,結果 RSD為 1.17%。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗:取供試品溶液,在上述色譜條件下每隔一定時間進樣一次,記錄峰面積積分值,經(jīng)供試品溶液的穩(wěn)定性試驗結果表明,樣品溶液在 12h內(nèi)是穩(wěn)定的,RSD為 1.13%。

2.3.7 加樣回收率試驗:精密稱取已知含量的樣品(共 9份),分別精密加入羥基紅花黃色素 A對照品溶液適量(折算為羥基紅花黃色素 A),照供試品溶液的制備的方法制備供試品溶液,在上述色譜條件下進樣測定,記錄色譜圖及峰面積積分值,計算回收率,結果見附表。

2.3.8 含量測定:按擬定的色譜條件及供試品溶液的制備方法對本品進行了測定,結果批號為090301、090302、090303樣品中含羥基紅花黃色素 A分別為每粒 0.47、 0.36、0.38mg(n=3)。

附表 樣品的回收率試驗結果

3 討 論

3.1 經(jīng)對本品含量測定的方法學考察結果顯示準確度好、精密度高、方法可行、數(shù)據(jù)可靠,可作為該制劑的質(zhì)量控制。

3.2 本處方藥味的成分復雜,可作為含量測定指標的成分少,根據(jù)各藥材的理化性質(zhì),以方中紅花的主要有效成分羥基紅花黃色素 A作為含量測定的指標是合理的。

[1]國家藥典會.中國藥典 2005年版 [S].一部.北京:化學工業(yè)出版社,2005:31.

[2]國家藥典會.中國藥品檢驗標準操作規(guī)范 2005年版(SO P).北京:化學工業(yè)出版社.

[3]朱光怡,高效液相色譜法測定復方紅花滴丸中羥基紅花黃色素 A的含量 [J].黑龍江醫(yī)藥科學,2008,31(4):19-20.