任存霞

內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院中醫(yī)學(xué)院（內(nèi)蒙古呼和浩特 010059）

蒿芩清膽湯對(duì)陽(yáng)黃證大鼠β-G、UDPGT的影響*

任存霞

內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院中醫(yī)學(xué)院（內(nèi)蒙古呼和浩特 010059）

目的 探討復(fù)方蒿芩清膽湯對(duì)陽(yáng)黃證黃疸動(dòng)物模型肝細(xì)胞攝取、轉(zhuǎn)化、排泄膽紅素的影響，揭示其利膽退黃的機(jī)制。方法 在采用異硫氰酸-1-萘酯（ANIT）灌胃誘導(dǎo)大鼠肝損傷的基礎(chǔ)上，結(jié)合中醫(yī)高脂高糖飲食加濕熱環(huán)境因素，建立中醫(yī)陽(yáng)黃證黃疸動(dòng)物模型。觀察大鼠一般生物學(xué)狀態(tài)、β-葡萄糖醛酸酶含量、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶（UDPGT）活性、D-木糖吸收率的變化，并予復(fù)方蒿芩清膽湯治療，探討其對(duì)膽紅素代謝的影響。結(jié)果 陽(yáng)黃證動(dòng)物模型符合黃疸特點(diǎn)，β-葡萄糖醛酸酶含量升高、UDPGT活性及D-木糖含量下降，肝病理組織學(xué)改變符合肝內(nèi)膽汁淤積黃疸的病理改變。經(jīng)中藥蒿芩清膽湯治療后，各指標(biāo)明顯改善。結(jié)論 蒿芩清膽湯保肝利膽退黃作用機(jī)理可能與降低肝細(xì)胞β-葡萄糖醛酸酶含量、誘導(dǎo)UDPGT活性、促進(jìn)膽紅素排泄，從而改善膽紅素代謝有關(guān)。

黃疸 陽(yáng)黃證 濕熱證 蒿芩清膽湯

蒿芩清膽湯源自《重訂通俗傷寒論》，廣泛用于五臟之濕熱或痰濕為患諸證，如濕溫病、黃疸、嘔逆、淋證、眩暈、盜汗等。有文獻(xiàn)報(bào)道用本方治療肝細(xì)胞性黃疸等疾?。?］。前期實(shí)驗(yàn)研究表明，本方具有利膽抗急性膽道感染、降低血清轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素，保肝護(hù)肝的功效［2］。本課題運(yùn)用病證結(jié)合的方法，建立符合中醫(yī)病因病機(jī)理論的陽(yáng)黃證黃疸動(dòng)物模型，通過觀察模型動(dòng)物β-葡萄糖醛酸酶（β-G）含量，尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶（（UDPGT）活性，D-木糖吸收率的變化，進(jìn)一步探索中藥利膽退黃的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥物 蒿芩清膽湯水煎液（質(zhì)量濃度1g/mL，組成：青蒿6g，竹茹 9g，半夏 5g，赤茯苓 9g，黃芩 9g，枳殼 5g，陳皮 5g，滑石 6g，青黛2g，甘草1g）［3］。所有藥物均購(gòu)自內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)院中藥房，并經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥理教研室鑒定。

1.2 動(dòng)物 wistar大鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量180～220g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，清潔級(jí)，編號(hào)：2009-0001。

1.3 試劑 異硫氰酸-1-萘酯（ANIT），由北京通縣育才精細(xì)化工廠生產(chǎn)。普通食用色拉油，經(jīng)高溫滅菌處理。β-G測(cè)試盒，購(gòu)于福建省中外合資藍(lán)波生物技術(shù)研究所。D-木糖測(cè)試盒，購(gòu)于南京建成生物研究所。UDPGT采用Black法，UDPGA、洋地黃皂苷，購(gòu)于美國(guó)Sigma公司北京代理公司-北京舒伯偉公司；2-戊酮、膽紅素為中生北控科技股份有限公司出品?？捡R斯亮蘭測(cè)試盒，購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.4 分組與造模 將大鼠分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、濕熱模型組、陽(yáng)黃模型組及中藥治療組，每組10只。 陽(yáng)黃證造模階段時(shí)處長(zhǎng)夏季節(jié)，濕熱證造模21d，其中，中藥治療組預(yù)防性給藥14d。黃疸造模48h，取材2d。正常對(duì)照組每日予0.9%氯化鈉注射液2mL/100g灌胃。模型對(duì)照組第1～21日予0.9%氯化鈉注射液2mL/100g灌胃，第22日予0.5%ANIT灌胃1次 （將ANIT溶于色拉油中）。每日濕熱模型組、陽(yáng)黃模型組、中藥治療組放于濕熱造模箱內(nèi) （造模箱內(nèi)溫度28～32℃，相對(duì)濕度RH＞92% ）。每日上午喂飼1∶1的50%葡萄糖和豬油脂混合液2mL/100g灌胃。第8日起，中藥治療組每日下午給100%蒿芩清膽湯2mL/100g灌胃。第22日，陽(yáng)黃模型組、中藥治療組均予0.5%ANIT灌胃1次（將ANIT溶于色拉油中）。以上各組大鼠在實(shí)驗(yàn)過程中均不限飲食。

