李中娥， 趙培敬

(南陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南南陽(yáng)473061)

風(fēng)濕痹癥是臨床醫(yī)學(xué)一大頑癥，其病程長(zhǎng)，難于根治，給患者帶來(lái)終身痛苦。民間出現(xiàn)一些中藥制劑，隨意夸大療效，宣稱可以治愈風(fēng)濕，無(wú)不良反應(yīng)，實(shí)際上卻加入化學(xué)藥物提高其療效［1-12］，且添加化學(xué)藥的手段也從大量添加單一成分到少量、多成分同時(shí)添加［11］，一些患者大量服用，結(jié)果造成身體上的嚴(yán)重?fù)p害。市售烏蛇白芷膠囊，產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中稱全部采用中藥材加工而成，適用于關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肩周炎、頸椎病、骨質(zhì)增生等癥，服用量較小，疑其加入了止痛類化學(xué)成分。結(jié)合工作經(jīng)驗(yàn)，擬篩選醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬3種成分，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，結(jié)果3種成分均檢出。本實(shí)驗(yàn)所建立的LC-MS/MS法可快速、準(zhǔn)確地對(duì)該制劑中是否摻有醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬3種成分作出判斷。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200-6310液質(zhì)聯(lián)用儀，紫外檢測(cè)器，BP-211D電子天平。

1.2 試藥 3種對(duì)照品均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)分別為:醋酸潑尼松(100012-200105)、雙氯芬酸鈉(100334-200302)、布洛芬 (100179-200303)，樣品烏蛇白芷膠囊由河南某藥業(yè)公司生產(chǎn)。乙腈(色譜純，天津市登科化學(xué)試劑有限公司)，冰醋酸(分析純，開(kāi)封市化學(xué)試劑二廠)，乙酸銨(分析純，上海試劑四廠)，水為純化水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件 色譜柱:SHIMADZU shim-pack VP-ODS(250 mm ×4.6 mm);以0.02 mol/L 乙酸銨(含0.1%乙酸水溶液)--乙腈(53 ∶47)為流動(dòng)相;體積流量:1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)分段設(shè)置:0～7.7 min 為240 nm;7.7～10.0 min為280 nm;10.0 ～15.0 min 為263 nm［1］。柱溫:30 ℃，進(jìn)樣量:10 μL 。

2.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源(ESI)，霧化氣壓力40 psi，干燥氣溫度:350℃，體積流量:9 mL/min，掃描范圍:150～500 m/z，毛細(xì)管電壓:3500 V。檢測(cè)方式分段設(shè)置:6.5～8.5 min目標(biāo)離子400 m/z正模式一級(jí)、二級(jí)同時(shí)掃描;8.5～12.5 min目標(biāo)離子296 m/z負(fù)模式一級(jí)、二級(jí)同時(shí)掃描;12.5～15.0 min目標(biāo)離子206 m/z負(fù)模式一級(jí)、二級(jí)同時(shí)掃描［8，11］。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取醋酸潑尼松、雙氯芬酸鈉、布洛芬對(duì)照品各5 mg，分別置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取上述3種溶液各5 mL，置同一50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.4供試品溶液的制備 取本品10粒的內(nèi)容物，精密稱定，混合均勻后稱取約相當(dāng)于1粒的質(zhì)量，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲使溶解，放至室溫，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過(guò);精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 檢出限 取對(duì)照品溶液，稀釋成不同濃度的溶液后測(cè)定，結(jié)果醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬的HPLC最低檢出限分別為 2 μg、1.8 μg 及 7 μg;MS 最低檢出限均為 25 ng(S/N=3)，可滿足試驗(yàn)要求。

3.2 對(duì)照品及樣品的色譜和質(zhì)譜行為 按2.1項(xiàng)及2.2項(xiàng)下條件進(jìn)樣，對(duì)照品液相色譜圖中分別在保留時(shí)間 7.08 min、8.37 min 和13.42 min 處出現(xiàn)色譜峰，見(jiàn)圖1，3 個(gè)峰的塔板數(shù)及分離度均符合中國(guó)藥典要求;醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬的一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜分別見(jiàn)圖3、圖4及圖5。樣品的液相色譜圖見(jiàn)圖2，其峰1、峰2及峰3的質(zhì)譜圖見(jiàn)圖6、圖7及圖8。

圖1 對(duì)照品HPLC圖譜

圖2 供試品HPLC圖譜

圖3 醋酸潑尼松一級(jí)(A)、二級(jí)質(zhì)譜

圖4 雙氯芬酸一級(jí)(A)、二級(jí)(B)質(zhì)譜

圖5 布洛芬一級(jí)(A)、二級(jí)(B)質(zhì)譜

圖6 供試品峰1一級(jí)(1)、二級(jí)(B)質(zhì)譜

圖7 供試品峰2一級(jí)(A)、二級(jí)(B)質(zhì)譜

圖8 供試品峰3一級(jí)(A)、二級(jí)(B)質(zhì)譜

3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 由以上圖譜可以看出，樣品液相色譜圖中在與醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬對(duì)照品保留時(shí)間相應(yīng)處均出現(xiàn)色譜峰，再與對(duì)照品的質(zhì)譜圖比較，樣品中峰1、峰2及峰3的一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜分別與醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬對(duì)照品質(zhì)譜圖相吻合，故此可以證實(shí)樣品中含有醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬這3種成分。

4 討論

此類非法添加的中藥制劑，干擾成分很多，因此在測(cè)定時(shí)對(duì)分析方法的選擇性提出了更高的要求。本文所采用的LC-MS/MS法，通過(guò)得到的一級(jí)質(zhì)譜準(zhǔn)分子離子峰及二級(jí)質(zhì)譜碎片離子峰，為更進(jìn)一步的判定此類藥物的性質(zhì)提供了有力的依據(jù)，可有效避免假陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)打擊中藥制劑的非法添加問(wèn)題具有重大意義。

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