聶鳳環(huán) 徐秋紅 崔明勛 姜成哲▲

1.延邊大學(xué)草仙藥業(yè)公司，吉林龍井133400；2.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林延吉 133000

納豆提取物的保濕性、抗過敏性和亞硝酸鹽清除率的初步研究*

聶鳳環(huán)1徐秋紅2崔明勛2姜成哲2▲

1.延邊大學(xué)草仙藥業(yè)公司，吉林龍井133400；2.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林延吉 133000

近年來在外用美容藥物和化妝品的透皮吸收研究中，高度生物靶向性和嚴(yán)格選擇的生物導(dǎo)向制劑的研究開發(fā)十分引人注目。以γ-聚谷氨酸作為研究對(duì)象，驗(yàn)證它是否具有保濕、抗過敏以及對(duì)于亞硝酸鹽的清除作用，對(duì)于開發(fā)透皮制劑具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)通過3方面研究納豆提取物的性質(zhì)。在實(shí)驗(yàn)條件下，低濃度的納豆提取物溶液保濕率均較低，具有明顯的抗過敏性和對(duì)NaNO2的清除的作用。

納豆提取物；保濕；抗過敏；亞硝酸鹽清除率

隨著生活水平的提高，人們對(duì)化妝品的需求日益增加，新技術(shù)、新產(chǎn)品也不斷涌現(xiàn)[1]。目前，化妝品對(duì)產(chǎn)品的保濕性、抗過敏性也提出了更高要求。一些科學(xué)家在納豆提取物中發(fā)現(xiàn)了一種稱為“γ-聚谷氨酸”的高度鎖水物質(zhì)[2-3]。

本實(shí)驗(yàn)的目的就是檢驗(yàn)納豆經(jīng)過洗滌、提取后，主要通過保濕性、抗過敏性和NaNO2的清除作用試驗(yàn)，初步確定其性質(zhì)。可將其作為化妝品的原料，生產(chǎn)天然化妝品。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 納豆由延邊大學(xué)草仙藥業(yè)提供，由生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室按常規(guī)方法分離提取[4]。甘油、透明質(zhì)酸酶溶液、0.5 mg/mL透明質(zhì)酸鈉溶液、埃爾利希試劑、乙酰丙酮溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）、0.25 molCaCl2溶液、0.4 mol/L NaOH溶液、無水乙醇、醋酸緩沖液、碳酸鈉溶液；0.5 mol檸檬酸鹽、0.01% NaNO2溶液、蒸餾水、0.4%對(duì)氨基苯硫酸溶液、0.2%鹽酸α奈胺溶液。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 電熱恒溫培養(yǎng)箱（廣州市醫(yī)療設(shè)備廠），電熱恒溫水槽（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），722S可見分光光度計(jì)（天津市普瑞斯儀器有限公司），-4℃冰箱（青島海爾股份有限公司），YP402N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），移液器 (50 μL、200 μL、1000 μL)，燒杯 (150 mL)，試管 (5 mL)，濾紙，量筒（100 mL），玻璃板 (7.5 cm×7.5 cm)，玻璃棒等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 保濕實(shí)驗(yàn) 根據(jù)參考文獻(xiàn)的方法進(jìn)行[4]。將納豆提取物和甘油分別配制成濃度為5%的溶液。取3塊7.5 cm×7.5 cm的玻璃板，分別標(biāo)記為A、B、C。A為樣品，B為蒸餾水，C為甘油。將與玻璃板同樣大小的濾紙平鋪在玻璃板上，并固定，稱取濾紙與玻璃板的重量M，記錄。用移液器吸取濃度為5%的樣品溶液、蒸餾水和5%的甘油一定量，分別滴在A、B、C 3塊固定有濾紙的玻璃板上，并抹勻，稱取此時(shí)的重量并記為M0（涂抹樣品時(shí)要均勻）。將玻璃板放入電熱恒溫培養(yǎng)箱中(溫度為37℃)，一定時(shí)間間隔后后取出玻璃板，稱其重量，分別記為M1、M2、M3、M4、M5（在稱量的過程中要盡量避免樣品暴露于空氣中）。計(jì)算其加樣后與從電熱恒溫培養(yǎng)箱中取出后的質(zhì)量差，以判斷其失水的多少，根據(jù)失水率判斷保濕性。

