黃黎芳

(四川省自貢市第四人民醫(yī)院藥劑科，四川 自貢 643000)

納洛酮是一種特異性阿片受體拮抗劑，對心肌缺血－再灌注損傷有一定的保護(hù)作用[1－2]，但對腎臟的缺血－再灌注損傷是否有保護(hù)作用目前尚未見報(bào)道。本研究利用大鼠腎臟缺血－再灌注損傷模型，觀察納洛酮對腎臟缺血－再灌注后血液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及腎組織中Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶變化的影響，觀察組織病理學(xué)變化，探討納洛酮對腎臟缺血－再灌注損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

UV－2101PC型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)。鹽酸納洛酮注射液(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所研制，北京四環(huán)制藥廠生產(chǎn)，批號為950525);丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及ATP酶試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，批號為960726。Wistar大鼠60只，雌雄不拘，體重為210～270 g，平均(239±19)g，購自山東醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 分組與試驗(yàn)方法

將Wisfar大鼠隨機(jī)分為5組，即正常對照組(假手術(shù)組，A組)、腎缺血60 min組(B組)、腎缺血60 min再灌注20 min組(C組)、納洛酮低劑量組和高劑量組(D1組和D2組)，D1組和D2組分別于術(shù)前1 h腹腔注射納洛酮2 mg/kg與4 mg/kg，每組12只。大鼠肌肉注射30%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉，腹部正中切開后，切除右側(cè)腎臟，以無損傷動(dòng)脈夾夾閉左腎動(dòng)脈，制成腎缺血模型。手術(shù)結(jié)束后從下腔靜脈取血，用以測定MDA及SOD。切取左腎，用冷生理鹽水沖洗除去血液，濾紙拭干稱重(稱取0.5 g)，用玻璃勻漿器制成2%的組織勻漿，按試劑盒說明測定Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶活力，同時(shí)做蛋白定量測定[3]。留取部分腎組織，用甲醛溶液固定，制成石蠟切片，HE染色，光鏡檢查。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 對血中MDA含量和SOD活力的影響

B組與A組血漿MDA含量及全血SOD活力均無顯著性差異(P＜0.05);C組MDA的含量明顯升高，SOD活力顯著降低，與A組和 B 組比較有顯著性差異(P ＜0.01，P ＜0.05)。D1組和 D2組與C組比較，MDA含量明顯下降，SOD活力明顯升高，與B組及A組無顯著差異。結(jié)果見表1。

表1 各組觀察指標(biāo)比較(±s，n=12)

表1 各組觀察指標(biāo)比較(±s，n=12)

注:與 A 組比較，＊P＜0.01;與 C 組比較，△P ＜0.05，▲P＜0.01。

組別A組B組C組D1組D2組MDA(μmol/L)4.8 ± 1.0 5.3 ± 2.0 12.5 ± 3.5＊8.9 ± 1.5＊△5.7 ± 1.0▲SOD(NU/mL)142±37 120±16 92±35＊136 ±24＊△143±16▲Na+－K+－ATP酶[μmolPi/(mg·pr·h)]3.6 ± 0.7 3.1 ± 1.2 2.1 ± 0.5＊2.8 ± 1.0 2.9 ± 0.6▲Ca+－ATP酶[μmolPi/(mg·pr·h)]3.9 ± 0.7 3.1 ± 1.3 2.1 ± 0.4＊2.6 ± 0.5＊△3.3 ± 0.6▲

2.2 對腎組織中Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶活力的影響

B組Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶活力與A組間無顯著性差異(P＜0.05);C組酶活力明顯下降，與上述兩組相比有顯著性差異(P＜0.01)。D1組中 Na+－K+－ATP酶活力有所升高，但與C組相比無顯著性差異(P＜0.05);D2組與C組相比有顯著性差異(P＜0.1)。各組 Ca2+－ATP酶的變化與 Na+－K+－ATP酶的變化基本相同。結(jié)果見表1。

2.3 腎臟組織病理學(xué)檢查結(jié)果

缺血60 min后，大鼠腎臟變?yōu)榘导t色，明顯水腫;再灌注20 min后，腎臟外觀與缺血組(B組)比較無明顯變化，預(yù)先給予納洛酮的大鼠腎臟缺血－再灌注后外觀明顯好轉(zhuǎn)，顏色接近正常，僅有小范圍的暗紅色區(qū)域。光鏡下見缺血組(B組)部分腎小管上皮水樣變性，并見蛋白管型，腎間質(zhì)局部出血伴水腫;再灌注組(C組)腎小管上皮細(xì)胞明顯水樣變性，腎間質(zhì)局部出血伴水腫，并見蛋白管型;納洛酮低劑量組(D1組)腎小管上皮輕度水樣變性，腎間質(zhì)輕度水腫，偶見管型;高劑量組(D2組)僅見部分腎小管上皮輕度水樣變性。各組腎小球均無明顯變化。

3 討論

許多研究表明，腎臟缺血－再灌注造成腎組織損傷的主要機(jī)制是:缺血時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞的黃嘌呤脫氫酶轉(zhuǎn)變?yōu)辄S嘌呤氧化酶，再灌注時(shí)催化ATP降解產(chǎn)物次黃嘌呤氧化生成尿酸，這個(gè)過程可產(chǎn)生大量氧自由基，可導(dǎo)致脂肪損傷，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物，破壞生物膜的結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞變性、壞死[4]。本研究發(fā)現(xiàn)，單純腎缺血60 min時(shí)MDA無明顯改變，再灌往20 min后其值明顯升高;而SOD在缺血時(shí)變化不明顯，再灌注時(shí)顯著下降，這與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致[5]。應(yīng)用納洛酮后MDA下降，SOD升高，表明納洛酮能抑制脂質(zhì)過氧化物升高，增強(qiáng)清除自由基的能力，高劑量比低劑量作用更明顯。

腎小管細(xì)胞的基側(cè)膜內(nèi)有Na+－K+－ATP酶，在離子轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起重要作用。該酶的主要功能是泵出細(xì)胞內(nèi)Na+，泵入細(xì)胞外K+，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。Na+－K+－ATP酶減少，將導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Na+蓄積和K+丟失，同時(shí)Ca2+濃度升高，從而導(dǎo)致線粒體腫脹，氧化一磷酸化脫偶聯(lián)，進(jìn)而引起腎組織的一系列損傷[6]。本研究結(jié)果表明，納洛酮能防止腎臟缺血－再灌注損傷時(shí)組織中Na+－K+－ATP酶活力的降低。

有研究表明，腎缺血后腎組織中Ca2+－ATP酶活力降低，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高。高度Ca2+可激活細(xì)胞內(nèi)Ca2+依賴性蛋白酶和磷酸脂酶，引起蛋白、磷脂水解，游離脂肪酸釋放，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和骨架破壞。本研究發(fā)現(xiàn)，腎缺血時(shí)Ca2+－ATP酶活力較對照組降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，再灌注時(shí)Ca2+－ATP酶活力明顯降低，應(yīng)用納洛酮后可使此酶活力明顯升高。

綜上所述，納洛酮對大鼠腎臟缺血－再灌注損傷有一定的保護(hù)作用。

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