李曉華，楊小燕，戴愛玲

（福建龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院 預(yù)防獸醫(yī)學(xué)與生物技術(shù)福建省高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室福建省人畜寄生與病毒性疫病防控工程技術(shù)研究中心，福建龍巖 364000）

腹瀉性疾病、呼吸道疾病、繁殖障礙性疾病以及高熱病并稱為當(dāng)今養(yǎng)豬業(yè)四大疾病[1]。2006年以來，龍巖市規(guī)?；i場仔豬持續(xù)性和頑固性腹瀉呈逐年上升趨勢。懷疑與腸道細(xì)菌混合感染以及耐藥性的產(chǎn)生有較大的關(guān)系。為此，我們對2006—2010年龍巖市規(guī)?；i場的仔豬細(xì)菌性腹瀉進(jìn)行了腸道菌的檢測及耐藥性分析，希望能夠?qū)ζ渌i場的疾病預(yù)防和藥物治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、微生物生化試劑購自杭州天和微生物科技有限公司。

1.2 菌株分離、鑒定

用滅菌棉拭子取腹瀉仔豬病例直腸內(nèi)糞便或腸內(nèi)容物，按文獻(xiàn)方法[2]，接種于麥康凱培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18~24h后，對可疑菌株作進(jìn)一步生化鑒定。

1.3 藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)Kirby-Bauer紙片法，根據(jù)美國臨床試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（CLSI/NCCLS）2009版執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 腸道菌流行情況

在送檢的腹瀉仔豬糞便或腸內(nèi)容物中分離到多種細(xì)菌，細(xì)菌分離率為89.5%（221/247），大部分仔豬糞便或腸內(nèi)容物中都可分離到不止一種細(xì)菌，其中以大腸桿菌分離率最高為76.2%，其次為沙門氏菌為35.2%，除了這兩種主要細(xì)菌外，少部分的腸內(nèi)容物還分離到副嗜血桿菌為1.2%。

2.2 腸道菌藥敏情況

2.2.1 常用藥物的耐藥情況

對以上所選豬場糞便及腸內(nèi)容物分離培養(yǎng)的大腸桿菌和沙門氏菌進(jìn)行了耐藥性檢測，所選的藥物主要是臨床上常用的一些藥物，主要有氟苯尼考、乙酰甲喹、磺胺對甲氧嘧啶、利福霉素、林可霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、慶大霉素、泰樂菌素、壯觀霉素、頭孢噻呋鈉、泰妙菌素、甲砜霉素、硫酸多黏菌素、阿莫西林、環(huán)丙沙星、復(fù)方治菌磺、鏈霉素、諾氟沙星、土霉素和青霉素等21種藥物。細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性嚴(yán)重的藥物依次為青霉素、土霉素、利福霉素、磺胺對甲氧嘧啶、阿莫西林、甲砜霉素，耐藥率均高于80%。細(xì)菌耐藥率在50%~80%的藥物依次為壯觀霉素、諾氟沙星、林可霉素、泰樂菌素、環(huán)丙沙星、慶大霉素、氟苯尼考、乙酰甲喹；最敏感的藥物主要是硫酸多黏菌素、鏈霉素、頭孢噻呋鈉，其敏感率＞30%（見表1）。

表1 腸道菌藥敏試驗(yàn)情況

2.2.2 多重耐藥情況

247例腸道菌對21種抗生素監(jiān)測結(jié)果見表2，所有受檢菌株均表現(xiàn)出不同程度的耐藥性，247例中對全部抗生素耐藥的有3例（1.21%），其它都對1種或多種抗生素有耐藥性，多數(shù)為7耐以上的菌株，共有172株（69.64%）；其中12耐最高，共 34株（13.77%）（見表2）。

表2 腸道菌耐藥性統(tǒng)計(jì)

2.2.3 不同年份耐藥情況

根據(jù)2006—2010年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)來看，大部分藥物的耐藥率都有不同程度地上升。變化較大的是氟苯尼考的耐藥率45.16%→65.63%，泰妙菌素的耐藥率42.86%→54.55%，硫酸多黏菌素的耐藥率 0→18.97%，阿莫西林的耐藥率69.80%→82.86%，其中也有藥物的耐藥率出現(xiàn)了下降趨勢，林可霉素的耐藥率76.47%→55.10%，慶大霉素的耐藥率100%→64.81%，泰樂菌素的耐藥率90.48%→43.75%，頭孢噻呋鈉的耐藥率100%→88.57%，環(huán)丙沙星的耐藥率70.37%→57.14%，復(fù)方治菌磺的耐藥率65.52%→29.27%，鏈霉素的耐藥率64，29%→33.30%，土霉素的耐藥率88.00%→74.56%，青霉素的耐藥率100%→66.70%（見表 3）。

