李桂青，趙景潤

1．聊城市東昌府人民醫(yī)院消化內(nèi)科，山東聊城252000;2．聊城市人民醫(yī)院消化內(nèi)科

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生是一個多因素、多步驟、多階段和多基因共同作用的結(jié)果，涉及到多種基因的異常改變。熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)是細(xì)胞受到各種刺激后產(chǎn)生的一類高度保守的蛋白質(zhì)，主要是通過在應(yīng)激狀態(tài)下生成保護(hù)細(xì)胞生命活動所必需的蛋白質(zhì)以維持細(xì)胞生存，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等重要的生物學(xué)功能［1］。近年來已有越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，在許多腫瘤細(xì)胞中存在HSP高表達(dá)現(xiàn)象。有關(guān)HSP27和HSP60在胃癌中的表達(dá)文獻(xiàn)中罕見報道，本研究采用免疫組化方法檢測HSP27/60在胃癌中的表達(dá)，分析它們與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系，以探討將HSP27/60在臨床治療和判斷預(yù)后中的應(yīng)用前景。

1 資料與方法

1．1 標(biāo)本來源 組織標(biāo)本均來自聊城市人民醫(yī)院2009年1月1日～2010年2月1日手術(shù)切除的胃癌病理存檔蠟塊48例，男37例，女11例，年齡30～75歲，中位年齡59歲。術(shù)前未經(jīng)任何抗腫瘤治療，按胃癌組織學(xué)分類法分類。正常胃黏膜組織14例作為對照組，取自胃癌手術(shù)切除標(biāo)本的邊緣正常組織。

1．2 主要試劑 鼠抗人HSP27/60、Ki-67、SP免疫組化試劑盒和DAB顯色劑均購自武漢博士德生物技術(shù)公司。

1．3 免疫組織化學(xué)檢測 常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度4 μm。免疫組化染色程序嚴(yán)格按照試劑盒規(guī)程操作。陰性對照以PBS代替一抗;陽性對照為公司提供已知陽性切片。結(jié)果判定方法:HSP27細(xì)胞質(zhì)著色為陽性，HSP60細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色為陽性細(xì)胞。HSP60陽性結(jié)果判斷，細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色為陽性細(xì)胞，計數(shù)20個高倍視野的陽性細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞百分率分為陰性(－):陽性細(xì)胞＜5%;弱陽性(+):陽性細(xì)胞數(shù)6%～30%;中等強(qiáng)度陽性(++):陽性細(xì)胞數(shù)31%～60%;強(qiáng)陽性(+++):陽性細(xì)胞數(shù)＞60%。以中等強(qiáng)度陽性和強(qiáng)陽性為過表達(dá)病例［2］。增殖指數(shù)(porlierrationindex，PI)以Ki-67標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞胞核呈棕黃色為陽性。高倍鏡下(400×)每張切片隨機(jī)選擇5個視野，每個視野計數(shù)200個腫瘤細(xì)胞，共1 000個。計算陽性腫瘤細(xì)胞所占的百分比即為增殖指數(shù)。以均數(shù)為界值分為低表達(dá)組及高表達(dá)組。

1．4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17．0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。各臨床病理參數(shù)與HSP27/60表達(dá)關(guān)系運(yùn)用卡方檢驗，HSP27/60之間相關(guān)性運(yùn)用Spear秩相關(guān)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

HSP27/60表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系:胃癌組織中 HSP27和 HSP60蛋白陽性表達(dá)率分別為64．6%和81．3%。HSP27在胃癌中表達(dá)明顯高于正常胃黏膜組織，在胃癌中表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)及浸潤深度有關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)多者高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較少者，與浸潤深度呈正相關(guān)。HSP60表達(dá)與腫瘤分化程度及增殖指數(shù)有關(guān)，低分化者HSP60表達(dá)高于高中分化者，HSP60與Ki-67增殖指數(shù)呈正相關(guān)(見表1)。HSP27和HSP60在胃癌中表達(dá)存在相關(guān)性，經(jīng)檢驗，spearman相關(guān)系數(shù)r=0．314，P=0．032。經(jīng)卡方檢驗，HSP27的表達(dá)與胃癌的浸潤深度T、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N和臨床分期相關(guān)，HSP60的表達(dá)與胃癌的分化程度和Ki-67的表達(dá)相關(guān)。

表1 HSP27/60在胃癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系Tab 1 Expression of HSP27/60 and relationship w ith clinical pathological features in gastric cancer