1.2.2 透明質(zhì)酸酶體外抑制實(shí)驗(yàn) 根據(jù)參考文獻(xiàn)的方法進(jìn)行[5]。透明質(zhì)酸酶抑制實(shí)驗(yàn)-采用Elson-Morgan法[5-7]透明質(zhì)酸酶抑制率（%）=［（A-B）-（C-D）］/（A-B）×100%。式中：A為對(duì)照溶液的OD值；B為對(duì)照空白溶液的OD值；C為試樣溶液的OD值；D為試樣空白的OD值。樣品：濃度為0.005%、0.01%、0.05%的納豆提取物溶液；透明質(zhì)酸酶溶液：0.01 g透明質(zhì)酸酶與4 mL醋酸緩沖溶液混合配制而成；0.5 mg/mL透明質(zhì)酸鈉溶液：取透明質(zhì)酸鈉0.005 g置于燒杯中，加入10 mL醋酸緩沖溶液；埃爾利希試劑：稱取0.8 g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶于15 mL濃鹽酸和15 mL無水乙醇中，可保存2個(gè)月；乙酰丙酮溶液：取乙酰丙酮3.5 mL溶于50 mL 1.0 mol/L的碳酸鈉溶液中（臨用前配制）。透明質(zhì)酸抑制率=[(A-B)-(C-D) /（A-B）]×100%。A為對(duì)照溶液組（用醋酸緩沖溶液代替樣品）；B為對(duì)照空白溶液組（用醋酸緩沖溶液代替樣品及酶液）；C為試樣溶液組；D為試樣空白組（用醋酸緩沖溶液代替酶液）在547 nm，下，測(cè)定4個(gè)試管內(nèi)液體的ABS值。

1.2.3 NaNO2消除率實(shí)驗(yàn) 根據(jù)參考文獻(xiàn)的方法進(jìn)行[6]。將納豆提取物溶于水制成濃度為1%、5%的溶液。取5個(gè)5 mL的試管，并分別標(biāo)記為 A0、A1、A2、B1、B2，A0為對(duì)照，實(shí)驗(yàn)過程中樣品被蒸餾水所取代，A1中樣品為5%的納豆提取物，A2中的0.01% NaNO2溶液用蒸餾水代替，B1中樣品為1%的納豆提取物，B2中的0.01% NaNO2溶液用蒸餾水代替，其他條件相同。測(cè)定A1、A2、B1、B2的OD值。

2 結(jié)果

2.1 保濕實(shí)驗(yàn)

隨著時(shí)間變化，樣品的失水率最低，可見5%的納豆提取物溶液具有一定的保水性。見圖1。

圖1 失水率隨時(shí)間變化曲線

2.2 透明質(zhì)酸酶體外抑制實(shí)驗(yàn)

透明質(zhì)酸抑制率 =[(A-B)-(C-D)/（A-B）]×100%，可將A、B、C、D的OD值代入公式得出，濃度為0.005%的樣品液的抑制率為16.13%，0.01%的納豆提取物的抑制率為27.27%，0.05%的納豆提取物的抑制率為45.45%。

2.3 NaNO2消除率實(shí)驗(yàn)

NaNO2消 除 率 =[(A0-Ax)/A0]×100%，此 處 的 Ax=A1-A2=B1-B2?？梢缘贸?，濃度為5%的樣品液的消除率為53.1%，濃度為1%的樣品液的消除率為31.4%。見表1。

表1 比色法測(cè)得的OD值

3 討論

由以上保濕實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，納豆提取物確實(shí)具有一定保濕效果，但是保濕率較低。目前，已經(jīng)確定在納豆提取物中含有一種具有高度保濕性的物質(zhì)，此物質(zhì)被稱為γ-聚谷氨酸。150 g納豆中分離提純出0.5925 gγ-聚谷氨酸，提取率達(dá)0.39%[2]。由此可知，經(jīng)過簡(jiǎn)單處理得到的納豆提取物中含有微量的γ-聚谷氨酸，它在此次實(shí)驗(yàn)中可能發(fā)揮了作用。甘油為較好的保濕劑，由保濕實(shí)驗(yàn)的圖表可以看出，在實(shí)驗(yàn)條件下，納豆提取物的保濕效果與同濃度的甘油大致相同。

在做透明質(zhì)酸酶體外抑制實(shí)驗(yàn)的過程中，由于透明質(zhì)酸酶體外抑制的抗過敏性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)要求待測(cè)物質(zhì)要溶于水或可以較好地分散在水中[7]，但由于納豆提取物中并不只是單一的一種物質(zhì)，使得出的抑制率結(jié)果受到影響。但是，實(shí)驗(yàn)結(jié)果仍然顯示隨著納豆提取物溶液濃度的升高，透明質(zhì)酸酶的抑制率在逐漸上升。所以實(shí)驗(yàn)結(jié)果測(cè)試出納豆提取物具有較好的抗過敏性。

