禤達(dá)科，張漢偉，張剛利，趙利軍

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024； 2.山西省人民醫(yī)院，山西太原030012）

癲癇是由不同病因所引起的腦部神經(jīng)元高度同步化異常放電，臨床以反復(fù)發(fā)作性、短暫性、通常是刻板性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征的綜合征。癲癇是目前神經(jīng)科內(nèi)僅次于腦血管病和癡呆的第三大常見(jiàn)疾?。?］。我國(guó)有超過(guò)900萬(wàn)癲癇患者，其中約80%可通過(guò)常規(guī)的一線(xiàn)抗癲癇藥物治療獲得滿(mǎn)意療效，但仍有20%患者因耐藥或西藥的嚴(yán)重副作用而未能有效控制，且抗癲癇藥均有不同程度的不良反應(yīng)。臨床發(fā)現(xiàn)，穴位埋線(xiàn)治療癲癇療效肯定，但其抗癲癇機(jī)理尚不明確。我們通過(guò)對(duì)大鼠穴位埋線(xiàn)預(yù)處理后，以青霉素腹腔注射建立急性癲癇發(fā)作模型，探討穴位埋線(xiàn)法對(duì)癲癇大鼠癇性發(fā)作行為以及體重的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng)物與分組 健康SD雄性大鼠40只，體重（300±20）g，購(gòu)自北京軍科院，隨機(jī)分為穴位組、西藥組、針刺組和模型組4組，每組10只。在室溫、自然光環(huán)境下給予充足的食物及水。各組大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每日早晨稱(chēng)重并記錄。

1.1.2 藥物與配制 丙戊酸鈉緩釋片（0.2 g/片，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)：101013），取200 mg丙戊酸鈉，研細(xì)末，加蒸餾水至10 mL，配制成20 mg/mL的丙戊酸鈉溶液用于西藥組灌胃；注射用青霉素鈉（160萬(wàn)U/瓶，華北制藥股份有限公司，批號(hào)：X1105401），取青霉素160萬(wàn)U，加滅菌注射用水2 mL配成57萬(wàn)U/mL的青霉素溶液腹腔注射造模；滅菌注射用水（500 mL，石家莊四藥有限公司，批號(hào)091026104）；10%水合氯醛：10 g水合氯醛加蒸餾水到100 mL。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)器材 JA2003精密電子天平、SF-400電子秤、針刺針（華佗牌，25 mm×13 mm，蘇州醫(yī)療用品有限公司）、一次性穴位埋線(xiàn)針（祾康牌，7#，揚(yáng)州市華宏醫(yī)療器械有限公司）、可吸收膠原蛋白線(xiàn)［博達(dá)牌，3#，（20×2）cm/包，山東博達(dá)醫(yī)療用品有限公司］。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 癲癇大鼠模型的造模方法［2］青霉素鈉溶液的配制方法：取青霉素鈉160萬(wàn)U，加滅菌注射用水2 mL配成57萬(wàn)U/mL；根據(jù)參考文獻(xiàn)介紹并經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)后，確定青霉素鈉按456萬(wàn)U/kg體重的劑量腹腔注射；按Racine標(biāo)準(zhǔn)判定癲癇發(fā)作的程度，達(dá)到Ⅳ～Ⅴ級(jí)及腦電圖出現(xiàn)棘波和棘慢波的大鼠被認(rèn)為模型制作成功。

1.2.2 給藥方法 西藥組：以體重50 kg成人每天服用丙戊酸鈉15 mg/kg的劑量按照體表面積換算成大鼠的劑量灌胃，每次稱(chēng)重后給藥，其他3組給予同體積的蒸餾水灌胃，每天上午、下午各灌胃1次，連續(xù)灌胃3 d；埋線(xiàn)組：大椎穴準(zhǔn)確定位（取穴標(biāo)準(zhǔn)參考中國(guó)中醫(yī)藥出版社李忠仁等2003版《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［2］）并局部剪毛，鑷取一段 PGLA 線(xiàn)，置于埋線(xiàn)針針管的前端，用鑷子將線(xiàn)體推入針管，左手拇、食指繃緊或提起進(jìn)針部位皮膚，右手持針迅速刺入皮下，并進(jìn)一步伸入到穴位適宜的深度；邊推針芯，邊退針管，將線(xiàn)體植入穴位的皮下組織或肌層內(nèi)；出針后，干棉棒按壓1 min～2 min。針刺組：穴位同埋線(xiàn)組，每天上午蒸餾水灌胃后針刺1次，毫針針刺大椎穴，針刺方向與深度同埋線(xiàn)組，輕捻轉(zhuǎn)，每隔l0 min行針1次，30 min后出針，每天1次，連續(xù)針刺3 d。干棉棒按壓數(shù)秒。每日早晨8 h～9 h給大鼠稱(chēng)重并記錄，癲癇大發(fā)作后48 h大鼠斷頭取腦，稱(chēng)重。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。所測(cè)數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，癲癇發(fā)作Ⅳ級(jí)以上發(fā)生率（含Ⅳ級(jí)）用χ2檢驗(yàn)，發(fā)作潛伏期用方差分析之q檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 癇性發(fā)作行為分級(jí)

