陳 穎,李 俠,郭 燕,胡有東,周華蘭,楊海晨,李 霞,韓雪花

(徐州醫(yī)學(xué)院附屬淮安醫(yī)院老年病科,江蘇淮安,223002)

新近研究認為,循環(huán)內(nèi)皮細胞微顆粒(EMP62E)、Toll樣受體 2(TLR2)和 Toll樣受體4(TLR4)水平在炎癥反應(yīng)中起著重要作用,所介導(dǎo)的信號通路與冠心病(CHD)、高血壓病、動脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系[1]。但EMP62E、TLR2和 TLR4水平與老年慢性心力衰竭關(guān)系的研究相對較少[2]。該項臨床研究旨在探討EMP62E、TLR2和 TLR4水平變化與老年慢性左心衰及其嚴重程度的關(guān)系,揭示EMP62E、TLR2和T LR4在老年慢性左心衰發(fā)生發(fā)展中的可能機制。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月～2009年1月本院左心衰患者90例,入選患者均未服用非甾體抗炎藥和類固醇激素,均符合老年慢性左心衰臨床診斷標準[3]。經(jīng)病史、臨床體檢和實驗室檢查排除急性心肌梗死、房顫、右心室功能受損、心源性休克、糖尿病、腦卒中、腫瘤、感染、血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、近期手術(shù)、外傷、腎功能不全、肝臟疾病和發(fā)熱等。根據(jù)美國紐約心臟病學(xué)會(NYHA)的心功能分級方案和LVEF將所有入選者分成5組:LVEF 50%～70%為對照組,LVEF 40%～49%為Ⅰ級組,32%～39%為Ⅱ級組 LVEF,LVEF 27%～31%為Ⅲ級組,LVEF 22～26%為Ⅳ級組。心衰組病因及各組LVEF基本資料,見表1。各組間年齡和性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在分析老年慢性左心衰患者 EMP62E、TLR2和 TLR4水平時,按照病因分成高血壓左心衰組、CHD左心衰組和對照組:高血壓左心衰組35例,LVEF(35.20±6.39)%;CHD左心衰組55例,LVEF(32.36±6.88)%。3組之間年齡和性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1 心衰組病因及各組LVEF基本資料( ±s)

表1 心衰組病因及各組LVEF基本資料( ±s)

病因(例)組別 n 男性 年齡(歲)LVEF(%)高血壓 CHD對照組 30 12 67.13±5.70 - - 63.97±4.65Ⅰ級組 24 13 68.79±7.92 12 12 42.67±2.06Ⅱ級組 27 15 68.81±8.97 15 12 34.26±3.17Ⅲ級組 21 11 72.14±6.71 5 16 29.05±1.07Ⅳ級組 18 11 72.39±7.37 3 15 25.17±1.42

1.2 EMP62E、TLR2和 TLR4檢測方法[4]

入選者均清晨空腹采集肘靜脈血6 mL。應(yīng)用美國貝克曼庫爾特公司的EPICS?ALT RA TM Flow Cytometer with Hypersort TM流式細胞儀檢測外周血 EMP62E,以個/μ L表示EMP62E的表達水平。主要試劑為FITC-標記的EMP62E單克隆抗體,PE-IgG1為同型對照;所用抗體均購自AbD serotech公司。檢測外周血單核細胞表面TLR2和TLR4的表達,以平均熒光強度(MFI)表示T LR2和 TLR4的表達水平。主要試劑為FITC-標記的小鼠抗人CD14抗體、PE-標記的小鼠抗人TLR-4抗體以及FITC-標記的小鼠抗人T LR-2抗體,并設(shè)置IgG2a為同型對照。研究所用抗體均購自AbD serotech公司。

1.3 LVEF的檢測[5]

90例老年慢性左心衰患者采用飛利浦HDI5 000多普勒超聲顯像儀測定 LVEF。判斷EMP62E、TLR2和TLR4與左心功能指標變量間相關(guān)性和依存性。

2 結(jié) 果

2.1 EMP62E、TLR2和 TLR4在心衰組表達

左心衰患者各組中EMP62E、TLR2和TLR4表達顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),且隨著左心衰程度的加重,EMP62E、TLR2和TLR4表達水平明顯上升。各組間兩兩比較,相互差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),見表2。

表2 TLR2、TLR4和EMP62E在不同左心功能組間比較( ±s)

表2 TLR2、TLR4和EMP62E在不同左心功能組間比較( ±s)

與對照組比較,＊＊P<0.01;與Ⅰ級組比較,##P<0.01;與Ⅱ級組比較, P<0.01;與Ⅲ級組比較,△△P<0.01。

組別 n TLR2(MFI)T LR4(M FI)EM P62E(個/μ L)對照組 30 2.75±0.83 1.45±0.4 165.83±29.82Ⅰ級組 24 4.24±2.48＊＊ 2.58±1.82＊＊ 291.04±21.95＊＊Ⅱ級組 27 4.16±0.93＊＊ 2.61±0.53＊＊ 493.19±42.36＊＊##Ⅲ級組 21 6.36±0.74＊＊ 5.03±0.74＊ 605.14±49.37＊＊Ⅳ級組 18 7.99±1.10＊＊△△ 6.34±1.46＊＊△△ 1092.72±102.82＊＊△△

