陳曉玲 李照青 宋 敏，3 崔 巍 李栢林

（1中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理教研室，沈陽110001； 2北京大學(xué)人民醫(yī)院內(nèi)分泌科04級八年制研究生，北京100044；3中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，沈陽110001； 4沈陽藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院藥理系生理教研室，沈陽110016； 5中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室 ，沈陽110001）

乳腺癌是女性一種常見的惡性腫瘤，在我國其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是乳腺癌早期和最常見的轉(zhuǎn)移途徑，也是影響乳腺癌患者預(yù)后的主要因素之一。因此，研究乳腺癌中與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白表達(dá)及其與各通路之間的關(guān)系十分重要。

泛素羧基末端水解酶L1（UCH-L1），屬于泛素－蛋白酶體家族，參與泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解途徑［1］。UCH-L1是一種去泛素化酶，作用于泛素化蛋白，通過水解泛素分子與底物蛋白的連接，阻礙底物蛋白的降解［2，3］。早期關(guān)于 UCH-L1的研究集中于它對神經(jīng)組織﹑性別發(fā)育的作用。近年研究表明，UCH-L1的表達(dá)有嚴(yán)格的時間和空間特異性，異常表達(dá)常常與細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤的發(fā)生有關(guān)［4］。UCH-L1在多種腫瘤中高表達(dá)，但其在腫瘤轉(zhuǎn)移中的研究相對較少。然而對UCH-L1功能的了解不是最終目的，真正弄清其下游作用因子，才有可能最終控制腫瘤的轉(zhuǎn)移，這些與調(diào)控有關(guān)的分子都會成為治療腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。

p38MAPK是絲裂原活化蛋白激酶MAPK家族的重要成員之一，多種細(xì)胞外刺激可使p38的絲氨酸和蘇氨酸雙磷酸化，從而使其激活。激活后的p38通過磷酸化轉(zhuǎn)錄因子引起多種相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成、細(xì)胞表面受體表達(dá)和細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)改變，并參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移［5］。我們的前期研究表明，內(nèi)源性p38MAPK的活性與乳腺癌細(xì)胞的侵襲能力相關(guān)［6］。

經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，UCH-L1與p－pP38存在一定關(guān)系。在非小細(xì)胞肺癌中用RNA干擾抑制UCH-L1表達(dá)，能夠抑制非小細(xì)胞肺癌體內(nèi)外的轉(zhuǎn)移，抑制p38的激活，減少 p－p38 的表達(dá)［7］。在乳 腺癌中UCH-L1的表達(dá)是否與腫瘤的分化程度以及侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，UCH-L1與p38之間調(diào)控關(guān)系如何，還仍需進(jìn)一步研究。

材料和方法

1.材 料

組織：收集80例乳腺癌組織蠟塊，取自于中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2002年1月至2008年5月手術(shù)切除標(biāo)本。所有患者術(shù)前未經(jīng)任何治療。依據(jù)WHO2003年所推薦的乳腺癌組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，80例乳腺癌組織均為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌（IDC），按 TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)，I-II期48例，III-IV 期32例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例。收集上述80例乳腺癌組織蠟塊，30例外科手術(shù)切除新鮮乳腺癌組織標(biāo)本及其相應(yīng)癌旁正常乳腺組織，標(biāo)本取出后立即置-70℃冰凍保存。（80例乳腺癌組織蠟塊中的30例分別與文中提及的30例新鮮乳腺癌標(biāo)本屬同一患者）

細(xì)胞系：一種乳腺正常上皮細(xì)胞系 MCF-10A和兩種乳腺癌細(xì)胞系（MCF-7為低侵襲低轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞系、MDA-MB-435s為高侵襲高轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞系）原購自北京協(xié)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞中心，本實驗由已有的細(xì)胞復(fù)蘇而得。

主要試劑：鼠抗人 UCH-L1單克隆抗體（sc-58593）購自SANTA CRUZ公司，鼠抗人p－p38單克隆抗體（＃9216）購自Cell signaling公司。UCH-L1抑制劑（＃662086）購自Merck公司。Transwell小室（孔徑8um）購自Corning公司。

2.方 法

免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測乳腺癌石蠟標(biāo)本中UCH-L1與p－p38蛋白的表達(dá)情況：80例標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，采用鏈霉素抗生物素蛋白－過氧化物酶法（Streptavidin-peroxidase，S-P）按說明書行免疫組化染色。UCH-L1稀釋比例為1∶150，p－p38稀釋比例為1∶200，以PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性乳腺癌切片作陽性對照。

