宋志釗 劉 元 李文琪

廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022

HPLC 法測(cè)定亮葉楊桐葉中槲皮苷的含量

宋志釗 劉 元 李文琪

廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022

目的：建立亮葉楊桐葉中槲皮苷的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法，以TC－C18色譜柱為分離柱，以乙腈－0.1%磷酸 (20：80)為流動(dòng)相，254nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，柱溫為室溫。結(jié)果：槲皮苷在0.05～1.60μg范圍內(nèi)，峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系 (r=0.9992)，平均回收率為97.4%，RSD為1.00%(n=6)。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為該藥材含量測(cè)定方法。

亮葉楊桐葉;槲皮苷;HPLC

Abstract：Objective：to assay the content of Quercitr in Adinandra Nitida by HPLC．Method：The TC－C18(4．6 mm× 250mm，5μm)column was used，the mobile phase consisted of acetonitrile－0．1%phosphoric acid(20：80)，the detection wave length was 254nm and the column temperature was room temperature．Resuilts：Linearity of Quercitr was good at 0.05～1.60μg(r= 0.9992)．The average recovery of buddleodide was 97.4%with RSD less than 1.00% (n=6)．Conclution：The method is simple，accurate and repeatable，which can be applied in determination of Quercitr in Adinandra Nitida．

Key words：Adinandra Nitida;Quercitr;HPLC

亮葉楊桐葉，別名：石芽茶、亮葉紅淡、亮葉黃瑞木、石崖茶，系山茶科植物亮葉楊桐 Adinandra nitida Merr.ex Li的干燥葉。主要分布于我國(guó)廣東、廣西和貴州等省區(qū)，資源豐富。民間制作、飲用及服用該種綠茶已有悠久歷史，具有較突出的消炎、解毒、止血和降壓等功效［1］，是一種保健和藥用價(jià)值很高的野生植物。亮葉楊桐葉中主要含有黃酮類、茶多酚類和咖啡因三類活性成分，其中總黃酮含量為28.4%，還含有20.9%的茶多酚，咖啡因的含量較低。其總黃酮主要有：芹菜素、山茶苷A、山茶苷B、槲皮苷和長(zhǎng)梗冬青苷［2、3］。因此摸索亮葉楊桐葉中槲皮苷的含量測(cè)定方法，可作為控制本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)之一。現(xiàn)參考《中國(guó)藥典》2005年版一部和相關(guān)文獻(xiàn)［4～6］，測(cè)定亮葉楊桐葉中槲皮苷的含量。

1 儀器與試藥

日本島津LC－10ATVP高效液相色譜儀，SPD－10AVP紫外檢測(cè)儀;威瑪龍色譜工作站;TC－C18柱 (4.6mm× 250mm，5μm);KQ－100VDB雙頻數(shù)控超聲清洗儀。乙腈為色譜純，水為超純水，其余所用試劑均為分析純。槲皮苷對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)111538－200403;亮葉楊桐葉藥材10批，由本院黃云峰同志采集，賴茂祥研究員鑒定，金秀4批，批號(hào)為：090204、090605、090802、091221;馬 山 2批，批 號(hào)：090712、091118;昭平2批，批號(hào)為：090711、091210;上思2批，批號(hào)為：090711、091215。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：TC－C18色譜柱 (4.6mm× 250mm，5mm);檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm;流動(dòng)相：乙腈－0.1%磷酸 (20：80);流速：1.0 mL·min－1;柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按槲皮苷峰計(jì)算不低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取槲皮苷對(duì)照品10.0mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成400μg/ml對(duì)照品溶液，備用。精密吸取上述對(duì)照品溶液0.25mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得 (10.0μg·mL－1)。

