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土茯苓配方顆粒對(duì)臨床常見致病菌的抗菌研究*

2011-08-24 06:55殷網(wǎng)虎袁武軍曹美琳
中國(guó)中醫(yī)急癥 2011年12期
關(guān)鍵詞:土茯苓埃希菌紙片

殷網(wǎng)虎 袁武軍 曹美琳

江蘇省鎮(zhèn)江市中醫(yī)院(江蘇鎮(zhèn)江 212003)

土茯苓配方顆粒對(duì)臨床常見致病菌的抗菌研究*

殷網(wǎng)虎 袁武軍 曹美琳

江蘇省鎮(zhèn)江市中醫(yī)院(江蘇鎮(zhèn)江 212003)

目的 觀察土茯苓配方顆粒對(duì)臨床主要致病菌的抗菌效果。方法 采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI/NCCLS)推薦的液體稀釋法檢測(cè)MIC,瓊脂稀釋法檢測(cè)MBC,K-B紙片法檢測(cè)土茯苓維生素C聯(lián)合抗菌作用。結(jié)果 土茯苓配方顆粒對(duì)銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、肺炎克雷伯菌、洋蔥伯克霍爾德菌的MIC50分別為25、1.56、12.5、25、0.78、6.25mg/mL;土茯苓維生素C復(fù)合紙片的抑菌圈均明顯大于土茯苓配方顆粒紙片。結(jié)論 土茯苓配方顆??咕钚暂^強(qiáng),聯(lián)合使用維生素C可以增強(qiáng)其抗菌效能。

土茯苓配方顆粒 最小抑菌濃度 藥物敏感試驗(yàn) 最小殺菌濃度

近年來,濫用抗菌藥物造成細(xì)菌耐藥率不斷上升。面對(duì)這一嚴(yán)峻現(xiàn)狀,發(fā)揮中藥抗菌的優(yōu)勢(shì)已成為重要課題[1]。土茯苓是百合科植物光葉菝葜(Smixlax glabra Roxb.)的干燥根莖,具有除濕、解毒、通利關(guān)節(jié)等功效,臨床主要用于治療梅毒、淋濁、筋骨攣痛、腳氣、療瘡、癰等[2]。土茯苓配方顆粒是一種采用低溫萃取、真空濃縮制成的全組分顆粒劑。本文采用K-B法和液體稀釋法分別觀察了土茯苓配方顆粒及聯(lián)合維生素C對(duì)臨床常見菌株的抗菌作用。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 實(shí)驗(yàn)菌株共計(jì)211株,其中208株分離自我院及鎮(zhèn)江市其他醫(yī)療單位臨床標(biāo)本,各菌株均經(jīng)BDcrystal鑒定儀鑒定;3株標(biāo)準(zhǔn)菌株購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。臨床分離菌株中,銅綠假單胞菌33株,大腸埃希菌56株,金黃色葡萄球菌52株,糞腸球菌27株,肺炎克雷伯菌20株,洋蔥伯克霍爾德菌20株。3株標(biāo)準(zhǔn)菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853、大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC29213。

1.2 試劑儀器 M-H(Muller-Hinton)藥敏瓊脂培養(yǎng)基和M-H肉湯干粉培養(yǎng)基,由杭州天和微生物試劑有限公司提供。土茯苓配方顆粒由江陰天江藥業(yè)有限公司提供,批號(hào)1101231。維生素注射液 (維生素C)由江蘇恒順中奇藥業(yè)有限公司提供,批號(hào)110502。BDcrystal自動(dòng)微生物鑒定儀及鑒定卡由美國(guó)BD公司提供。

1.3 土茯苓藥液準(zhǔn)備 稱取土茯苓配方顆粒50g,加入蒸餾水50mL,配成質(zhì)量濃度為1g/mL的原藥液,以2.5mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至7.2,10磅高壓30min滅菌,-30℃冰箱保存,試驗(yàn)前以MH肉湯稀釋。

1.4 土茯苓及土茯苓維生素C復(fù)合藥敏紙片的制備 用打孔器將濾紙打成直徑為6mm的紙片,高壓滅菌。將15μL滅菌土茯苓原液加到紙片上,相當(dāng)于15mg/片,35℃烘干備用;另取部分中藥原液,加入維生素C注射液(0.25g/mL),使維生素C終質(zhì)量濃度為22.2mg/mL,混勻后每紙片加15μL混合液,制成土茯苓配方顆粒維生素C復(fù)合紙片,35℃烘干備用[3]。

