李光榮

（湖南師范大學(xué)附屬湘東醫(yī)院，湖南 醴陵412200）

隨著科技和醫(yī)療水平的發(fā)展，人們越來越關(guān)注藥物安全，按照以往的看法，中藥的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于西藥，而一度鬧得沸沸揚揚的龍膽瀉肝丸事件，使得人們對中藥毒性有了更深的認(rèn)識［1］。本文作者以高效液相色譜法（HPLC）分析關(guān)木通及其配伍中藥中的有毒成分為例簡單闡述中藥有毒成分分析研究的意義。

1 中藥有毒成分分析研究的現(xiàn)狀

近10年來，我國在對中藥復(fù)雜體系中的有毒成分分析研究方面取得了一定進(jìn)展，建立起了相應(yīng)的分析研究方法，使中藥從定性分析為主逐步過渡到以定量分析為主［2］，定量分析方法也從薄層色譜（TLC）為主，逐步增加了高酸液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和毛細(xì)管電泳法（CE）等現(xiàn)代分析技術(shù)，使中藥有毒成分分析水平明顯提高。HPLC和CE等現(xiàn)代分析技術(shù)已成為中藥有毒成分分析的首選方法，促使中藥有毒成分的分析研究水平不斷提高。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

LC－10ATvp高效液相色譜儀，馬兜鈴酸A對照品（中國藥品生物制品檢定所，含量≥98.5%），東北馬兜鈴的干燥藤莖——關(guān)木通，地黃的干燥塊根——生地黃，甘草的根及根莖——甘草，當(dāng)歸的根——當(dāng)歸，大黃的根莖——大黃。所有藥物都來自湖南師范大學(xué)附屬湘東醫(yī)院門診二藥房中藥柜，在實驗中所使用的試劑都是色譜純或分析純。

2.2 色譜條件

使用十八烷基硅烷鍵和硅膠作為填充劑；甲醇—水（30：70）為流動相，流速1.0mL／min，檢驗的波長為280nm，柱溫25℃，進(jìn)樣量10μL。

2.3 溶液的配備

稱取馬兜鈴酸A的對照品，將其制成對照品溶液，馬兜鈴酸對照品溶液的濃度為0.028g／L［3］。將關(guān)木通藥材，烘干粉碎，將準(zhǔn)確稱取的0.6g關(guān)木通藥材放入200mL的燒杯中，之后再放入蒸餾水120mL，煎煮30min后過濾，然后將濾液收集，再把80mL蒸餾水加入殘渣中，再煎煮30min，再過濾，再把濾液收集，收集兩次濾液，將濾液濃縮至干。加入適量的無水乙醇溶解，并將其定量轉(zhuǎn)移至10mL的容量瓶中，加入無水乙醇至刻度，搖晃均勻，在將其放進(jìn)冰箱靜置冷藏，過夜后，抽取適量上清液，用針頭式過濾器過濾，將初濾液棄去，把續(xù)濾液收集，放進(jìn)1mL塑料離心管里，將此作為供試液1。關(guān)木通的其它配伍中藥生地、大黃、當(dāng)歸、生甘草均按以上方法配伍，分別定為供試液2、3、4、5。取0.5mL關(guān)木通樣品溶液，用無水乙醇將其稀釋并定容為5mL，將其定為供試液6。

2.4 實驗方法與結(jié)果

（1）線性關(guān)系考察。分別準(zhǔn)確吸取對照品溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL注入液相色譜儀，按照上述色譜條件檢驗，做出工作曲線，由此可知，馬兜鈴酸A的線性范圍在0.07～0.42g之間，峰面積與進(jìn)樣量之間呈良好的線性關(guān)系，校正曲線為Y＝5.0×106X－33 827，相關(guān)系數(shù)r＝0.999 3。