2.3 供試品溶液的制備 取本品藥材粉末 (過(guò)80目篩) 0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足缺失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍考察 精密稱取槲皮苷對(duì)照品10.0mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成400μg/ml對(duì)照品溶液，備用。精密吸取12.5ml置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成200μg/ml對(duì)照品溶液，分別精密吸取200μg/ml槲皮苷對(duì)照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣10ul，測(cè)定。以槲皮苷對(duì)照品進(jìn)樣量μg為橫坐標(biāo) (X)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=2.61×106X+ 4.52×103，r=0.9992。結(jié)果表明：槲皮苷進(jìn)樣量在0.05～1.60μg之間與峰面積積分值呈線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 分別吸取同一供試品溶液，進(jìn)樣5次，依次測(cè)定，即得。測(cè)得供試品RSD為0.77%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào) (090204)樣品，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進(jìn)樣，測(cè)定，即得。結(jié)果測(cè)得槲皮苷含量為0.535%，RSD=1.28%(n=6)。表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別于0，4，8，12，16h進(jìn)行測(cè)定，即得。結(jié)果供試品中槲皮苷含量的RSD為1.42%，表明供試品溶液在16h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 取已測(cè)知含量 (0.535%，批號(hào)090204)的供試品0.1g，精密稱定，精密加入槲皮苷對(duì)照品溶液 (400μg·mL－1)1.4mL，按供試液制備項(xiàng)下的方法制備。結(jié)果槲皮苷平均回收率為97.4%，RSD為1.00%(n =6)，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)測(cè)量結(jié)果 (n=6)

2.9 樣品測(cè)定 按供試液的制備及檢測(cè)方法，測(cè)定10批亮葉楊桐葉藥材中槲皮苷含量，結(jié)果見表2。槲皮苷含量(%)在0.314～1.08之間。

表2 10批石崖茶藥材中槲皮苷測(cè)量結(jié)果

3 討論

3.1 對(duì)槲皮苷對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果其在254nm處有最大吸收，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。參照《中國(guó)藥典》2005年版一部里有關(guān)槲皮苷含量測(cè)定方法，以乙腈－0.1%磷酸為流動(dòng)相，考察多個(gè)比例，最后確定乙腈 －0.1%磷酸 (20：80)的比例較為適合。

3.2 采用超聲處理30min、加熱回流1h、索氏提取2h進(jìn)行提取方法考察，超聲提取含量測(cè)定結(jié)果較低，加熱回流與索氏提取結(jié)果相差不大，但加熱回流更簡(jiǎn)便、快捷，故采用加熱回流法。采用甲醇、水、50%甲醇作提取溶劑進(jìn)行考察，用50%甲醇提取所得含量比高，且雜質(zhì)較少，故采用50%甲醇作為提取溶劑。以加熱回流30min、1h、2h，進(jìn)行提取時(shí)間考察，加熱回流30min，測(cè)得結(jié)果較低，加熱回流1h、2h，兩者無(wú)明顯差別，故加熱回流時(shí)間定為1h。

［1］陳美珍，余杰，佘綱哲，等．野生石芽茶營(yíng)養(yǎng)成分與藥用成分的分析［J］．天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1996，8(1)：85．

［2］劉本國(guó)，戰(zhàn)宇已，許克勇，等．液質(zhì)聯(lián)用鑒定亮葉楊桐葉中的類黃酮化合物［J］．食品研究與開發(fā)，2007，28(3)：118－120．

［3］王英，陳四寶，倪潔，等．亮葉楊桐的化學(xué)成分研究［J］．中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，34(5)：407－409．

［4］宋亞麗，李作平．反相高效液相色譜法測(cè)定合歡不同部位中槲皮苷的含量［J］．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17(3)：1139－1140．

［5］俞建平，魯敏，祝明．高效液相色譜法測(cè)定假地楓皮中槲皮苷的含量［J］．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27(4)：461－462．

［6］國(guó)家藥典委員會(huì)編．中華人民共和國(guó)藥典 (2005年版一部)［M］：149－150．

Determination of Quercitr in Adinandra Nitida by HPLC

Zhi－zhao Song，Yuan LIU，Wen－qi LI
(Guangxi Institute of Chinese Medicine＆Pharmaceutical Scince，Nanning，Guangxi 530022)

R284.2

A

1007－8517(2011)05－0027－02

2011.01.01)

廣西科技攻關(guān)項(xiàng)目 (桂科產(chǎn)09321001);廣西衛(wèi)生廳項(xiàng)目 (Z200914);《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) (第二卷)》標(biāo)準(zhǔn)研究項(xiàng)目 (MZY2010044)。

宋志釗，男，助理研究員，Tel：0771－5868275，E－mail：songzhizhao1978@yahoo．com．cn。

劉元，女，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，新藥開發(fā)，Tel：0771－5868275，E－mail：liuyuan0821@vip.163.com。