沈志力

惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征為對(duì)鄰近正常組織的浸潤(rùn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。CD44s粘附分子與許多惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在這些惡性腫瘤細(xì)胞的表面，CD44s通常表達(dá)異常［1］。第 1個(gè)編碼CD44s的cDNA是由Stamenkovic等于1989年使用不同的單抗分離和克隆的，該基因不僅可由淋巴樣細(xì)胞表達(dá)，也可由不同的癌細(xì)胞系包括典型實(shí)體瘤標(biāo)本中表達(dá);而第1份臨床腫瘤(結(jié)腸癌)標(biāo)本的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CD44s是1992年由英國(guó)牛津大學(xué)病理實(shí)驗(yàn)室的研究人員首先報(bào)道的，此后人們應(yīng)用免疫組化在肺癌、胃癌、食道癌、乳腺癌、膀胱癌、肝癌等中均發(fā)現(xiàn)有 CD44s表達(dá)，因此認(rèn)為CD44s的表達(dá)與惡性瘤進(jìn)展程度、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)［2］。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)免疫組織化學(xué)方法，探討粘附分子CD44s在人大腸癌中的表達(dá)與癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系，為臨床大腸癌診斷與治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集江蘇省江寧醫(yī)院臨床病理資料完整的大腸癌68例(其中結(jié)腸癌26例，直腸癌42例)，男46例，女22例;平均年齡62(39～85歲)。病理類(lèi)型均為腺癌。腫瘤分化程度:高分化14例，中分化38例，低分化16例。Duke's分期:A期12例，B期18例，C期32例，D期6例。所有病例術(shù)前均未行放療和化療，并由2位病理醫(yī)師確診。另取20例距癌組織10 cm的遠(yuǎn)處腸黏膜作正常對(duì)照。所有病例均行5年隨訪，死亡28例，存活40例。

1.2 免疫組織化學(xué)染色 采用Envision TM法，Envision免疫組化檢測(cè)試劑盒購(gòu)自丹麥Dako基因有限公司，鼠抗人單克隆抗體CD44s購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。CD44s蛋白均定位在細(xì)胞膜，呈棕色細(xì)顆粒狀，結(jié)果判斷的依據(jù)是細(xì)胞膜上陽(yáng)性細(xì)胞的顯色有無(wú)及強(qiáng)弱分級(jí):基本不著色、未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞為(－)(見(jiàn)圖1)，著色淺黃、著色細(xì)胞低于25%者為(+)，著色適中、著色細(xì)胞占25% ～50%為(++)，著色深、著色細(xì)胞大于50%為(+++)。后三者均視為陽(yáng)性表達(dá)(見(jiàn)圖2)。

圖1 腸腺癌細(xì)胞CD44s(－)(×100倍)

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用STATA 9.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，組間陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

CD44s在正常腸上皮表達(dá)陰性，僅在腺體基底部有弱陽(yáng)性表達(dá)，本免疫組化結(jié)果顯示，大腸癌組織中CD44s的表達(dá)陽(yáng)性率為63.24%(43/68)。

2.1 CD44s的表達(dá)與大腸癌患者臨床病理特征的

關(guān)系 免疫組化結(jié)果顯示:CD44s的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤分期顯著相關(guān)性，Duke's C/D期的大腸癌患者的陽(yáng)性率顯著高于Duke's A/B期(P＜0.05);隨腫瘤細(xì)胞分化程度的降低，CD44s的陽(yáng)性表達(dá)率也增加(P＜0.05)。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD44s陽(yáng)性率顯著高于不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P＜0.05)。而CD44s的陽(yáng)性表達(dá)與患者年齡、性別、浸潤(rùn)深度無(wú)顯著相關(guān)性(P ＞0.05)。(見(jiàn)表1)

表1 CD44s陽(yáng)性表達(dá)率與大腸癌病理特征的關(guān)系

圖2 腸腺癌細(xì)胞CD44s(+)(×100倍)

2.2 CD44s的陽(yáng)性表達(dá)與生存率的關(guān)系 對(duì)68例大腸癌患者的生存情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示:CD44s陰性、陽(yáng)性患者的5年生存率分別為68.00%(17/25)、53.49%(23/43)，兩者差異具有顯著性(P ＜0.05)。

3 討論

CD44(cluster of differentiation 44，鑒別簇 44)系指白細(xì)胞分化抗原分化簇第44號(hào)，由國(guó)際白細(xì)胞分化抗原協(xié)作組會(huì)議將來(lái)自不同實(shí)驗(yàn)室的單克隆抗體所識(shí)別的膜分子統(tǒng)一命名，是一類(lèi)重要的粘附分子。人類(lèi)CD44s位于11號(hào)染色體短臂上(11p13)，由至少20個(gè)外顯子和其間的內(nèi)含子組成。CD44s只包含10個(gè)組成型外顯子而不含有任何V區(qū)變異型外顯子，其轉(zhuǎn)錄片段存在于所有CD44s轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中。在正常人體內(nèi)大量存在，主要在間質(zhì)和造血源性細(xì)胞表達(dá)，介導(dǎo)淋巴細(xì)胞的活化、分化、回流、粘附等一系列過(guò)程。

