嚴(yán) 倩 許天翔 杭州市蕭山區(qū)第六人民醫(yī)院 杭州 311261

周華斐 浙江省臺(tái)州醫(yī)院

童夏生 王恩智 李晨虹 狄志敏 浙江省臺(tái)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院

細(xì)菌性肺炎（bacterial pneumonia）是兒科常見病、多發(fā)病，是兒童死亡的最主要原因之一[1]。腺病毒或呼吸道病毒感染引起的急性呼吸道感染的嬰兒，其血清中可溶性腫瘤壞死因子受體（sTNFR）2的表達(dá)水平顯著增高[2]。但sTNFR在細(xì)菌性肺炎中的作用尚未完全闡明，尤其是與腫瘤壞死因子（TNF－α）的相關(guān)性如何目前知之甚少。本研究通過檢測(cè)細(xì)菌性肺炎兒童患者血清sTNFR1、sTNFR2和 TNF－α水平變化，探討其在細(xì)菌性肺炎發(fā)病中的作用及判斷病情的臨床意義。

1 臨床資料

41例細(xì)菌性肺炎病例選自我院2009年7月—2010年3月住院患兒，輕度36例，重度5例。所有病例均符合細(xì)菌性肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。經(jīng)痰細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性。其中男26例，女15例，年齡6個(gè)月～9歲，平均（5.5±2.0）歲；另選健康對(duì)照組22例，為同期無感染征象的健康體檢兒童，其中男15例，女7例，年齡3～9歲，平均（5.8±1.5）歲。兩組兒童性別、年齡具可比性。

2 方法

2.1 標(biāo)本采集 采集患兒入院當(dāng)時(shí)（急性期）及癥狀消失后3天（恢復(fù)期）的靜脈血各2mL，3000r/min離心15min，分離血清，－20℃冰箱貯存，集中檢測(cè)。健康對(duì)照組于體檢時(shí)抽取靜脈血。

2.2 血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法，檢測(cè)血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平，操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Biosource公司。具體方法：試劑盒平衡于室溫20～25℃待用，取出96孔反應(yīng)板，分別加入50μL標(biāo)本于反應(yīng)孔里，吸取200μL（sTNFR1或sTNFR2或TNF－α）抗體至反應(yīng)孔里，室溫下孵育1h，吸出液體，洗板3次，加50μL顯色液，室溫孵育15min，每孔加入200μL終止液，全自動(dòng)酶標(biāo)儀（芬蘭Labsystems Dragon公司）在450nm波長(zhǎng)讀取吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)各標(biāo)本吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的濃度。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以（±s）表示。肺炎組的急性期與恢復(fù)期間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，肺炎組與健康對(duì)照組間比較采用成組t檢驗(yàn)。兩變量的相關(guān)分析用Pearson直線相關(guān)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平 細(xì)菌性肺炎患兒急性期血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平顯著性高于對(duì)照組（P均＜0.01）。恢復(fù)期三項(xiàng)指標(biāo)則顯著性低于急性期（P＜0.01，P＜0.05）；肺炎恢復(fù)期sTNFR2和TNF－α水平高于對(duì)照組（P均＜0.01），而sTNFR1水平與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表 1。

pg/mL表 1 血清 sTNFR1、sTNFR2和 TNF－α 比較（±s）

pg/mL表 1 血清 sTNFR1、sTNFR2和 TNF－α 比較（±s）

注：與健康對(duì)照組比較，△P＜0.01；與急性期比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組 別 n/例 sTNFR1 sTNFR2 TNF－α健康對(duì)照組 22 2.07±0.86 4.75±1.68 1.96±0.86肺炎急性期 41 5.05±2.27△ 14.18±6.01△ 3.39±1.73△肺炎恢復(fù)期 41 2.67±1.28** 10.16±3.21△** 2.75±0.82 △*

3.2 相關(guān)性分析 sTNFR1與sTNFR2、TNFα表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)（n=104，r=0.389，P＜0.01；n=104，r=0.244，P＜0.05）；sTNFR2 與 TNF－α 表達(dá)水平無相關(guān)性（P＞0.05）。