NaNO2消除率實(shí)驗(yàn)用來檢測(cè)納豆提取物是否能夠消除亞硝酸鹽的毒性。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，在濃度逐漸升高的過程中，NaNO2的消除率提高，在濃度為1%時(shí)就有極顯著的消除率，5%時(shí)更高。

目前，納豆已被確定含有很多對(duì)人類有益的物質(zhì)，γ-聚谷氨酸就是其中一種，現(xiàn)在從納豆中提取的物質(zhì)已被用于各個(gè)方面，如環(huán)保、醫(yī)療、美容等[8-9]。透皮吸收歷來都是護(hù)膚養(yǎng)顏產(chǎn)品的技術(shù)難點(diǎn)，透皮吸收的研究對(duì)美容外用藥物作用機(jī)制的闡明和新藥開發(fā)具有重要意義。在給藥系統(tǒng)中，劑型的影響日益引起關(guān)注，近年來高度生物靶向性和嚴(yán)格選擇的生物導(dǎo)向制劑-脂質(zhì)體的研究開發(fā)十分引人注目[10]。本研究室把γ-聚谷氨酸作為微膠囊進(jìn)行了試驗(yàn)研究，驗(yàn)證它是否具有保濕、抗過敏以及對(duì)于亞硝酸鹽的清除作用，對(duì)于開發(fā)透皮制劑具有重要意義。

由此可以得出結(jié)論：①在實(shí)驗(yàn)條件下，納豆提取物具有與同濃度甘油相近的保濕性。②本次實(shí)驗(yàn)的納豆提取物具有抗過敏性，并且隨樣品液的濃度增加而增加。③低濃度的納豆提取物就能夠有效消除亞硝酸鹽的毒性。

[1]宋永波.化妝品研發(fā)中的新進(jìn)展[J].日用化學(xué)品科學(xué)，2007，30（10）：5-8.

[2]呂瑩，郝紫徽，李虹，等.γ-聚谷氨酸的分離提純[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2005，31（2）：133-134.

[3]Shih I,Van Y.The production of poly-(γ-glutamic acid)from microorganisms and Its various applications[J].Bioresour Technol,2001,79:207-225.

[4]秦允榮，王昌濤，何聰芬，等.單一保濕劑體外保濕功能的評(píng)價(jià)[J].日用化學(xué)化工，2006，36（3）：199-201.

[5]黃麗，韋保耀，騰建文.紫蘇葉抗過敏有效成分的研究[J].食品科技，2005，21（5）：90.

[6]任清，魏征，游思遠(yuǎn)，等.燕麥油的精制及其抗過敏性與抗氧化性功效檢測(cè)[J].食品科技，2008，（3）：137-141

[7]鐘讀波，孟慶雄 .透明質(zhì)酸酶 [J].食品與藥品，2007，9，（4）：74-76.

[8]段智變，江曉，江漢湖，等，納豆粗提物抗高脂血癥及抗氧化作用的研究[J].營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2004，26（4）：296-298.

[9]秦國宏，熊小超，張菊花，等，枯草芽孢桿菌聯(lián)產(chǎn)納豆激酶和γ-聚谷氨[J].過程工程學(xué)報(bào)，2008，1（8）：120-123.

[10]楊桂明、谷鍵梅，宋麗艷，脂質(zhì)體技術(shù)在化妝品制劑中的應(yīng)用[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2009，18（3）：396-398.

Effects of natto extract on moisture, hyaluronidase experient, scavenge nitrite in vitro

NIE Fenghuan1XU Qiuhong2CUI Mingxun2JIANG Chengzhe2
1.Yanbian University Caoxian Pharmaceuticial Company,Longjing133400,China; 2.Agriculture College of Yanbian University,Yanji133000,China

In medicine and cosmetics for external use only beauty was skin absorbed for the high living and strict targeting,γ-polyglutamic acid(γ-PGA) was very attractive.In this study, moisture experiments, hyaluronidase experient, scavenge nitrite by the natto extract. The three experiments were conducted in vitro environment:moisture test were repeated to calculate the difference between the results of weighing,and hyaluronidase inhibition,NaNO2experiment to eliminate rate were dropping gradually through a variety of reagents,mixed,heated、color and scavenging rate was determined by spectrophotometric method.According to the obtaineddata data to determine whether natto extract moisture,anti-allergic and the scavenging of nitrite.In experimental conditions,low levels of moisture natto extract solution were detected,with a clear anti-allergy and the role of the removal of nitrite.

Natto Extract;Moisturizing;Hyaluronidase experiment;Clearence rate of nitrite

R392.8

B

2095-0616（2011）19-23-02

*

延邊大學(xué)科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（延大科合字[2009]第015號(hào)）▲

2011-08-01）