張建義，吳燕嬌，韓繼永，賈 佳

(江蘇奧賽康藥業(yè)股份有限公司，江蘇南京211112)

鹽酸伊立替康(irinotecan hydrochloride，CPT－11)是日本第一制藥和Yakuh Honsha公司于1994年開發(fā)上市的抗腫瘤藥［1］，是一種半合成的可溶性喜樹堿類衍生物，主要用于細胞周期的S期，通過抑制拓撲異構酶Ⅰ，干擾DNA復制和細胞分裂，1998年獲得FDA批準，用于標準化療方案治療后轉移性結腸直腸癌復發(fā)和惡化的治療，與氟尿嘧啶、亞葉酸聯合用于轉移性結腸直腸癌的一線治療，本品單用或與其他藥物聯合用藥也可用于小細胞肺癌、非小細胞肺癌、惡性腦瘤、胃癌、胰腺癌、子宮頸癌等其他腫瘤的治療［2～4］。該藥于2001年3月在中國上市，國內關于本品的有關物質報道相對較少，而鹽酸伊立替康國家藥品標準中的有關物質檢查法未對已知雜質進行規(guī)定，我們根據生產工藝，對本品的已知雜質的檢查方法進行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC－20A高效液相色譜儀，SPD－20A紫外檢測器，日本島津公司;BP211D電子分析天平，德國塞多利斯公司;Seven－Multi型精密pH計，瑞士梅特勒－托多利儀器有限公司。

1.2 試藥 鹽酸伊立替康、雜質A(10－羥基喜樹堿)、雜質B(7－乙基－10－羥基喜樹堿)、雜質C(4－甲基－4－羥基鹽酸伊立替康)、雜質D(鹽酸伊立替康R－異構體)、雜質E (喜樹堿)、雜質F(7－乙基喜樹堿)均為自制。磷酸二氫鉀、磷酸為分析純;乙腈、甲醇為色譜純;蒸餾水自制。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠(島津VP－ODS，4.6 mm×250 mm，5 μm)流動相A:2.72 g磷酸二氫鉀溶于1 L水中，用稀磷酸調pH至4.0;流動相B:乙腈－甲醇(3∶2)。進行梯度洗脫，流動相B的變化時間表為(0～40 min，20%→70%;40～45 min，70%→70%;45～50 min，70%→20%;50～55 min，20%→20%)，流速為1.0 mL·min－1;檢測波長220 nm;進樣體積:10 μL。

2.2 雜質的定位及系統適用性研究 取雜質A、雜質B、雜質C、雜質E、雜質F分別制成每1 mL中約含雜質C 1.0 μg、雜質A、B、E、F各1.5 μg的溶液，精密量取10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見圖1。

2.3 方法專屬性研究 平行取本品5份各20 mg，置20 mL量瓶中，分別進行酸、堿、氧化、加熱及光照破壞試驗，經過適當處理后，再用稀釋液稀釋至刻度，搖勻后，濾過，精密量取上述溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍，鹽酸伊立替康主峰與相鄰雜質峰分離良好，分離度均在1.5以上。

2.4 校正因子的計算 取鹽酸伊立替康和雜質A、B、C、E、F適量，精密稱定，置同一量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋制成每1 mL中約含鹽酸伊立替康、雜質A、B、E、F各1.5 μg、雜質C 1.0 μg的溶液，作為供試品溶液;精密量取10 μL注入液相色譜儀，連續(xù)測定5次，以鹽酸伊立替康為參照，計算校正因子，結果見表1。

表1 鹽酸伊立替康有關物質檢查雜質校正因子研究結果

2.5 雜質回收率實驗 取本品約10 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，平行9份，平均分成3組，分別精密加入限度濃度量的50%、100%、150%的雜質A、B、C、E、F，用稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。分別進樣10 μL，根據上述校正因子研究結果，按加校正因子的主成分自身對照法，計算各雜質的含量，雜質A、雜質 B、雜質 C、雜質 E、雜質 F的平均回收率分別為110.1%(RSD 6.74%)、115.1%(RSD 8.06%)、86.5%(RSD 7.44%)、95.1%(RSD 7.32%)、92.8%(RSD 9.71%)，表明本法的準確度良好。

2.6 進樣精密度試驗 取同一份供試品溶液，連續(xù)進樣6次，每次10 μL，記錄峰面積。主峰峰面積與總雜峰面積相對標準偏差分別為0.11%與0.54%，表明本法進樣精密度良好。

2.7 重復性試驗 取本品適量，平行6份，加稀釋液制成每1 mL中約含鹽酸伊立替康1 mg的供試品溶液，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度作為對照溶液。分別進樣10 μL，記錄峰面積。按加校正因子的自身對照法計算，結果表明:雜質A、雜質B、雜質C、雜質E、雜質F的RSD分別為:6.71%、7.61%、4.42%、4.54%、4.71%。本品雜質含量小于0.5%，參照《中國藥典》2010版(二部)附錄ⅤD高效液相色譜法中規(guī)定，RSD應小于10.0%，結果表明本法重復性良好。

2.8 溶液穩(wěn)定性 取進樣精密度試驗項下的供試品溶液，室溫下自然放置，分別于0、1、2、4、6、8 h進樣10 μL，考察各雜質峰面積的變化情況，主峰峰面積、總雜峰面積、最大單雜峰面積RSD分別為:0.19%、1.38%、0.20%。結果表明，本品測試溶液在8 h內穩(wěn)定性良好。

2.9 樣品有關物質測定 取本品，加稀釋液溶解并稀釋制成每1 mL中約含伊立替康1 mg的溶液，作為供試品溶液;精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。取對照溶液10 μL注入液相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰高約為滿量程的10%;再精密量取供試品溶液與對照品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，各已知雜質峰按加校正因子的主成分自身對照法計算，結果見表2。

表2 鹽酸伊立替康有關物質檢查結果(單位:%)

3 討論

本品為喜樹堿的半合成衍生物，雜質種類較多，采用本方法可以測定鹽酸伊立替康原料中的有關物質。通過對精密度及回收率等方法學研究表明，本法簡便、靈敏、準確。對比國家藥品標準WS1－(X329)－2003Z，本方法對已知雜質的限度及校正因子進行了詳細的考察，而國家藥品標準中未予以考察，說明本方法對鹽酸伊立替康的研究更為細致、深入，所得到的研究結果可信度也更高，所以本方法適用于鹽酸伊立替康有關物質的檢測。目前鹽酸伊立替康國家藥品標準中對有關物質的規(guī)定指標較低，本法為質量標準提高提供參考。本方法亦可用于其體內代謝產物的測定，可以用于其在臨床藥物動力學方面的研究。

［1］ Wiseman L，Markham A.Irinotecan－A review of its pharmacological properties and clinical efficacy in the management of advanced colorectal cancer［J］.J drugs，1996，52 (4):606－623.

［2］ 史愛欣，胡艷玲，胡欣.LC－MS/M S法測定大鼠血漿中依立替康及代謝物SN－38的濃度［J］.藥物分析雜志，2010，30(1):71－76.

［3］ 耿梅，馬韜，徐昊平，等.伊立替康聯合卡培他濱二線治療38例晚期結直腸癌的臨床觀察［J］.現代腫瘤醫(yī)學，2009，17(7):1305－1307.

［4］ 黃建國，陸建偉.周劑量伊立替康二線治療晚期轉移性胃腸癌療效觀察［J］.腫瘤基礎與臨床，2009，22(2): 125－127.