1.5 MIC、MBC及抑菌圈的測(cè)定 MIC測(cè)定采用CLSI/NCCLS推薦的液體稀釋法檢測(cè),MBC采用瓊脂稀釋法[4]。在測(cè)出土茯苓的MIC后,將MIC下的液體培養(yǎng)物接種普通瓊脂培養(yǎng)皿,35℃下培養(yǎng)24h,無細(xì)菌生長(zhǎng)培養(yǎng)物的最低土茯苓質(zhì)量濃度為其MBC。挑取被測(cè)菌于生理鹽水中,制成0.5麥?zhǔn)蠞舛鹊木鷳乙?,用無菌棉拭子將菌懸液均勻涂布在M-H瓊脂平板表面,稍干后以無菌鑷子分別將制備好的土茯苓紙片和土茯苓維生素C復(fù)合紙片緊貼于M-H瓊脂表面,紙片間相距24mm,35℃孵育18~24h,測(cè)量抑菌圈直徑,觀察土茯苓維生素C的聯(lián)合抗菌作用。每批藥敏試驗(yàn)均用金黃色葡萄菌ATCC29213、銅綠假單胞菌ATCC27853、大腸埃希菌ATCC25922 3株標(biāo)準(zhǔn)菌株和抗生素慶大霉素在相同條件下作質(zhì)控試驗(yàn),以控制中藥藥敏測(cè)定過程。

2 結(jié) 果

2.1 土茯苓配方顆粒對(duì)不同細(xì)菌的體外抗菌活性 見表1。土茯苓配方顆粒對(duì)銅綠假單胞菌、大腸埃希菌等臨床分離菌株的MIC50為0.78~25mg/mL,顯示土茯苓配方顆粒具有較好的抗菌作用。MIC50最低的是大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌,MIC50分別為1.56mg/mL和 0.78mg/mL。

表1 土茯苓配方顆粒對(duì)208株細(xì)菌的MIC、MBC結(jié)果(mg/mL)

2.2 土茯苓配方顆粒與維生素C聯(lián)合運(yùn)用的抗菌效果 見表2。土茯苓配方顆粒維生素C復(fù)合紙片的抑菌圈要大于土茯苓配方顆粒,兩者對(duì)各組菌種的抑菌圈直徑比較,差異明顯(P<0.01)。

表2 土茯苓配方顆粒與維生素C聯(lián)合運(yùn)用的抑菌圈直徑比較(mm,±s)

表2 土茯苓配方顆粒與維生素C聯(lián)合運(yùn)用的抑菌圈直徑比較(mm,±s)

與土茯苓配方顆粒比較,*P<0.01。

菌 種 n 土茯苓配方顆粒 土茯苓配方顆粒維生素C銅綠假單胞菌 33 12±8 15±9*大腸埃希菌 56 15±9 17±8*金黃色葡萄球菌 52 13±11 15±12*糞腸球菌 27 14±11 16±12*肺炎克雷伯菌 20 17±10 19±13*洋蔥伯克霍爾德菌 20 16±9 20±11*

3 討 論

抗生素誕生之初就出現(xiàn)細(xì)菌耐藥現(xiàn)象[5],目前在全球范圍內(nèi)蔓延。僅僅依靠開發(fā)新的抗生素來抑制細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生顯得較為困難。由于中藥成分復(fù)雜、作用方式多樣等特點(diǎn),細(xì)菌較少對(duì)中藥產(chǎn)生耐藥,使得近年來中藥抗菌的相關(guān)研究成為熱點(diǎn)[6]。