2.2 TLR2、TLR4和EMP62E在不同病因心衰組的表達

TLR2、T LR4和EMP62E 在對照組、CHD 左心衰組和高血壓心衰組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或 P<0.01),TLR2、T LR4和EMP62E水平變化趨勢為:冠心病組>高血壓組>對照組。見表3。

表3 TLR2、TLR4和EMP62E在不同病因心衰組間的比較( ±s)

表3 TLR2、TLR4和EMP62E在不同病因心衰組間的比較( ±s)

與對照組比較,＊＊P<0.01;與冠心病組比較,#P<0.05,##P<0.01

組別 n T LR2(MFI)T LR4(M FI)EM P62E(個/μ L)對照組 30 2.75±0.83 1.45±0.42 156.83±29.81冠心病組 55 6.06±2.14＊＊ 4.21±2.13＊＊ 637.51±316.04＊＊高血壓組 35 4.58±1.71＊＊## 3.37±1.75＊＊ 485.40±213.97＊＊#

2.3 TLR2、TLR4和EMP62E與左心衰嚴重程度的相關(guān)性

TLR2、TLR4與LVEF均成負相關(guān)關(guān)系(P<0.05),即隨著左心功能的降低(LVEF值不斷減小),外周血單核細胞表面T LR2、TLR4表達增多。EMP62E與LVEF呈負相關(guān)(P<0.01),即隨著 LVEF值的下降,外周血EMP62E表達增多。

3 討 論

研究證實[6],內(nèi)皮細胞損傷在動脈粥樣硬化形成和粥樣斑塊的穩(wěn)定性中有著重要的作用,而其作用機制為內(nèi)皮細胞損傷后氧化應(yīng)激反應(yīng)增強,促使冠心病、高血壓病、動脈粥樣硬化等心血管疾病發(fā)生發(fā)展。急性冠脈綜合征(ACS)、穩(wěn)定性心絞痛(SAP)和頸動脈硬化患者的循環(huán)單核細胞、內(nèi)皮細胞和粥樣硬化斑塊中T LR2和TLR4的表達明顯升高。因此,TLR2和 TLR4與內(nèi)皮損傷、動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展以及動脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性有關(guān)[7-8]。實驗研究證實,TLR信號通路的激活可通過有害炎癥反應(yīng)促使白細胞聚集、細胞因子異常表達、心肌缺血、再灌注損傷、活化促凋亡信號反應(yīng)通路、心肌梗死后心肌細胞凋亡、心肌梗死面積擴大、心臟幾何構(gòu)型異常和心臟功能障礙[9]。

EMP62E、TLR2和TLR4三種危險因素共同促使老年慢性左心衰發(fā)生發(fā)展的可能機制是[10],氧化應(yīng)激(OS)導(dǎo)致能量代謝障礙引起內(nèi)皮細胞凋亡,促使內(nèi)皮損傷和內(nèi)皮功能失調(diào)。OS激活內(nèi)皮表面附著的中性粒細胞,釋放炎性蛋白S100A12并與內(nèi)皮細胞表面晚期糖基化終末產(chǎn)物受體相互作用,通過絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)和核轉(zhuǎn)錄因子κ B(NF-κ B)信號途徑,誘導(dǎo)促炎信號級聯(lián)反應(yīng)上調(diào)血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)和細胞間黏附分子-1(ICAM-1)表達,導(dǎo)致內(nèi)皮細胞損傷。氧化應(yīng)激狀態(tài)促使內(nèi)皮細胞激活和凋亡,釋放EMP62E,通過一氧化氮(NO)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑降低NO依賴性血管舒張作用,引起嚴重內(nèi)皮功能失調(diào)。TLR2和TLR4的共刺激作用促使 NF-κ B表達,活化 NF-κ B信號通路,導(dǎo)致心肌缺血和心肌細胞收縮功能失調(diào)。TLR2和TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑還可通過共同的下游銜接蛋白,即髓樣分化因子88,導(dǎo)致內(nèi)皮損害更加嚴重,老年慢性左心衰進一步惡化。本研究認為,早期檢測EMP62E、TLR2和TLR4表達水平的變化判斷內(nèi)皮細胞功能,可能有助于老年慢性左心衰診斷、治療和預(yù)后的評估。

[1]王 妍,陶 軍,涂 昌,等.高血壓患者循環(huán)內(nèi)皮細胞微顆粒水平的變化[J].中華老年心腦血管病雜志,2006,8(4):222.

[2]李 俠,郭 燕,胡有東等.循環(huán)內(nèi)皮細胞微顆粒和高敏C反應(yīng)蛋白水平變化與慢性左心衰竭嚴重程度的相關(guān)性研究[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志,2011,30(6):472.

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[6]徐正平,朱健華,鄒瑞秀,等.卡托普利對動脈粥樣硬化大鼠內(nèi)皮素轉(zhuǎn)換酶表達的影響[J].實用臨床醫(yī)藥雜志,2007,11(7):56.

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