目前對(duì)多種惡性腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)，CD44s的高表達(dá)與惡性腫瘤的侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Murai等［3］在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)透明質(zhì)酸可以使CD44s在惡性瘤細(xì)胞表面脫落，CD44s分子的相互聚結(jié)同樣能夠使CD44s在惡性腫瘤細(xì)胞表面脫落，而CD44s在惡性瘤細(xì)胞表面上的脫落可能與惡性瘤細(xì)胞的侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，證明CD44s在調(diào)節(jié)腫瘤惡性轉(zhuǎn)移中的重要作用。在大腸癌方面，Du等［4］實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)來(lái)自于大腸癌組織中的一個(gè)CD44s陽(yáng)性細(xì)胞可以在體外生長(zhǎng)成一個(gè)類(lèi)似原發(fā)癌的腫瘤組織，揭示CD44s陽(yáng)性表達(dá)在大腸癌發(fā)生中起重要作用。Liu等［5］應(yīng)用免疫組化染色法檢查了62例結(jié)腸直腸腺癌中CD44s的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD44s的高表達(dá)能夠?qū)е铝馨拖倭龅霓D(zhuǎn)移和侵襲。

本研究采用Envision TM免疫組化法檢測(cè)大腸癌組織中CD44s蛋白的表達(dá)情況，方法敏感度和特異性較好，結(jié)果顯示:大腸癌組織中CD44s的陽(yáng)性表達(dá)率為63.24%，CD44s的陽(yáng)性率與腫瘤細(xì)胞的分化程度及腫瘤分期有相關(guān)性:腫瘤分期越晚，CD44s的陽(yáng)性率也越高;而伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD44s表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。以上結(jié)果提示隨著大腸癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的發(fā)生，CD44s表達(dá)增強(qiáng)，提示CD44s可能與大腸癌的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移有一定相關(guān)性。CD44s表達(dá)強(qiáng)度的增加在一定程度上可以反映病情的進(jìn)展，為臨床評(píng)價(jià)療效、評(píng)估病情及指導(dǎo)治療提供參考依據(jù)。另外，本研究結(jié)果顯示:CD44s陰性、陽(yáng)性患者的5年生存率分別為68.00%(17/25)、53.49%(23/43)，CD44s陽(yáng)性表達(dá)的患者5 年生存率顯著低于陰性者，二者差異具有顯著性(P＜0.05)，提示CD44s在大腸癌中的高表達(dá)與生存時(shí)間顯著相關(guān)，CD44s可能在腫瘤生長(zhǎng)中起一定的作用，CD44s表達(dá)水平可能為大腸癌的患者預(yù)后評(píng)價(jià)提供重要信息。這與 Fernández等［6］的報(bào)道相一致。

目前，對(duì)于CD44s粘附分子參與腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的確切機(jī)制仍不明確，可能的機(jī)制為:CD44s陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞能與透明質(zhì)酸等配體結(jié)合，獲得粘附性，附著于血管內(nèi)皮細(xì)胞，并從基質(zhì)中獲得生長(zhǎng)因子，使得腫瘤細(xì)胞得以侵出及遷移，構(gòu)成了腫瘤細(xì)胞的侵襲性和轉(zhuǎn)移性。但CD44s在大腸癌發(fā)展中的具體作用尚需進(jìn)一步的研究證實(shí)。

本研究提示CD44s不僅是轉(zhuǎn)移相關(guān)因子，還可以作為大腸癌患者的預(yù)后評(píng)估指標(biāo)。檢測(cè)CD44s分子對(duì)大腸癌的病情進(jìn)展、轉(zhuǎn)移潛能及預(yù)后評(píng)估等方面有很大的潛在價(jià)值，同時(shí)為臨床治療提供參考。

［1］ Hao JL，Cozzi PJ，Khatri A，et al.CD147/EMMPRIN and CD44 are potential therapeutic targets for metastatic prostate cancer［J］.Curr Cancer Drug Targets，2010，10(3):287-306.

［2］ Zavrides HN，Zizi-Sermpetzoglou A，Panousopoulos D，et al.Prognostic evaluation of CD44 expression in correlation with bcl-2 and p53 in colorectal cancer［J］.Folia Histochem Cytobiol，2005，43(1):31-36.

［3］ Murai T，Miyazaki Y，Nishinakamura H，et al.Engagement of CD44 promotes Rac activation and CD44 cleavage during tumor cell migration［J］.J Biol Chem，2004，279(6):4541-4550.

［4］ Du L，Wang H，He L，et al.CD44 is of functional importance for colorectal cancer stem cells［J］.Clin Cancer Res，2008，14(21):6751-6760.

［5］ Liu YJ，Yan PS，Li J，et al.Expression and significance of CD44s，CD44v6，and nm23 mRNA in human cancer［J］.World J Gastroenterology，2005，11(42):6601-6606.

［6］ Fernández JC，Vizoso FJ，Corte MD，et al.CD44s expression in resectable colorectal carcinomas and surrounding mucosa［J］.Cancer Invest，2004，22(6):878-885.