Western blot技術(shù)檢測乳腺癌組織以及細(xì)胞系中UCH-L1與p－p38蛋白的表達(dá)情況：于4℃下取組織（細(xì)胞）標(biāo)本1-2g，加約5倍濕重的裂解緩沖液，粉碎勻漿后，4℃靜置，低溫高速離心，提取上清即為總蛋白。經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)印，5%正常小牛血清封閉，UCH-L1（1∶400）、p－p38（1∶400）和抗β-actin（1∶500）于4℃下孵育，過夜；于二抗中室溫下孵育2h。ECL顯色，X線膠片曝光成像，經(jīng)自動電泳凝膠成像分析儀采集圖像，每組結(jié)果均為相同條件下重復(fù)三次。

Transwell實驗檢測UCH-L1特異性抑制劑作用于MDA-MB-435s后，細(xì)胞侵襲潛能的變化：選取MDA-MB-435s細(xì)胞系，采用孔徑為8μm 的24孔的Borden小室，上室加入1∶6Matrigel膠制成的人工基底膜，加入1×105個 MDA-MB-435s細(xì)胞，總體 積 200μl，并 加 入 終 濃 度 分 別 為 0、5、10、20μmol／L UCH-L1抑制劑。下室加入300μl含血清的培養(yǎng)液，每個藥物濃度做3復(fù)孔，37℃培養(yǎng)24h后觀察。用棉簽擦掉基底膜上室面的細(xì)胞，下室用Giemsa染色。400×光鏡下隨機(jī)選擇30個視野進(jìn)行，取其平均數(shù)為穿膜細(xì)胞數(shù)。

3.統(tǒng) 計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件行數(shù)據(jù)處理：采用χ2檢驗（不滿條件時用Fisher確切概率法）分析計數(shù)資料，采用t檢驗分析Western Blot圖像灰度值、transwell穿膜細(xì)胞數(shù)，用LSD-t檢驗對各樣本均數(shù)行兩兩比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1.UCH-L1、p－p38在乳腺癌組織中的表達(dá)及其同臨床病理參數(shù)的關(guān)系

本研究中，UCH-L1在80例IDC組織中陽性表達(dá)42例（52.5%），定位于細(xì)胞漿。p－p38在80例IDC組織中陽性表達(dá)46例（57.5%），主要定位于細(xì)胞核，少量定位于細(xì)胞漿（圖1）。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，UCH-L1蛋白表達(dá)和p－p38蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r＝0.397，P＝0.000）（表1）。兩蛋白的表達(dá)水平與IDC的TNM 分期（P＝0.017，P＝0.010）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（P＝0.033，P＝0.021）相關(guān)，兩者與患者年齡（P＝0.296，P＝0.585），腫瘤大?。≒＝0.300，P＝0.161）無明顯相關(guān)性（表2）。

圖1 UCH-L1、p－p38在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)1A：UCH-L1胞漿 （＋）S-P×200；1B：UCH-L1胞漿 （＋）S-P×400；1C：p－p38胞核 （＋）S-P×200；1D：p－p38胞核（＋）S-P×400Fig.1The expression of UCH-L1protein and p－p38protein in breast infitrating ductal carcinoma issue1A：UCH-L1cytoplasm（＋）S－P×200；1B：UCH-L1cytoplasm （＋）S-P×400；1C：p－p38cell nucleus（＋）S-P×200；1D：p－p38cell nucleus（＋）S-P×400

表1 UCH-L1蛋白陽性表達(dá)與p－p38陽性表達(dá)的關(guān)系Table 1 The correlation between the expression of the UCH-L1protein and the p－p38protein

表2 UCH-L1、p－p38蛋白在石蠟標(biāo)本中的表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系Table 2 The expression of UCH-L1protein and p－p38protein in paraffin-embedded specimens of breast cancer and their correlation with clinicopathological characteristics

新鮮乳腺組織 Western blot結(jié)果顯示：參照DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)，在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌可見在25KD﹑43KD附近有特異性條帶，對應(yīng)位置分別為UCH-L1﹑p－p38，而在癌旁正常乳腺組織中各條帶均有不同程度的減弱（圖2）。統(tǒng)計分析顯示：UCH-L1﹑p－p38在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)高于癌旁正常乳腺組織（P＝0.012，P＝0.001），UCH-L1在III-IV期乳腺浸潤性癌患者中高于I-II期患者（P＝0.014，P＝0.002）；在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P＝0.016，P＝0.001）；但 UCH-L1和p－p38表達(dá)與患者的年齡、腫瘤大小無明顯相關(guān)性（P＝0.753，P＝0.539；P＝0.723，P＝0.765）（表3）。