3 討論

研究表明胃癌的預(yù)后受到癌組織浸潤和轉(zhuǎn)移的程度等多因素影響，是多基因及其蛋白表達(dá)產(chǎn)物協(xié)調(diào)作用的結(jié)果。熱休克蛋白已被報道在多種腫瘤中過表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞生長和分化、抵抗腫瘤細(xì)胞凋亡和不良預(yù)后有關(guān)。

本研究進(jìn)一步證實熱休克蛋白在進(jìn)展期胃癌中表達(dá)的臨床意義，研究發(fā)現(xiàn)HSP27和HSP60在胃癌中表達(dá)明顯高于正常胃黏膜組織，提示HSP27和HSP60可能參與胃癌的發(fā)生和發(fā)展，與文獻(xiàn)報道一致［3-4］。有關(guān)HSP27和HSP60在胃癌中過表達(dá)，可能是由于腫瘤進(jìn)展中的應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞的自我保護(hù)，但具體機(jī)制目前仍不清楚［5］。

有關(guān)HSP27在腫瘤中的表達(dá)及作用因組織而異，而且在同一組織報道尚不一致，在胃癌中報道各家不一。本研究顯示HSP27表達(dá)與腫瘤有無器官轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)及TNM分期有關(guān)，在有器官轉(zhuǎn)移者高于無器官轉(zhuǎn)移者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)多者高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較少者，與腫瘤分期相關(guān)，提示HSP27高表達(dá)者預(yù)后差，與文獻(xiàn)報道［2］一致，但HSP27陽性表達(dá)率較文獻(xiàn)報道偏低。Kapranos等［4］發(fā)現(xiàn)HSP27在胃癌組織及其周圍正常胃黏膜腸化和不典型增生組織中均有表達(dá)，在胃癌組織中表達(dá)陽性率最高。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和女性中表達(dá)高，單變量分析在胃癌中過表達(dá)與腫瘤臨床不良預(yù)后參數(shù)有關(guān)，多變量分析這種關(guān)系不存在。

HSP60表達(dá)與胃癌分化程度有關(guān)，分化差者高于高分化者，具體機(jī)制不清楚，臨床意義有待進(jìn)一步研究。另外，Cappello等［6］研究發(fā)現(xiàn)HSP60在進(jìn)展期大腸癌中表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Giaginis等研究發(fā)現(xiàn)HSP60在胃癌中表達(dá)與病人性別有關(guān)。Ki-67增殖指數(shù)(PI)是一種反映癌細(xì)胞增殖狀態(tài)的良好指標(biāo)，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)［7］。HSP60與Ki-67增殖指數(shù)呈正相關(guān)，提示HSP60促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，可能在促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。HSP60作為分子伴侶能促進(jìn)細(xì)胞生存，尤其在腫瘤細(xì)胞中，但這種機(jī)制仍不清楚，可能與半胱天冬酶依賴的凋亡途徑有關(guān)［8］。HSP60抑制劑通過對腫瘤細(xì)胞的促凋亡作用，可能會成為一種新的抗癌劑。

HSP27和HSP60在胃癌中表達(dá)有相關(guān)性，可能在胃癌進(jìn)展中起協(xié)同作用，不同類型的熱休克蛋白在腫瘤中的作用機(jī)制及在同一腫瘤中表達(dá)的相互作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

下一步需要進(jìn)一步在基因水平上研究HSP27/60在腫瘤中表達(dá)的具體機(jī)制，為揭示胃癌發(fā)生、發(fā)展的病理機(jī)制，指導(dǎo)治療提供有力的證據(jù)，有望通過測定腫瘤組織中的某些HSP或血清中的特異性抗體對腫瘤進(jìn)行診斷、病情評估、治療方案的選擇和判斷預(yù)后。

［1］Didelot C，Lanneau D，Brunet M，et al．Interaction of heat-shock protein 90 beta isoform(HSP90 beta)with cellular inhibitor of apoptosis 1 (c-IAP1)is required for cell differentiation［J］．Cell Death Differ，2008，15(5):859-866．

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［3］Giaginis C，Daskalopulou SS，Vgenopoulou S，et al．Heat Shock Protein-27，-60 and-90 expressinon in gastric cancer:association with clinicopathological variables and patient survival［J］．BMC Gastroenterol，2009，9:14．

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［7］Gentile V，Vicini P，Giacomelli L，et al．Detection of human papillomavirus DNA，p53 and ki67 expression in penile carcinomas［J］．Int J Immunopathol Pharmacol，2006，19(1):209-215．

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