1.5 標(biāo)本采集與檢測(cè) 第24日處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血離心，無菌操作取肝臟，固定于1∶9的40%甲醛和95%酒精混合液中，HE染色法作病理學(xué)檢測(cè)。β-G、D-木糖采用比色法測(cè)定，具體操作按照測(cè)試盒說明書進(jìn)行；UDPGT測(cè)定采用Black法［4］，蛋白測(cè)定采用考馬斯亮蘭法，按說明書操作。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠一般情況 造模后，陽(yáng)黃模型組大鼠鞏膜黃染、皮膚（尾、耳背、肛周、口周）黃染，大鼠體質(zhì)量明顯下降，肛溫升高，被毛松散無光澤，反應(yīng)遲鈍，飲水量增多，大便呈條狀稀便，顏色呈淺黃色，符合陽(yáng)黃證特點(diǎn)。

2.2 各組大鼠β-G含量的測(cè)定 見表1。模型對(duì)照組、陽(yáng)黃模型組β-G含量與正常對(duì)照組比較明顯升高（P＜0.01），其中陽(yáng)黃模型組更甚；濕熱模型組較正常對(duì)照組也有升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中藥治療組與陽(yáng)黃模型組相比，β-G含量下降（P＜0.01），與正常對(duì)照組無顯著差異。

表1 各組大鼠 β-G、UDPGT、D-木糖水平比較 （±s）

表1 各組大鼠 β-G、UDPGT、D-木糖水平比較 （±s）

與正常對(duì)照組比較,*P＜0.05，**P＜0.01;與陽(yáng)黃模型組比較,△P＜0.01。

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2.3 各組大鼠UDPGT含量比較 見表1。模型對(duì)照組、濕熱模型組、陽(yáng)黃模型組UDPGT活性與正常對(duì)照組比較明顯降低（P＜0.01），其中陽(yáng)黃模型組最甚；中藥治療組數(shù)值回升，與陽(yáng)黃模型組數(shù)值相比，有顯著差異（P＜0.01）。

2.4 各組大鼠血清D-木糖含量的測(cè)定 見表1。模型對(duì)照組、陽(yáng)黃模型組D-木糖含量與正常對(duì)照組比較明顯降低，其中陽(yáng)黃模型組更為明顯；濕熱模型組較正常對(duì)照組也有降低，但無顯著差異；中藥治療組數(shù)值回升，與陽(yáng)黃模型組相比，有顯著差異（P＜0.01），而與正常對(duì)照組無顯著差異。

2.5 各組大鼠肝臟病理學(xué)變化 光鏡觀察可見，陽(yáng)黃模型組肝臟可見灶狀或小片狀肝細(xì)胞壞死，細(xì)胞腫大，部分病例肝細(xì)胞漿疏松呈空網(wǎng)狀，部分變圓，胞漿清亮呈氣球樣。肝細(xì)胞索較擁擠，部分區(qū)域肝竇受壓變窄，呈狹小裂隙狀，其內(nèi)枯否細(xì)胞增生、腫大。中央靜脈擴(kuò)張，匯管區(qū)可見淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，小葉間靜脈擴(kuò)張。濕熱模型組肝臟病理改變不明顯，肝細(xì)胞可見單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。模型對(duì)照組淤膽明顯，炎性損害程度輕。中藥治療組炎性損害程度、肝細(xì)胞壞死程度均減輕，無淤膽。中藥治療組雖有不同程度肝細(xì)胞破壞，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，淤膽等肝損傷病變，但與陽(yáng)黃模型組比較，損傷程度明顯減輕，只1例淤膽。