4 討 論

TNF是一種具有多種生物學(xué)效應(yīng)的重要生理學(xué)炎癥介質(zhì)，適當(dāng)?shù)腡NF濃度可調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫及代謝功能，增強(qiáng)對(duì)入侵病原體的抵抗力，對(duì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定狀態(tài)及抵制各種致病因子具有重要意義，而TNF過量則可導(dǎo)致多種病理改變。研究[1，4]發(fā)現(xiàn)，TNF在肺炎患者的血清和肺泡灌洗液中表達(dá)升高，并隨著肺炎的嚴(yán)重程度而增加。但TNF的所有生物學(xué)功能都依賴于TNFR，只有在與其受體結(jié)合后，TNF才能發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。TNFR主要有兩種亞型：TNFR1和TNFR2。TNFR在細(xì)胞表面表達(dá)，稱為膜結(jié)合型TNFR（mTNFR），mTNFR在蛋白酶等作用下，可裂解成sTNFR1和sTNFR2，釋放到血液或組織液中。mTNFR和sTNFR的生物學(xué)作用不盡相同，sTNFR仍有結(jié)合TNF的活性，從而調(diào)節(jié)TNF的生物學(xué)功能。TNFR具有重要的生理作用，包括抗炎、細(xì)胞毒作用，對(duì)細(xì)胞增殖作用的影響及Fc的抗TNF作用。sTNFR在正常個(gè)體中水平很低，而在病理狀態(tài)中則明顯升高[4－5]。臨床上已使用依那西普（一種sTNFR）治療特應(yīng)性皮炎，皮膚癥狀得到顯著改善[6]。因此對(duì)TNFR，特別是對(duì)sTNFR的研究，對(duì)疾病的診斷及治療可能有一定的指導(dǎo)作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌性肺炎急性期患者血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平顯著高于對(duì)照組，表明它們可能均參與了肺炎的炎癥過程?；謴?fù)期三項(xiàng)指標(biāo)均顯著低于急性期，表明TNF－α及其sTNFR水平隨著肺炎的炎癥程度而相應(yīng)地發(fā)生變化，在急性期炎癥較重時(shí)升高，恢復(fù)期炎癥減輕時(shí)下降，有助于肺炎的病情判斷。推測(cè)直接或間接阻滯TNF與其受體的結(jié)合可能是有效治療肺炎的途徑之一。肺炎恢復(fù)期sTNFR1和TNF－α水平仍然高于對(duì)照組，提示肺炎恢復(fù)期可能還處于炎癥過程。相關(guān)性分析表明，sTNFR1與sTNFR2水平呈顯著正相關(guān)，提示炎癥過程中兩者的表達(dá)同時(shí)升高或降低，共同起到抗炎作用，而非選擇性地以某一種受體為主。sTNFR1與TNF－α水平呈顯著正相關(guān)，表明sTNFR1表達(dá)水平隨著

變化而變化。相似的研究也表明，社區(qū)獲得性肺炎患兒血清sTNFR1水平顯著高于健康對(duì)照組[7]，而且在非感染引起的慢性肺部疾病的早產(chǎn)兒，sTNFR1水平顯著高于無慢性肺部疾病組[8]。上述均提示sTNFR在呼吸道疾病中起著重要的作用。

［1］張紹芬，鄧?yán)^巋，黃寶興，等.肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液中TNF－α和PS水平變化研究［J］.中國(guó)兒童保健雜志，2009，17（4）：448－450.

［2］Fernández JA，Tapia L，Palomino MA，et al.Plasma interferon－gamma，interleukin－10 and soluble markers of immune activation in infants with primary adenovirus（ADV）and respiratory syncytial virus（RSV）infection［J］.Eur Cytokine Netw，2005，16（1）：35－40.

［3］胡亞美，江載芳．實(shí)用兒科學(xué)［M］．第7版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1180．

［4］周京國(guó)，郭嘵蘭，袁國(guó)華，等.腫瘤壞死因子受體p55和p57在骨關(guān)炎軟骨細(xì)胞的表達(dá)及意義［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2007，11（1）：12－15.

［5］Luce A，Courtin A，Levalois C，et al.Death receptor pathways mediate targeted and non－targeted effects of ionizing radiations in breast cancer cells［J］.Carcinogenesis，2009，30（3）：432－439.

［6］Rullan P，Murase J.Two cases of chronic atopic dermatitis treated with soluble tumor necrosis factor receptor therapy［J］.J Drugs Dermatol，2009，8（9）：873－876.

［7］Droemann D，Hansen F，Aries SP，et al.Neutrophil apoptosis，activation and anti－inflammatory cytokine response in granulocyte colony－stimulating factor－treated patients with community －acquired pneumonia［J］.Respiration，2006，73（3）：340－346.

［8］Sato M，Mori M，Nishimaki S，et al.Soluble tumor necrosis factor receptor－1 in preterm infants with chronic lung disease［J］.Pediatr Int，2010，52（2）：268－272.