土茯苓含有生物堿、落新婦苷、異黃杞苷、甾醇、皂苷、鞣質(zhì)等成分[7]。土茯苓配方顆粒是土茯苓的全提取物,該種劑型避免了水煎劑和醇提取劑導(dǎo)致的部分成分的流失。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看,土茯苓配方顆粒對(duì)銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、肺炎克雷伯菌、洋蔥伯克霍爾德菌的MIC50分別為 25、1.56、12.5、25、0.78、6.25mg/mL,顯示土茯苓配方顆粒具有較好的抗菌作用,尤其是對(duì)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌抗菌效果最為明顯,MIC50僅為1.56mg/mL和0.78mg/mL。對(duì)于中藥的抗菌機(jī)理,有作者認(rèn)為,部分中藥成分含有多羥基結(jié)構(gòu),能發(fā)生共振,化學(xué)鍵振動(dòng)的波長(zhǎng)與細(xì)菌長(zhǎng)度范圍相當(dāng)時(shí),即會(huì)發(fā)生共振,遭到共振的細(xì)菌或病毒被殺滅[8]。

相關(guān)文獻(xiàn)提示,中藥與維生素C聯(lián)用,能明顯增強(qiáng)中藥的抗菌效果[3]。本研究通過土茯苓配方顆粒維生素C復(fù)合紙片的抗菌觀察,表明維生素C確能增強(qiáng)土茯苓的抗菌效果,加入維生素C后的抑菌圈直徑均較單味土茯苓增大,究其原因,推測(cè)土茯苓等中藥中含有較多的黃酮、皂苷等還原性物質(zhì),維生素C具有較強(qiáng)的還原性,能提高中藥中還原性物質(zhì)的活性,從而提高其抗菌作用。

綜上所述,土茯苓配方顆粒對(duì)臨床常見致病菌具有較好的抑制作用,維生素C能明顯增強(qiáng)土茯苓的抗菌作用,本研究為臨床抗菌治療提供了一個(gè)不同的思路和選擇。

[1]李建志,劉旭紅,楊麗珍,等.11種中草藥抗菌作用實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥信息,2009,26(3):82-83.

[2]蔣受軍.菝葜屬植物菝葜和土茯苓現(xiàn)代研究概況[J].內(nèi)科,2010,5(2):191-195.

[3]蔡璇,彭松,施金玲,等.五種中藥對(duì)139株微生物體外抗菌活性的實(shí)驗(yàn)研究[J].藥學(xué)服務(wù)與研究,2005,5(3):267-290.

[4]NCCLS /CLIS.Perfromance Standards for Antimicrobial Susceptibility testing fifteenth in formational supplement M 100-S15,25(l):44-52.

[5]Walsh C.Molecular mechanisms that confer antibacterial drug resistance [J].Nature,2000,4J06(6797):775-781.

[6]劉芬,姜成.對(duì)產(chǎn)ESBLs大腸桿菌有抑制作用的中草藥初步篩選[J].福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,19(2):33-34.

[7]李強(qiáng).土茯苓現(xiàn)代研究概述[J].中國(guó)藥業(yè),2008,17(14):76-77.

[8]黃為華.化學(xué)鍵振動(dòng)共振殺菌抗病毒機(jī)理 (VI)[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技,2010,17(2):150-152.

Experimental Study of Smixlax Glabra Particles on Common Clinical Pathogent

YIN Wang-hu,YUAN Wu-jun,CAO Mei-lin
Zhenjiang Hospital of Traditional Chinese Medicine (Zhenjiang 212003, Jiangsu)

Objective:To observate the antibacterial activity of Smixlax glabra Particles on common clinical pathogent.Methods:The antibacterial activity about combination of Smixlax glabra Particles and vitamin C was assayed by K-B method.The minimum inhibitory and the minimum bactericidal concentrations respectively were tested using the dilution method.Results:The MIC50of Smixlax glabra Particles on P.aeruginosa,E.coli,S.aureus,Enterococcus faecalis,Klebsiella Pneumoniae subsp.pneumoniae and Burkholderia cepacia were respectively 25mg/mL,1.56mg/mL,12.5mg/mL,25mg/mL,0.78mg/mL,6.25mg/mL.The acteriostatic circle about combination of Smixlax glabra Particles and vitamin C were significantly greater than that of the Smixlax glabra Particle.Conclusion:Smixlax glabra Particle has strong antibacterial activity.It plus vitamin C can enhance antibacterial efficacy of Smixlax glabra Particle.

Smixlax glabra Particle;Minimal inhibitory concentration;Drug sensitive test;Minimal bactericidal concentration

R285.5

A

1004-745X(2011)12-1957-02

江蘇省鎮(zhèn)江市科技局社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目(SH2006049)

2011-08-01)

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