高麗杰，楊麗君，黃志強(qiáng)

(1.解放軍總醫(yī)院肝膽外科研究所，北京 100853;2.解放軍309醫(yī)院中心門診部，北京 100091)

丹參(Salvia miltiorrhizaBunge)為唇形科鼠尾草屬多年生草本植物，其藥用部位為干燥根及根莖，具有活血祛瘀、養(yǎng)血安神、調(diào)經(jīng)止痛、涼血消癰等作用功效［1］。文獻(xiàn)報(bào)道，丹參的活性成分分為脂溶性成分和水溶性成分，其脂溶性成分主要為丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I等，具有抗菌消炎、細(xì)胞保護(hù)與耐缺氧、抑制血小板聚集、改善冠狀動(dòng)脈供血等活性;其水溶性成分主要為丹參素和原兒茶醛等，具有抗自由基與抗脂質(zhì)過(guò)氧化、降血脂以及擴(kuò)張冠脈、抑制血小板聚集、抗血檢形成、抗肝纖維化等作用［2、3］。本研究通過(guò)測(cè)定丹參總提取物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間、血乳酸、血尿素氮和肝組織中肝糖元含量，觀察丹參總提物的抗疲勞作用;通過(guò)測(cè)定血清乳酸脫氫酶活性、全血中血紅蛋白濃度以及氧化損傷指標(biāo)骨骼肌丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性，初步探討丹參總提物抗疲勞作用的相關(guān)機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)KM小鼠均為雄性，體重20g±2g，6～8周齡，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(許可證號(hào) SCXK-(軍)2007-004)。

1.2 藥物

丹參總提物(DSH由本單位提供)、紅景天膠囊(由四川志遠(yuǎn)嘉寶藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn))。

1.3 試劑

肝素鈉、血乳酸(LD)、血尿素氮(BUN)、乳酸脫氫酶(LDH)、肝/肌糖元(HG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、血紅蛋白(Hb)、考馬斯亮藍(lán)等檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.4 儀器

Sunrise酶標(biāo)儀(天美國(guó)際貿(mào)易有限公司)、DY89-1型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)、YLS-10B轉(zhuǎn)輪式疲勞儀(山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院)、秒表等。

2 方法

2.1 分組及給藥

雄性小鼠48只隨機(jī)分為正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(紅景天膠囊 HJT 500mg·kg－1)、DSH 大、中、小(500、250、125mg·kg－1)劑量組以及模型對(duì)照組，每組8只。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組用生理鹽水灌胃作為對(duì)照;各藥物觀察組分別給予相應(yīng)劑量藥物灌胃治療，1次/d，連續(xù)給藥4周。

2.2 模型建立及運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間測(cè)定

采用轉(zhuǎn)輪式疲勞儀每天對(duì)除正常對(duì)照組外的其余各組小鼠進(jìn)行跑步訓(xùn)練，每次訓(xùn)練30min(條件:轉(zhuǎn)速20r/min，電擊耐受時(shí)間 3s，刺激電流 1.5mA，難度系數(shù)由低到高)。第21天小鼠給藥后30min放入轉(zhuǎn)輪式疲勞儀中進(jìn)行力竭測(cè)試(條件:20r/min、3s、1.5mA，中等難度)，力竭狀態(tài)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置(長(zhǎng)時(shí)電擊后休息時(shí)間30s，5min內(nèi)休息5次)，測(cè)試需平行對(duì)照以免造成組間差異。

2.3 血液生化指標(biāo)測(cè)定

末次給藥后30min，除正常對(duì)照組外，其余組小鼠放入轉(zhuǎn)輪式疲勞儀中(條件:20r/min、3s、1.5mA、難度中)連續(xù)跑2h，立即摘除眼球采血，正常對(duì)照組直接取血。將血樣分為2份，1份加肝素鈉抗凝后制備全血，以測(cè)定血紅蛋白(Hb);另1份制備血清以測(cè)定乳酸(LD)、乳酸脫氫酶(LDH)活性、血尿素氮(BUN)濃度。取出小鼠肝臟，采用試劑盒測(cè)定肝臟中肝糖原的含量，剪取小鼠腿部?jī)?nèi)側(cè)腓腸肌，去除多余脂肪制備10%組織勻漿，以測(cè)定脂質(zhì)過(guò)氧化水平MDA、SOD含量或活性。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS 13.0軟件，成組設(shè)計(jì)定量資料用t檢驗(yàn)，單因素多水平設(shè)計(jì)定量資料用方差分析。