觀察各組有無(wú)癇性發(fā)作及發(fā)作的潛伏時(shí)間、發(fā)作級(jí)別及持續(xù)時(shí)間。發(fā)作級(jí)別參考 Racine′s分級(jí)法［3］，即0級(jí)：無(wú)驚厥；Ⅰ級(jí)：閉眼、胡須動(dòng)、面部抽搐；Ⅱ級(jí)：點(diǎn)頭、咀嚼伴面部抽搐；Ⅲ級(jí)：一側(cè)前肢抬起、陣攣；Ⅳ級(jí)：站立常伴兩側(cè)前肢陣攣；Ⅴ級(jí)：站立、扭轉(zhuǎn)并伴有跌倒。

模型組10只大鼠均有癲癇發(fā)作的行為表現(xiàn)，有9只為Ⅳ～Ⅴ級(jí)發(fā)作，1只死亡。主要表現(xiàn)為前肢抽動(dòng)伴站立或強(qiáng)直甚至是全身強(qiáng)直-陣攣發(fā)作。本實(shí)驗(yàn)成功建立了急性癲癇大鼠模型。

2.2 穴位埋線(xiàn)法對(duì)癲癇大鼠急性發(fā)作潛伏期的影響

埋線(xiàn)組、西藥組、針刺組與模型組比較，均可延長(zhǎng)大鼠癇性發(fā)作潛伏期（P<0.05），且三組中以埋線(xiàn)組最為明顯，但三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠癇性發(fā)作潛伏期的比較 （min，±s）

表1 各組大鼠癇性發(fā)作潛伏期的比較 （min，±s）

注：與模型組比較，1）P<0.05

組別 n 潛伏期西藥組 10 17.2±1.6 1）針刺組 10 16.3±2.6 1）埋線(xiàn)組 10 17.7±1.5 1）模型組 10 10.4±2.4

2.3 穴位埋線(xiàn)法對(duì)癲癇大鼠癇性發(fā)作程度的影響

模型組有9只大鼠出現(xiàn)Ⅳ～Ⅴ級(jí)癇性發(fā)作，Ⅳ～Ⅴ級(jí)癇性發(fā)作率為90%，造模成功。西藥組與模型組均有1只大鼠Ⅴ級(jí)癇性發(fā)作后死亡。4組等級(jí)資料的比較用Ridit分析（P<0.05），提示西藥組、針刺組、埋線(xiàn)組造模后大鼠Ⅳ～Ⅴ級(jí)癇性發(fā)作率均明顯低于模型組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三組中以針刺組Ⅴ級(jí)癇性發(fā)作率相對(duì)較高，但三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表2。

根據(jù)表1、表2數(shù)據(jù)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件用散點(diǎn)圖描述，提示各組大鼠癇性發(fā)作程度與潛伏期不存在相關(guān)關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)圖1。

表2 各組大鼠癇性發(fā)作程度的比較 （min）

2.4 穴位埋線(xiàn)法對(duì)癲癇大鼠體重的影響

4組大鼠每日體重與前一日相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），觀察數(shù)據(jù)，西藥組大鼠體重增長(zhǎng)明顯，埋線(xiàn)組大鼠體重增長(zhǎng)較平穩(wěn)，模型組大鼠在造模后體重增長(zhǎng)趨勢(shì)較造模前放緩，但前后無(wú)顯著性差異（P>0.05）。針刺組大鼠在造模前1 d、造模當(dāng)天以及造模后1 d的體重較同期模型組大鼠體重小，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠造模后每日體重的比較 （g，±s）

