張東升 聶建軍

1.河南省南陽(yáng)市骨科醫(yī)院，河南南陽(yáng) 473000；2.南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院，河南南陽(yáng) 473058

金鈴子是楝科植物川楝的干燥成熟果實(shí)，性寒、味苦，有小毒，歸肝，具有舒肝行氣、止痛驅(qū)蟲作用，用于胸脅、脘腹脹痛、疝痛、蟲積腹痛。臨床應(yīng)用仍比較廣泛，對(duì)肝臟的毒性作用較強(qiáng)，可引起急性中毒性肝炎。對(duì)金鈴子毒性文獻(xiàn)報(bào)道不多，金鈴子主要毒性成分川楝素小鼠灌胃的LD50為277～1146 mg/kg，大鼠灌胃的LD50為120.76 mg/kg，金鈴子水煎液劑量達(dá)30.6 g生藥/kg以上時(shí)，口服1 h后就能出現(xiàn)明顯的急性肝損傷[1]。而劑量在30.6 g生藥/kg以下的安全肝毒性研究未報(bào)道，本研究以AST和ALT活性為指標(biāo)來評(píng)價(jià)金鈴子水煎液對(duì)肝臟的毒性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 FSH-2型可調(diào)勻漿器（常州普天儀器制造有限公司）、H1650臺(tái)式高速離心機(jī)（H1650臺(tái)式高速離心機(jī)）、AUX220電子天平[島津國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司]、HWT-20B恒溫水浴箱（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）、Thermo酶標(biāo)儀（賽默飛世爾科技有限公司）。

1.1.2 藥品試劑 金鈴子，由國(guó)藥集團(tuán)河南省南陽(yáng)分公司提供。ALT和AST試劑盒（上海希美生物科技有限公司，20101024，20101028）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明小鼠30只，雄性，體重（26±2）g，購(gòu)自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：20100712。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 金鈴子水煎液的制備 加適量純化水于50 g金鈴子中，浸泡1 h后，先用武火煮沸，后用文火煎30 min，濾取藥液。藥渣再同法煎煮20 min，合并2次藥液，混勻，濃縮至濃度為1 g生藥/mL。

1.2.2 動(dòng)物處理 將30只小鼠按體重隨機(jī)分為3組，每組10只，即大劑量（1.4 mL）、小劑量（0.14 mL）和正常對(duì)照組。兩個(gè)給藥組按照大、小劑量灌胃金鈴子水煎液，正常對(duì)照組灌胃等容量的生理鹽水，每天1次，連續(xù)10 d，小鼠正常飲食。在第10天灌胃以后，禁食不禁水24 h。斷頭取血，在36～37℃恒溫水浴箱中保溫30 min后，取出離心10 min（3500 r/min），血清在超低溫下（-80℃）保存。取肝臟加磷酸緩沖液，用可調(diào)勻漿機(jī)制成1%勻漿液。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo) 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血清和肝組織AST和ALT活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 血清和肝組織AST活性比較

與正常對(duì)照組比較，金鈴子大、小劑量組血清中AST均明顯降低（P＜0.05）。金鈴子大劑量組肝組織AST活性降低（P＜0.05），小劑量組肝組織AST活性均無明顯變化。見表1。

表1 血清和肝組織AST活性的比較（± s，U/L）

表1 血清和肝組織AST活性的比較（± s，U/L）

注：與正常對(duì)照組比較，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.05；#P ＜ 0.05，##P ＜0.05

組別 血清AST活性 肝組織AST活性正常對(duì)照組 12.33±0.57 12.70±1.09大劑量組 10.20±0.88** 10.80±2.01#小劑量組 10.18±1.65* 11.32±1.84##

2.2 血清和肝組織ALT活性比較

與正常對(duì)照組比較，金鈴子大、小劑量組血清和肝組織中ALT活性有微小變化，但變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 血清和肝組織ALT活性的比較（± s，U/L）

表2 血清和肝組織ALT活性的比較（± s，U/L）

注：與正常對(duì)照組相比，P均＞0.05

組別 血清ALT活性 肝組織ALT活性正常對(duì)照組 1.41±0.16 3.36±2.02大劑量組 1.36±0.91 3.02±1.31小劑量組 1.21±0.37 2.95±0.67

3 討論

3.1 轉(zhuǎn)氨酶對(duì)機(jī)體代謝的影響

轉(zhuǎn)氨酶是人體代謝過程中必不可少的酶，主要存在于肝組織、心肌、骨骼肌內(nèi)。其中AST主要存在于肝臟，主要參與機(jī)體糖異生。糖異生是乳酸、甘油和氨基酸等在酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)椴蒗Ｒ宜?，然后生成糖的過程。其中乳酸在乳酸脫氫酶作用下轉(zhuǎn)變?yōu)楸幔徇M(jìn)入線粒體內(nèi)經(jīng)過丙酮酸羧化酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)椴蒗Ｒ宜?，天門冬酸氨基轉(zhuǎn)換酶將細(xì)胞內(nèi)的草酰乙酸轉(zhuǎn)變?yōu)樘扉T冬氨酸后再逸出線粒體，進(jìn)入胞液中的天門冬氨酸再經(jīng)胞液中天門冬酸氨基轉(zhuǎn)換酶催化而恢復(fù)生成草酰乙酰，胞液中的由草酰乙酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化下生成磷酸烯醇式丙酮酸，磷酸烯醇式丙酮酸再在酶的催化下生成葡萄糖[2]。通過有效的糖異生消耗了體內(nèi)的乳酸，降低了乳酸的水平。若天門冬酸氨基轉(zhuǎn)換酶水平降低，乳酸的利用率就減少，造成乳酸體內(nèi)蓄積。乳酸在體內(nèi)蓄積過多可引起乳酸中毒，尤其是在無氧酵解多的時(shí)候，中毒癥狀會(huì)更嚴(yán)重些。

3.2 金鈴子對(duì)轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

據(jù)資料顯示，金鈴子提取液劑量達(dá)30.6 g生藥/kg以上，口服1 h后就能出現(xiàn)明顯的急性肝損傷。肝臟受損的機(jī)制可能是通過氧化應(yīng)激反應(yīng)引起TNF-α，NF-κB，ICAM-1等炎癥因子又加重肝臟的損傷[3]。在肝受損的情況下肝細(xì)胞內(nèi)的AST和ALT轉(zhuǎn)移到血液而使血清中AST、ALT活性明顯升高[4]，酶水平的高低能夠客觀反映肝臟受損情況，而血清中AST、ALT水平降低則對(duì)診斷肝損傷無實(shí)際意義。本研究表明，較低劑量的金鈴子水煎液可明顯降低血清和肝組織中AST活性，而對(duì)血清和肝組織中ALT活性無明顯影響，10倍臨床劑量金鈴子水煎液未能引起肝損傷。較低劑量金鈴子水煎液可能是ALT的抑制劑，通過減少糖異生，使乳酸在體內(nèi)異常蓄積，進(jìn)而引起乳酸中毒的潛在危害。

[1]熊彥紅，齊雙巖，金若敏，等.川楝子對(duì)大鼠肝毒性的時(shí)效和量效關(guān)系研究[J].江蘇中醫(yī)藥，2008，40（7）：83-85.

[2]董曉燕.生物化學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2010：120-121.

[3]齊雙巖，金若敏，劉紅杰，等.川楝子致大鼠肝毒性機(jī)制研究[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33（16）：2045-2047.

[4]孫建，周洪雷.中藥川楝子臨床應(yīng)用研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，10（1）：27-28.