3 結(jié)果

3.1 DSH對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間的影響

DSH組的運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間與紅景天膠囊組相當(dāng)。

表1DSH對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間的影響(±s)

表1DSH對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間的影響(±s)

注:與模型對(duì)照組比較:bP ＜0.05，cP ＜0.01

組別 劑量/mg·kg－1 n/只 力竭時(shí)間/min 延長(zhǎng)率/%模 型 對(duì) 照 組8 257.9 ±20.03 HJT 500 8 279.7 ±46.65 8.45 DSH 大 500 8 312.4 ±56.75b 21.13 DSH 中 250 8 298.9 ±56.03 15.90 DSH 小 125 8 286.4 ±65.08 11.05正 常 對(duì) 照 組8 286.4 ±51.19 11.05

3.2 DSH對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血清中 LD含量、LDH活力、BUN含量及肝臟中HG含量的影響

DSH大劑量組運(yùn)動(dòng)后，血清中的LD含量明顯減少，與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05)。3個(gè)給藥組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠運(yùn)動(dòng)后血漿中LDH活性均增高(P＜0.01)。250和500mg/kg 2個(gè)劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組都能使小鼠運(yùn)動(dòng)后血漿中BUN含量顯著降低(P＜0.01)，使肝臟中HG含量明顯增加(P＜0.05)。大劑量DSH結(jié)果顯示的4項(xiàng)指標(biāo)均略強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照組。

表1顯示，與模型對(duì)照組相比，丹參總提取物3個(gè)DSH劑量組隨著劑量增加，均使小鼠運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間延長(zhǎng)，大劑量組與對(duì)照組有顯著差異(P＜0.05)，小劑量

表2DSH對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血清中LD、LDH、BUN及HG影響(±s)

表2DSH對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血清中LD、LDH、BUN及HG影響(±s)

注:與模型對(duì)照組比較:bP ＜0.05，cP ＜0.01

組組織模 型 對(duì) 照 組 8 2.923 ±0.640 5957 ±220 16.49 ±1.03 7.303 ±0.7別 劑量/mg·kg－1 n/只 LD/mmol·L－1 LDH 活性/U·L－1 BUN/mg·L－1 HG/mg·g－1 76 HJT 500 8 2.584 ±0.422 6914 ±482c 10.82 ±2.29c 8.551 ±0.780b DSH 大 500 8 2.140 ±0.210b 7019 ±508c 9.77 ±1.17c 8.876 ±0.706b DSH 中 250 8 2.513 ±0.321 6671 ±374c 12.08 ±1.80c 8.540 ±0.606b DSH 小 125 8 2.600 ±0.523 6620 ±602b 14.17 ±2.44 7.608 ±0.595正 常 對(duì) 照 組 8 2.964 ±0.549 6451 ±479 14.22 ±1.94 7.686 ±0.701

3.3 DSH對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后 MDA含量、SOD活性及全血中Hb濃度的影響

3個(gè)DSH給藥組小鼠運(yùn)動(dòng)后骨骼中MDA含量均降低且有顯著性差異 (P＜0.05，P＜0.01)，但對(duì)骨骼中SOD含量和血紅蛋白含量沒(méi)有顯著影響。

表3DSH對(duì)小鼠骨骼肌MDA、SOD及Hb的影響(±s)

表3DSH對(duì)小鼠骨骼肌MDA、SOD及Hb的影響(±s)

注:與模型對(duì)照組比較:bP ＜0.05，cP ＜0.01

組 別 劑量/mg·kg－1 n/只MDA/nmol·mgprot－1 SOD/U·ml－1血紅蛋白/g·L －1模型對(duì)照組8 41.38 ±3.443 119.9 ±10.09 86.96 ±5.98 HJT 500 8 29.89 ±3.656c 134.1 ±19.13 92.66 ±5.84 DSH 大 500 8 33.73 ±3.823c 134.5 ±12.23 98.78 ±8.36 DSH 中 250 8 35.00 ±3.718b 133.8 ±16.61 97.81 ±4.46 DSH 小 125 8 35.02 ±3.117b 133.7 ±17.35 96.46 ±7.75正常對(duì)照組 8 29.24 ±4.010c 134.8 ± 18.92 88.98 ± 6.27