圖2 UCH-L1和p－p38蛋白在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌和癌旁正常乳腺組織中的表達(dá)A1-A3代表癌旁正常乳腺組織，C1-C3代表乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織，以β-actin為內(nèi)參。Fig.2The expression of UCH-L1protein and p－p38 protein in breast infitrating ductal carcinoma issue and the normal breast tissue beside tumor

表3 UCH-L1和p－p38蛋白在乳腺新鮮組織中的表達(dá)及與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系Table 3 The expression of UCH-L1protein and p－p38protein in fresh tissue of breast cancer and their correlation with clinicopathological characteristics

2.UCH-L1、p－p38在乳腺細(xì)胞系中的表達(dá)

我們通過Western blot觀察了乳腺正常上皮細(xì)胞系MCF-10A、乳腺癌低侵襲低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系MCF-7和高侵襲高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞系 MDA-MB-435s中UCH-L1和 p－p38 的 表 達(dá)。 可 見 在 MCF-10A、MCF-7和 MDA-MB-435s中，UCH-L1和p－p38的表達(dá)逐漸升高。（圖3）

3.UCH-L1的抑制劑作用于 MDA-MB-435s細(xì)胞系24小時后觀察各指標(biāo)改變

Western blot顯示UCH-L1的抑制劑可以濃度依賴性地下調(diào) MDA-MB-435s中 UCH-L1蛋白表達(dá)水平，而p－p38蛋白表達(dá)水平也隨之減少（圖4）。

Transwell實驗檢測細(xì)胞對人工重組基底膜的侵襲能力：400倍光鏡下任意選取30個視野，進(jìn)行計數(shù)，比較不同濃度的UCH-L1的抑制劑0、5、10、20μmol／L分別作用24h后的 MDA-MB-435s穿過人工基底膜的細(xì)胞數(shù)（個／視野），分別是：148.35±20.69、80.81±5.32、25.17±8.07、13.88±4.29，可見穿膜細(xì)胞數(shù)逐漸減少，行兩兩間比較P值均＜0.05（圖5，表4）。UCH-L1的抑制劑能濃度依賴性地抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移潛能。

圖3 UCH-L1和p－p38在 MCF-10A，MCF-7，MDA-MB-435s中的表達(dá)圖4 UCH-L1抑制劑作用 MDA-MB-435s細(xì)胞系24小時后UCH-L1和p－p38的表達(dá)以β-actin為內(nèi)參圖5 UCH-L1抑制劑作用24h后，MDA-MB-435s細(xì)胞侵襲潛能的改變Fig.3The expression of UCH-L1protein and p－p38protein in cell lines of MCF-10A，MCF-7and MDA-MB-435s（β-actin as the internal reference）Fig.4The expression of UCH-L1protein and p－p38protein in MDA-MB-435scells treated with the specific inhibitor of UCH-L1after 24hour（β-actin as the internal reference）Fig.5The change of invasive potential of MDA-MB-435scells treated with the specific inhibitor of UCH-L1after 24hour5A：0μmol／L 5B：5μmol／L 5C：10μmol／L 5D ：20μmol／L（×400）

表4 穿過基底膜細(xì)胞數(shù)Table 4 The number of cells through the basement membrane

討 論

腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的最重要標(biāo)志，也是腫瘤所致患者死亡的最主要原因。它是由連續(xù)相關(guān)的多步驟組成的過程，腫瘤細(xì)胞通過不同途徑，轉(zhuǎn)移到不連續(xù)的遠(yuǎn)隔組織和器官，形成新的繼發(fā)腫瘤灶。在這個過程中，不僅涉及抑癌基因失活和突變，還通過多種癌基因的異常表達(dá)，誘發(fā)和增強(qiáng)該腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能。