圖1 各組肝臟組織病理學(xué)觀察（×400）

3 討 論

黃疸是肝內(nèi)外各種疾病所引起的膽紅素代謝障礙的綜合性病理過程。血清中膽紅素含量升高，引起鞏膜、皮膚、黏膜、某些體液和其他組織黃染現(xiàn)象。黃疸是中醫(yī)臨床常見的一個(gè)獨(dú)立病證，臨床以身黃、目黃、小便黃為特征。黃疸根據(jù)臨床表現(xiàn)及寒熱屬性分為陽(yáng)黃、陰黃。陽(yáng)黃證屬實(shí)證，病勢(shì)急，病情較輕，病程短，預(yù)后良好，病機(jī)為濕熱阻滯，熏蒸肝膽，病位主要在膽、胃。中醫(yī)陽(yáng)黃包括的范圍比較廣泛，諸如急性病毒性肝炎、急性膽囊炎、阻塞性黃疸等以黃疸為主癥的疾?。?］。

β-G是一種溶酶體內(nèi)酸性水解酶，在肝臟中特別豐富，其能分解膽紅素-葡萄糖醛酸酶酯的酯鏈，使腸道的直接膽紅素轉(zhuǎn)化為未結(jié)合膽紅素，后者是一種脂溶性的非極性物質(zhì)，易于在小腸重吸收進(jìn)入腸肝循環(huán)，所以β-G在增加膽紅素腸肝循環(huán)方面起重要作用。研究證實(shí)，當(dāng)肝細(xì)胞受損或有炎癥時(shí)β-G分泌量顯著增加［5］。其活性高低反映肝細(xì)胞損傷程度和再生情況。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來推斷，蒿芩清膽湯能治療陽(yáng)黃證可能與抑制該酶活性有關(guān)。

測(cè)定D-木糖是監(jiān)測(cè)腸吸收功能的重要手段之一。陽(yáng)黃狀態(tài)下，D-木糖含量降低，提示小腸吸收功能減弱，膽紅素排泄受到阻礙，而經(jīng)蒿芩清膽湯治療后，吸收率提高，提示蒿芩清膽湯退黃機(jī)制之一可能是通過促進(jìn)膽紅素排泄而實(shí)現(xiàn)的。

UDPGT是體內(nèi)催化膽紅素結(jié)合反應(yīng)的主要肝微粒體酶，主要存在于肝細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜中。膽紅素與Y蛋白復(fù)合物被運(yùn)至滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，在UDPGT的作用下，生成葡萄糖醛酸膽紅素-結(jié)合膽紅素，結(jié)合膽紅素水溶性增加，隨膽汁排入小腸。一些藥物可以誘導(dǎo)提高UDPGT活性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型對(duì)照組、濕熱模型組、陽(yáng)黃模型組，尤其是陽(yáng)黃模型組UDPGT活性下降明顯，而經(jīng)蒿芩清膽湯治療后其活性提高，雖然與正常組比還有差異，但與陽(yáng)黃組比較已顯示出顯著差異，提示蒿芩清膽湯的利膽退黃作用可能與其誘導(dǎo)UDPGT活性有關(guān)，蒿芩清膽湯促進(jìn)了膽紅素的葡萄糖醛酸化，使結(jié)合膽紅素生成增加，從而促進(jìn)膽紅素代謝。

蒿芩清膽湯即可和解少陽(yáng)，清利膽腑，又可分消走泄，宣通三焦氣機(jī)，使痰濕之邪盡除。蒿芩清膽湯方含溫膽湯、碧玉散，既可調(diào)理中焦脾胃，又兼及上下，上能宣展肺氣，下能通利小便，故為治療陽(yáng)黃證首選。臨床研究證實(shí)蒿芩清膽湯是治療肝細(xì)胞性黃疸的有效方劑，且在護(hù)肝降酶方面優(yōu)于思美泰，在退黃方面與思美泰相當(dāng)，療效確切，服用安全，價(jià)格低廉［1］。藥理研究表明蒿芩清膽湯能夠退黃可能與以下機(jī)制有關(guān)：（1）護(hù)肝及降酶作用［2］；（2）促進(jìn)膽汁分泌作用［7］；（3）利尿作用［7］；（4）調(diào)理胃腸功能［8］。而本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用病證結(jié)合的方法，建立符合傳統(tǒng)中醫(yī)病因病機(jī)理論的陽(yáng)黃證黃疸動(dòng)物模型，檢測(cè)了中藥復(fù)方蒿芩清膽湯對(duì)模型動(dòng)物膽紅素代謝重要環(huán)節(jié)的影響，可以看出各組動(dòng)物β-G、UDPGT、D-木糖含量的不同變化。

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R285.5

A

1004-745X（2011）08-1252-02

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金課題（2009MS1167）

2011-03-29）