4 討論

機(jī)體抗疲勞能力加強(qiáng)可提高機(jī)體的運(yùn)動(dòng)能力，小鼠運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間是反映動(dòng)物運(yùn)動(dòng)疲勞程度的常用指標(biāo)。當(dāng)機(jī)體長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)時(shí)消耗肌糖原和肝糖原，維持正常的血糖水平。當(dāng)糖原耗竭后，血糖濃度降低，中樞神經(jīng)系統(tǒng)供能不利而出現(xiàn)疲勞。肝糖原和肌糖原儲(chǔ)備越充足，它提供運(yùn)動(dòng)所需的能量就越多，疲勞就會(huì)延遲出現(xiàn)［4、5］。本研究結(jié)果顯示，丹參提取物DSH大劑量能夠通過(guò)增加小鼠肌糖原和肝糖原儲(chǔ)備，維持機(jī)體運(yùn)動(dòng)時(shí)血糖水平，從而為機(jī)體提供更多的能量以達(dá)到抗疲勞的目的。

乳酸(LD)是糖無(wú)氧酵解的產(chǎn)物，體內(nèi)乳酸的積累會(huì)影響機(jī)體內(nèi)的正常代謝過(guò)程，是引起運(yùn)動(dòng)性疲勞的一個(gè)重要原因。血乳酸水平可以反映有氧代謝能力、疲勞的產(chǎn)生和消除速度［5、6］。本研究發(fā)現(xiàn)，服用丹參提取物DSH的小鼠運(yùn)動(dòng)后，血清中LD含量明顯減少，LDH活性增強(qiáng)，表明DSH能夠減少乳酸運(yùn)動(dòng)中乳酸的產(chǎn)生和堆積，促進(jìn)乳酸的清除和疲勞的恢復(fù)。當(dāng)機(jī)體較長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)后，蛋白質(zhì)與氨基酸分解代謝加強(qiáng)，血清尿素氮(BUN)含量增加，同時(shí)糖原被大量消耗。因此劇烈運(yùn)動(dòng)后，血清BUN含量和肝臟肝糖原HG的含量是評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)后身體恢復(fù)狀況的良好指標(biāo)［7］。中、大劑量DSH給藥組能使小鼠運(yùn)動(dòng)后的 BUN含量降低，肝糖原 HG含量提高，提示DSH能提高機(jī)體對(duì)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的適應(yīng)能力，促進(jìn)體能的恢復(fù)。從上述結(jié)果可以看出，DSH可以增加肌糖原和肝糖原含量，減少小鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)的乳酸生成，并促進(jìn)運(yùn)動(dòng)后血乳酸的清除，從而起到一定的抗疲勞作用。

在長(zhǎng)時(shí)間大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)時(shí)，由于能量代謝增加，組織細(xì)胞需要大量氧化功能使紅細(xì)胞的載氧量大大提高，紅細(xì)胞內(nèi)氧分壓增加，運(yùn)輸氧的速率加快，血紅蛋白轉(zhuǎn)換頻率增加，導(dǎo)致紅細(xì)胞內(nèi)O－

2產(chǎn)生的幾率和數(shù)量也大大增加，其膜上大量不飽和脂肪酸因受到自由基的攻擊而產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞有毒性的脂質(zhì)過(guò)氧化物及其終產(chǎn)物丙二醛 MDA［8］。本文實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，DSH給藥組小鼠運(yùn)動(dòng)后，骨骼中MDA含量與對(duì)照組比較均顯著降低(P＜0.05或P＜0.01)，可闡明大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后內(nèi)源性自由基產(chǎn)生增多，導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)受損。DSH能抑制小鼠長(zhǎng)時(shí)間疲勞性運(yùn)動(dòng)后骨骼中MDA的產(chǎn)生，提示DSH可能具有清除自由基和抗氧化作用。

綜上所述，DSH具有明顯的抗運(yùn)動(dòng)性疲勞作用，其抗疲勞機(jī)制可能與增加乳酸脫氫酶活性和肝糖元儲(chǔ)備以及抗氧化活性有關(guān)。

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