雖然UCH-L1為神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的一個特定的組織標(biāo)記，而在另一些腫瘤研究中發(fā)現(xiàn)UCH-L1的高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞密切相關(guān)，其可作為某些腫瘤的標(biāo)記物。例如：甲狀腺髓樣癌經(jīng)常誤診為甲狀腺未分化癌，如果用UCH-L1作為檢測甲狀腺髓樣癌的標(biāo)記，大大增加對甲狀腺髓樣癌的確診［8］。Otsuki T［9］等發(fā)現(xiàn)，UCH-L1在骨髓瘤里表達(dá)。在食道癌中UCH-L1也可以作為腫瘤的標(biāo)記物［4］。在胰腺癌中也發(fā)現(xiàn)UCH-L1的過度表達(dá)和術(shù)后生存率顯著性負(fù)相關(guān)。在研究中發(fā)現(xiàn)胃癌的分化程度與UCH-L1的表達(dá)密切相關(guān)，表明它可能參入腫瘤細(xì)胞基因的改變，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長周期［10］。

UCH-L1不僅與預(yù)后不良及細(xì)胞周期有關(guān)，還與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。Hibi［11］等通過對非小細(xì)胞肺癌的研究，發(fā)現(xiàn)UCH-L1表達(dá)不僅與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后有關(guān)，而且與其轉(zhuǎn)移以及較強(qiáng)的侵襲潛力有關(guān)。認(rèn)為UCH-L1的表達(dá)是不依賴神經(jīng)內(nèi)分泌而獨(dú)立存在的和肺癌病理分期及預(yù)后相關(guān)的重要生物學(xué)指標(biāo)，可能與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。另有研究發(fā)現(xiàn)，隨著胃癌侵襲程度的加深、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移以及分化程度的增加，UCH-L1的陽性率逐漸上升，推測UCH-L1可能參與了胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移過程并在其中發(fā)揮重要作用，可以作為分析腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移以及分化程度的一個重要指標(biāo)。UCH-L1陽性的膽囊腺癌進(jìn)展快、生長速率高，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及侵犯周圍組織器官，UCH-L1是評估膽囊腺癌進(jìn)展、生物學(xué)行為和預(yù)后的重要生物學(xué)標(biāo)志物［12］。

實驗顯示UCH-L1在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中表達(dá)高于癌旁正常乳腺組織，III期、IV期乳腺癌組織中的表達(dá)高于I期、II期乳腺癌，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。結(jié)果表明其表達(dá)水平與浸潤性導(dǎo)管癌的組織學(xué)分級，TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)。我們進(jìn)一步分析了UCH-L1在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在乳腺正常上皮細(xì)胞MCF-10A、低侵襲低轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞系MCF-7和高侵襲高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞系 MDA-MB-435s中，UCH-L1的表達(dá)逐漸升高。該結(jié)果進(jìn)一步說明了UCH-L1可能與乳腺癌的侵襲相關(guān)。

我們推測在乳腺癌中，UCH-L1可能直接或間接阻礙了某些促癌基因的降解，激活某些信號通路，從而在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用。p38受炎癥因子和應(yīng)激反應(yīng)等多種細(xì)胞外刺激可使其絲氨酸和蘇氨酸雙磷酸化，從而被激活。p38激活后可使多種轉(zhuǎn)錄因子活化，影響細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄［13］、蛋白合成、細(xì)胞表面受體表達(dá)和細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)改變。并且，p38信號通路參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，如介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞粘附和運(yùn)動［14，15］、細(xì)胞外基質(zhì)降解［5，16］、腫瘤血管生成［17，18］、以及腫瘤細(xì)胞生長和增殖［19］。前期研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織和細(xì)胞系中p－p38高表達(dá)，其和乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)［6］。

國外學(xué)者發(fā)現(xiàn)，UCH-L1與p38存在一定關(guān)系。非小細(xì)胞肺癌中用RNA干擾抑制UCH-L1的表達(dá)，能夠抑制非小細(xì)胞肺癌的轉(zhuǎn)移，并能夠抑制p38的激活［7］。

我們進(jìn)一步選取高侵襲高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞系，應(yīng)用UCH-L1抑制劑抑制UCH-L1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞侵襲力下降，p－p38的表達(dá)也隨之下降。推測UCH-L1可能抑制了某些促癌因素的降解，直接或間接激活了p38，促進(jìn)乳腺癌的轉(zhuǎn)移。

UCH-L1在腫瘤細(xì)胞的異常增殖、惡性轉(zhuǎn)化及腫瘤細(xì)胞穿透基底膜侵襲周圍組織和發(fā)生轉(zhuǎn)移的過程中的作用機(jī)制尚不清楚，聯(lián)合相關(guān)因子如癌基因、抑癌基因，探討其對致癌基因、抑癌基因的影響可能會為闡明乳腺癌的轉(zhuǎn)移途徑提供新的思路。

