吉維民 江蘇省寶應(yīng)縣人民醫(yī)院 225800

解脲支原體(Uu)感染是泌尿生殖系統(tǒng)感染的常見病原體,大量研究表明,解脲支原體感染與男性不育密切相關(guān)[1],但其機(jī)制迄今尚未明了。近年來男性不育患者有增加趨勢(shì),且耐藥性問題也日趨嚴(yán)重[2]。本文就精漿解脲支原體感染培養(yǎng)陽(yáng)性患者精子凋亡進(jìn)行檢測(cè),旨在探討解脲支原體感染引起男性不育的原因,并作藥敏結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析,以供臨床參考。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象 2008年2月-2010年4月在我院治療、檢查的患者40例,年齡22～45歲,平均年齡28.5歲。其中,不育男性精漿培養(yǎng)Uu陽(yáng)性20例,陰性生育對(duì)照20例。檢查前均以無菌生理鹽水清洗陰莖和睪丸,洗凈后,手淫法留取精液。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 Olympus BH-2型顯微鏡,臺(tái)式離心機(jī),37℃孵箱。藥敏試驗(yàn)采用法國(guó)生物梅里埃IST2支原體培養(yǎng)鑒定及藥敏試劑盒。測(cè)定藥物包括四環(huán)素(T ET)、氧氟沙星(OFX)、紅霉素(ERY)、多西環(huán)素(DOX)、交沙霉素(JOX)、克拉霉素(CLR)、阿奇霉素(AZM)、環(huán)丙沙星(CIP)、普那霉素(PRI)共9種藥物。

1.3 研究方法 (1)解脲支原體培養(yǎng):按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》操作。(2)精子凋亡檢測(cè)采用原位末端標(biāo)記法(T UNEL):自行液化精液離心取沉淀,pH7.40,PBS洗滌2次,校精子密度約為25.4×106/ml,涂片,95%乙醇固定30min,自行干燥,0.3%H2O2孵育30min,0.1%T ritonX-100 4℃2min沖洗晾干,加 TUNEL反應(yīng)混合液,濕盒中37℃60min,PBS轉(zhuǎn)洗,POD轉(zhuǎn)換液37℃30min DAB-H2O2顯色10min,封片觀察。陽(yáng)性精子頭部顯黃色,陰性精子不著色。(3)精子凋亡率計(jì)算:所有樣本均計(jì)數(shù)500個(gè)精子,計(jì)算陽(yáng)性凋亡精子數(shù)占總精子數(shù)的比率,結(jié)果數(shù)據(jù)以(±s)表示,兩組數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)。(4)藥敏試驗(yàn):按試劑盒說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 精子凋亡率結(jié)果 20例Uu陽(yáng)性不育組和20例Uu陰性生育對(duì)照組對(duì)比,精子凋亡率(±s):前者為(0.126±0.025)(即 12.6%±2.5%),后者為(0.004± 0.001)(即0.4%±0.1%),兩者有顯著差異(P＜0.01)。

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 20例Uu陽(yáng)性菌株對(duì)抗菌藥物敏感率情況:T ET95%、OFX20%、CLR85%、CIP15.0%、ERY75%、DOX100%、JOX85%、AZM80%、PRI100%。

3 討論

3.1 解脲支原體感染導(dǎo)致男性不育即因精子細(xì)胞凋亡異常增多。細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞生物體正常的細(xì)胞生理死亡過程,在胚胎發(fā)育和成體生長(zhǎng)過程中,用于清除不需要的細(xì)胞或?qū)ψ陨碛泻Φ募?xì)胞。從本文結(jié)果可以看出解脲支原體陽(yáng)性不育和陰性生育組男性體內(nèi)精子凋亡均可見到,所不同的是不育組精子凋亡率(0.126±0.025)明顯高于生育組(0.004±0.001),(P＜0.01)。感染導(dǎo)致不育男性精子凋亡異常增多可能的病理機(jī)制是:Uu可寄生在生精細(xì)胞和吸附于不育男性精子表面,在精子局部膜上攝取精子中的營(yíng)養(yǎng)物,進(jìn)行代謝蓄積毒性產(chǎn)物,吸附于精子表面的支原體其原膜上的類脂能溶入精子細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)內(nèi),導(dǎo)致精子細(xì)胞與支原體原生質(zhì)融合,這就使支原體胞漿內(nèi)有毒性的蛋白質(zhì)和類脂能溶入精子細(xì)胞而產(chǎn)生損傷。其所產(chǎn)生的 H2O2具有很高的細(xì)胞毒性,H2O2進(jìn)一步通過Fenten氏反應(yīng),產(chǎn)生毒性更強(qiáng)的物質(zhì),研究表明 H2O2能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)大分子包括直接的DNA損傷、蛋白質(zhì)損傷,從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[3]。國(guó)內(nèi)學(xué)者通過感染動(dòng)物模式研究發(fā)現(xiàn)Uu可提高巨噬細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子(TNF)。睪丸生精細(xì)胞也可能為 TNF-α,而 TNF可啟動(dòng)細(xì)胞凋亡。同時(shí),升高后可使活性氧(ROS)增高,ROS水平的增加造成DNA解聚,誘導(dǎo)精子發(fā)生凋亡。

3.2 支原體感染與不育關(guān)系研究進(jìn)展。隨著對(duì)支原體研究的進(jìn)展,筆者了解了肺炎支原體(Mp)、解脲支原體(Uu)、人型支原體(Mh)、生殖支原體(Mg)、發(fā)酵支原體(Mf),他們可單純一種感染,也可混合感染且與人類多種疾病相關(guān)。以Uu最常見,越來越多證據(jù)表明,Uu感染與人類自發(fā)性流產(chǎn)、非菌性尿道炎、新生兒體重不足、不孕不育等關(guān)系密切。且Uu感染易遷延,反復(fù)發(fā)作,久治不愈。因?yàn)橹гw缺乏細(xì)胞壁,因此青霉素類、頭孢類抗生素?zé)o效?？紤]到支原休是一種傳染性疾病,不同性別的培養(yǎng)陽(yáng)性率有顯著差異[4],支原體還能在母嬰間垂直傳播。因此導(dǎo)致不孕不育的機(jī)理比較復(fù)雜,有待進(jìn)一步廣泛探討。

3.3 本組藥敏結(jié)果顯示,Uu的耐藥性有一定的變遷,與其他作者的研究結(jié)果比較一致。相同的抗菌藥物女性比男性的耐藥率顯著升高,這與抗菌藥物的使用不當(dāng)密切相關(guān)。治療支原體感染常用的九種藥物中喹諾酮類和林可類產(chǎn)生的耐藥率較高,其耐藥機(jī)制可能與DNA消旋酶和拓樸異構(gòu)酶基因極易發(fā)生變異有關(guān),而四環(huán)素類及大環(huán)內(nèi)酯類敏感率高,可作為治療Uu感染的首選藥物。

1 呂麗華.解脲支原體感染研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)婦幼保健,2004,19(5):87-88.

2 陳紅霞.1 503例泌尿生殖道支原體感染及藥敏分析〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2008,18(2):290-294.

3 吉維民.解脲支原體感染與精子凋亡〔J〕.陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),2001,16(3):29.

4 王勇,祝曉瑩,袁紅英,等.泌尿生殖道感染及耐藥性研究〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2009,19(6):702-704.