徐俊杰， 于洪泉， 國(guó) 巍， 趙 偉， 金 宏， 溫 娜， 齊 玲

西蘭花(broccoli)屬十字花科蕓薹屬甘藍(lán)種的一個(gè)變種［1］，在我國(guó)已廣泛種植。研究表明，西蘭花的活性成分有抗癌作用［2］。西蘭花富含蛋白質(zhì)，目前對(duì)其蛋白或多肽的研究鮮有報(bào)道。多肽的毒性低易吸收，活性多肽具有抗癌、抗氧化的作用［3］。因此，進(jìn)行多肽的研究，對(duì)于新型抗腫瘤藥物的研發(fā)有著重要的意義和極好的應(yīng)用前景。

1 材料與方法

1．1 細(xì)胞培養(yǎng) 將含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液置于孵箱中預(yù)熱，自液氮罐中取出大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，置于37℃水浴，離心后將細(xì)胞用培養(yǎng)基混勻放入培養(yǎng)瓶中，放入5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中，飽和濕度下進(jìn)行培養(yǎng)。80% ～90%匯合時(shí)進(jìn)行傳代。

1．2 藥物作用后C6細(xì)胞生長(zhǎng)情況的檢測(cè) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞，胰酶消化后，調(diào)整細(xì)胞濃度為4×104/ml。將細(xì)胞接種于96孔板中，每孔100μl，培養(yǎng)24h后。加入不同濃度西蘭花多肽(終濃度為 0、0．01、0．1、1、10μl/ml，由吉林醫(yī)藥學(xué)院提取)作用72h，每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔。作用結(jié)束后每孔加入MTT 20μl，37℃孵育4h，終止細(xì)胞培養(yǎng)，棄上清液，每孔分別加DMSO150μl，15min后在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上490nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度(A)值，用不加細(xì)胞的空白孔調(diào)零。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P值＜0．05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

西蘭花多肽作用后C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的情況:藥物作用72h后，各藥物濃度組都表現(xiàn)為對(duì)細(xì)胞的抑制作用，與對(duì)照組相比，1和10μl/ml組表現(xiàn)出對(duì)細(xì)胞的顯著抑制作用(P＜0．01)，總之，西蘭花多肽對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系(見(jiàn)表1)。

表1 西蘭花多肽作用后C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)情況(±s)

表1 西蘭花多肽作用后C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)情況(±s)

與對(duì)照組相比*P＜0．01

藥物濃度(μl/ml)00．01 0．1 1 10 A 值 0．75 ±0．02 0．71 ±0．02 0．74 ±0．03 0．58 ±0．08* 0．07 ±0．01*

3 討論

膠質(zhì)瘤是腦腫瘤中最常見(jiàn)的類型，大部分是惡性膠質(zhì)瘤。由于其生長(zhǎng)的部位特殊，因此，對(duì)人生命和健康的威脅最大。在膠質(zhì)瘤研究中，如何用藥提高患者的生存期已成為研究的重點(diǎn)［4，5］。膠質(zhì)瘤標(biāo)準(zhǔn)治療方法是以手術(shù)治療、放療和化療的聯(lián)合應(yīng)用，但都會(huì)引起機(jī)體的損傷。此前研究腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體時(shí)發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡不會(huì)引起正常組織的損傷，但由于存在耐藥，所以需要解決耐藥問(wèn)題。多肽具有多種人體代謝和生理調(diào)節(jié)功能［6～8］，它可以作為藥物或藥物前體，且其食用安全性也極高，因此，對(duì)多肽的研究和應(yīng)用是科學(xué)研究的一個(gè)非常重要的方向。

西蘭花多肽可以抑制膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且呈現(xiàn)顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系，藥物作用細(xì)胞72h后，各濃度藥物組都表現(xiàn)為對(duì)細(xì)胞的抑制作用，與對(duì)照組相比，1和10μl/ml組表現(xiàn)出對(duì)細(xì)胞的顯著性抑制作用(P＜0．01)。這一實(shí)驗(yàn)初步表明，西蘭花多肽對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)起到明顯的抑制作用，腫瘤細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)生抑制可能是多方面的因素，還需要進(jìn)一步研究其機(jī)制，探討其作為抗癌新藥的應(yīng)用價(jià)值。

［1］張學(xué)杰，樊守金，孫稚穎，等．中國(guó)十字花科植物系統(tǒng)分類近期研究進(jìn)展［J］．武漢植物學(xué)研究，2003，21(3):267 －272．

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［3］董萬(wàn)超，張秀蓮，劉春華，等．梅花鹿茸多肽新成分的提取分離及其生物效應(yīng)研究［J］．特產(chǎn)研究，2000，2:7－10．

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