［1］Osawa Y，Wang YL ，Osaka H ，et al.Cloning，expression，and mapping of a mouse gene，Uchl4，highly homologous to human and mouse Uchl3.Biochem Biophys Res Commun，2001，283（3）：627-633

［2］Nandi D ，Tahiliani P，Kumar A ，et al.The ubiquitinproteasome system.J Biosci，2006，31（1）：137-155

［3］Osaka H，Wang YL，Takada K，et al.Ubiquitin carboxyterminal hydrolase L1binds to and stabilizes monoubiquitin in neuron.Hum Mol Genet，2003，12（16）：1945-1958

［4］Mandelker D L ，Yamashita K ，Tokumaru Y ，et al.PGP9.5promoter methylation is an independent prognostic factor for esophageal squamous cell carcinoma.Cancer Res，2005，65（11）：4963-4968

［5］Ke Z，Lin H ，F(xiàn)an Z，et al.MMP-2mediates ethanolinduced invasion of mammary epithelial cells over-expressing ErbB2.Int J Cancer，2006，119（1）：8-16

［6］LI Bai-Lin，HAN Shuo，LI Feng，et al.Study on the expression of p38protein in human breast carcinoma tissue.Chinese Journal of Gerontology，2006，26：346-349

［7］HJ Kim ，YM Kim ，S Lim ，et al.Ubiquitin C-terminal hydrolase-L1is a key regulator of tumor cell invasion and metastasis.Oncogene，2008，28（1）：117-127

［8］Takano T ，Miyauchi A ，Matsuzuka F ，et al.PGP9.5 mRNA could contribute to the molecular-based diagnosis of medullary thyroid carcinoma.Eur J Cancer，2004，40（4）：614-618

［9］Otsuki T，Yata K，Takata-Tomokuni A ，et al.Expression of protein gene product 9.5（PGP9.5）／ubiquitin C-terminal hydrolase 1（UCHL-1）in human myeloma cells.Br J Haematol，2004，127（3）：292-298

［10］Yamashita K ，Park HL ，Kim MS ，et al.PGP9.5 methylation in diffuse-type gastric cancer.Cancer Res，2006，66（7）：3921-3927

［11］Hibi K ，Westra WH ，Borges M ，et al.PGP9.5as a candidate tumor marker for non-small-cell lung cancer.Am J Pathol，1999，155（3）：711-715

［12］Lee YM ，Lee JY ，Kim MJ，et al.Hypomethylation of the protein gene product 9.5promoter region in gallbladder cancer and its relationship with clinicopathological features.Cancer Sci，2006，97（11）：1205-1210

［13］Tanos T ，Marinissen MJ，Leskow FC ，et al.Phosphorylation of c-Fos by members of the p38MAPK family.Role in the AP-1response to UV light.J Biol Chem，2005，280（19）：18842-18852

［14］Kim MS ，Lee EJ，Kim HR ，et al.p38kinase is a key signaling molecule for H-ras-induced cell motility and invasive phenotype in human breast epithelial cell.Cancer Res，2003，63（17）：5454-5461

［15］Sossey AK ，Ranalli TA ，Li X ，et al.WAVE3promotes cell motility and invasion through the regulation of MMP-1，MMP-3，and MMP-9expression.Exp Cell Res，2005，308（1）：135-145

［16］Huang X ，Chen S ，Xu L ，et al.Genistein inhibits p38map kinase activation，matrix metalloproteinase type 2，and cell invasion in human prostate epithelial cells.Cancer Res，2005，65（8）：3470-3478

［17］Su JL ，Yang PC ，Shin JY ，et al.The VEGF-C／Flt-4axis promotes invasion and metastasis of cancer cells.Cancer Cell，2006，9（3）：209-223

［18］Zhou HY ，Pon YL ，Wong AS ，et al.Synergistic effects of epidermal growth factor and hepatocyte growth factor on human ovarian cancer cell invasion and migration：role of extracellular signal-regulated kinase 1／2and p38mitogen-activated protein kinase.Endocrinology，2007，148（11）：5195-5208

［19］Ricote M ，Garcia TI，Bethencourt F ，et al.The p38 transduction pathway in prostatic neoplasia.J Pathol，2006，208（3）：401-407