3 小結(jié)與討論

3.1 仔豬腹瀉長期困擾著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。通過對送檢豬場的問診調(diào)查（病豬日齡、臨床癥狀、發(fā)病率、死亡率等指標(biāo)），結(jié)果發(fā)現(xiàn)仔豬大腸桿菌性腹瀉相當(dāng)普遍，有的豬場幾乎每頭豬在仔豬階段均出現(xiàn)過腹瀉癥狀等，死亡率較高，經(jīng)治療未死亡的豬也常導(dǎo)致病畜生長發(fā)育遲緩、生產(chǎn)能力低下，給畜牧業(yè)造成的損失相當(dāng)嚴(yán)重，應(yīng)該引起重視[3-4]。

3.2 在送檢的腹瀉仔豬糞便或腸內(nèi)容物中分離到多種細(xì)菌，細(xì)菌分離率為89.5%（221/247），分離率很高。這說明腸道細(xì)菌在各規(guī)模化豬場發(fā)生頻率仍較高，大部分豬場糞便或腸內(nèi)容物中都可分離到不止一種細(xì)菌，其中最主要的是大腸桿菌和沙門氏菌，這是臨床上發(fā)生仔豬黃白痢、副傷寒疾病的病原菌，除了這兩種主要細(xì)菌外，腸內(nèi)容物中少部分還分離到副嗜血桿菌（1.2%）。這一結(jié)果與劉秀麗等報(bào)道一致[1]。副嗜血桿菌是條件致病菌，近年來，隨著免疫抑制性疾病如豬瘟、藍(lán)耳病、偽狂犬等發(fā)病嚴(yán)重，豬機(jī)體免疫力的下降，條件致病菌趁虛而入導(dǎo)致發(fā)病愈加嚴(yán)重。

3.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，所有分離菌株存在廣泛的耐藥性，以多重耐藥性為主，最多耐藥12種，以12耐、7耐、9耐、10耐、8耐、11耐為主，耐藥率分別為13.77%、13.36%、12.55%、10.12%、10.12%、9.72%，共占69.64%。最為敏感的藥物是硫酸多黏菌素、頭孢噻呋鈉，敏感率在30%以上；而甲砜霉素、阿莫西林、磺胺對甲氧嘧啶、利福霉素、土霉素、青霉素等均不敏感，耐藥率均在80%以上，這些耐藥性較高的抗生素經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)臨床使用頻率均較高，這可能與豬場長期應(yīng)用某種抗菌藥物而誘導(dǎo)耐藥菌株的形成有關(guān)，也說明長時(shí)間使用單一抗生素是細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的重要原因[5]。因此，應(yīng)重視用藥前的藥物敏感性監(jiān)測，以篩選出幾種有效抗菌藥物交替用于大腸桿菌病的防治。

3.4 本次試驗(yàn)結(jié)果表明，耐藥率從2006年到2010年呈逐年上升趨勢，其中變化較大的是阿莫西林的耐藥率69.80%→82.86%；氟苯尼考的耐藥率45.16%→65.63%；泰妙菌素的耐藥率42.86%→54.55%；硫酸多黏菌素的耐藥率0→18.97%。應(yīng)引起重視的是：獸醫(yī)臨床使用時(shí)間較短的頭孢類藥物在本次檢測中也發(fā)現(xiàn)已經(jīng)存在耐藥的趨勢。表明腸道細(xì)菌對其適應(yīng)性產(chǎn)生速度之快，也提示獸醫(yī)臨床抗生素藥物的選擇并非越新的藥物效果越好，而是與該種藥物的使用頻率有關(guān)[6-7]。

表3 不同年份腸道菌的耐藥情況

[1]劉秀麗，胡冰，林久鋒.山東省大型豬場腸道菌的流行情況和耐藥性分析[J].畜牧市場，2008（4）：45．

[2]陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)[M].3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：223-230．

[3]謝永平，楊威，陳澤祥.廣西地區(qū)豬大腸桿菌血清型調(diào)查及耐藥性檢測[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，41（4）：380-382.

[4]樊國燕，臧金燦，邊傳周．規(guī)?；i場大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性監(jiān)測[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（3）：110．

[5]姜中其，陳曉紅，方維煥.規(guī)?；i場仔豬斷奶腹瀉大腸桿菌耐藥性監(jiān)測［J］.浙江大學(xué)學(xué)報(bào)：農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版，2004，30（5）：567-571．

[6]施奉英.規(guī)模化豬場大腸桿菌、沙門氏菌耐藥性檢測與分析[D].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006．

[7]李衛(wèi)東.規(guī)?；i場仔豬大腸桿菌病的流行新特點(diǎn)和防制對策［J］.中國豬業(yè)，2007（6）：34-37．