（2）精密度試驗。準(zhǔn)確的吸取10μL供試液6，反復(fù)試驗5次，得出馬兜鈴酸A的峰面積，RSD為0.31%，結(jié)果表明儀器的精密度非常好，可以穩(wěn)定運行。

（3）穩(wěn)定性試驗。準(zhǔn)確吸取10μL取供試液6，間隔2h測定一次，4次測定以后，到24h再測定一次，得到RSD為1.5%，結(jié)果表明樣品至少在8h內(nèi)測定穩(wěn)定。

（4）加樣回收率實驗。準(zhǔn)確稱取6份關(guān)木通藥材粉末，約0.3g每份，在每份中分別加入7.5mL馬兜鈴酸A對照品貯備液，根據(jù)“2.3”項的提取方法制備供試液，然后準(zhǔn)確移取0.2mL制備液，用無水乙醇稀釋、搖勻定容至1mL，進(jìn)樣10μL，計算加樣回收率為99.12±0.64，同時測定峰面積。

（5）樣品測定。準(zhǔn)確稱取供試液1、2、3、4、5，在以上色譜條件下進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表1。

從表1可以看出，關(guān)木通及其配伍的中藥中都含有有毒成分馬兜鈴酸A，但其在與生地、當(dāng)歸、大黃、生甘草等中藥配伍后，含有有毒成分馬兜鈴酸A的含量會有不同程度的降低，其中的原因有待于我們進(jìn)一步研究。

3 討論

關(guān)木通是一種馬兜鈴科植物東北馬兜鈴的藤莖，在臨床上常用來利尿通淋，但是，近年來在國內(nèi)外接連發(fā)生了很多起服用關(guān)木通中毒的事件，經(jīng)檢測其中主要的毒性成分為馬兜鈴酸A［4］，因此2005年版《中國藥典》已將該品種取消。那么如何才能保證中藥的安全性與有效性已成為中外關(guān)注的熱點問題。中藥是我國最具優(yōu)勢和文化特點的傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)，在過去的10年里，取得了長足的發(fā)展，但中藥除了有很好的療效外，還有很多副作用，甚至?xí)霈F(xiàn)中毒現(xiàn)象。據(jù)統(tǒng)計多達(dá)數(shù)百種不同劑型的中藥其不良反應(yīng)可同時累及肝、腎等多個臟器［5］，少數(shù)甚至可致患者死亡，例如比利時中藥減肥事件、魚腥草注射液事件等中藥中毒事件。根據(jù)資料顯示我國每年約有20萬人死于藥物不良反應(yīng)和藥源性疾病。令人擔(dān)憂的是，由于西藥化學(xué)成分明確、研究深入，其引起的不良反應(yīng)多已為人們所知曉，然而對中藥毒副作用的研究卻相對滯后，像中藥臨床藥理學(xué)、毒理學(xué)以及藥物代謝動力學(xué)研究均起步較晚，因此，人們對大多數(shù)中藥的毒副作用認(rèn)識不足。實際上，中藥的不良反應(yīng)并非少見，據(jù)中國藥學(xué)會對國內(nèi)1 551例藥物不良反應(yīng)病例分析，中藥不良反應(yīng)所占的比例僅次于抗生素類藥物而位居第二［6］，因此對中藥的有毒成分分析研究勢在必行。

［1］李慶，楊素珍.龍膽瀉肝丸致慢性腎衰竭病例報告［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2003，10（6）：383.

［2］郭曉莊.有毒中草藥大辭典［M］.天津：天津科技翻譯出版公司，1992：201.

［3］劉燕，王寶琴.馬兜鈴中馬兜鈴酸A的HPLC測定［J］.中草藥，1990，21（6）：15.

［4］馬紅梅，張伯禮.關(guān)木通腎毒害及其防治［J］.中草藥，2001，32（4）：369.

［5］高學(xué)敏.中藥學(xué)（上冊）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：769.

［6］HUANG WEN.Chinese medicine treating eczema［J］.JATCM，1996（5）.