表3 各組大鼠造模后每日體重的比較 （g，±s）

注：每日體重與本組前一日體重比較，1）P<0.05；與同期模型組大鼠體重比較，2）P<0.05

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3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，針刺組大鼠體重較模型組大鼠體重偏小，這與多數(shù)研究以及臨床工作不相符［4］，主要考慮是在對(duì)大鼠進(jìn)行針刺操作過(guò)程中產(chǎn)生的不利影響。與埋線(xiàn)組只需第一日進(jìn)行操作以及西藥組只需做簡(jiǎn)單的灌胃操作相比，針刺組大鼠每日針刺操作前需要繩子固定四肢然后針刺，持續(xù)30 min，此過(guò)程難免對(duì)大鼠的身體及精神產(chǎn)生一定影響，進(jìn)而影響正常飲食，導(dǎo)致體重增長(zhǎng)較其他組緩慢。而西藥組體重增長(zhǎng)明顯，是否屬于正常，由于觀察時(shí)間短暫，較難作出判斷，但之前有研究報(bào)道在長(zhǎng)時(shí)間服用丙戊酸鈉抗癲癇治療，可能出現(xiàn)體重增加［5］。

青霉素是經(jīng)典的致癇劑，其癲癇點(diǎn)燃模型是一種極為有效的、操作簡(jiǎn)便的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物癲癇模型，癲癇放電持久穩(wěn)定，其急性癲癇模型已獲公認(rèn)，可以用作抗癲癇藥物療效及癲癇發(fā)病機(jī)制的研究。青霉素致癇原理：青霉素誘發(fā)的癲癇電活動(dòng)是阻斷了GABAα受體導(dǎo)致抑制性神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)功能失調(diào)而產(chǎn)生癲癇狀態(tài)［6］。我們通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，青霉素癲癇模型造模成功與否與合適的體重-劑量關(guān)系密切相關(guān)，腹腔注射方式對(duì)癲癇大鼠腦組織的影響的不利干擾較腦內(nèi)貼片小，而且按456萬(wàn)U/kg體重的劑量腹腔注射造模發(fā)生Ⅲ～Ⅴ級(jí)發(fā)作的概率大，且死亡率低，能夠很好滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求。

近些年來(lái)，穴位埋線(xiàn)應(yīng)用于癲癇治療，取得了較好的臨床療效，同時(shí)在穴位埋線(xiàn)治療癲癇的機(jī)理探討及埋線(xiàn)技巧的創(chuàng)新都有較大的發(fā)展與進(jìn)步，進(jìn)一步促進(jìn)了穴位埋線(xiàn)在癲癇治療的應(yīng)用，提高了療效。穴位埋線(xiàn)療法持續(xù)不斷的刺激可以向大腦反饋促通信息，形成一種復(fù)雜持久而柔和的非特異性刺激沖動(dòng)。一部分經(jīng)傳入神經(jīng)到相應(yīng)節(jié)段的脊髓后角，再內(nèi)傳臟腑起調(diào)節(jié)作用；另一部分經(jīng)脊髓后角上傳大腦皮層，對(duì)大腦的異常放電病灶進(jìn)行抑制，同時(shí)，埋線(xiàn)后可使大腦皮層建立新的興奮灶，從而對(duì)病灶產(chǎn)生良性誘導(dǎo)，緩解病灶放電，而達(dá)到消除疾病的目的［7-8］。穴位埋線(xiàn)療法寓粗針透穴、放血、穴位注射、組織療法于一體，具有“以線(xiàn)代針”的長(zhǎng)效針感治療效果，可避免長(zhǎng)期針刺對(duì)局部的不良反應(yīng)。由于羊腸線(xiàn)長(zhǎng)期持續(xù)刺激穴位，以達(dá)穴位刺激的續(xù)效作用，提高穴位的興奮性與傳導(dǎo)性，具有止痛、解痙、調(diào)和氣血、疏通經(jīng)絡(luò)、扶正祛邪、平衡陰陽(yáng)，調(diào)節(jié)機(jī)體有關(guān)臟腑器官功能趨于平衡，達(dá)到良性、雙向性調(diào)整作用［9-10］。大椎穴為督脈的要穴，手足三陽(yáng)經(jīng)與督脈的交會(huì)穴，又稱(chēng)“諸陽(yáng)之會(huì)”，內(nèi)可通行督脈，外可流走三陽(yáng)，為調(diào)整全身機(jī)能要穴。癲癇病位在腦，督脈入腦，腦為元神之府，督脈氣血失調(diào)，則“大人癲疾，小兒驚癇”。（《脈經(jīng)·平奇經(jīng)八脈病》）。大椎有清熱息風(fēng)、寧神止癇之功。本文通過(guò)大椎穴處穴位埋線(xiàn)對(duì)癲癇大鼠癇性發(fā)作行為以及體重的影響后進(jìn)一步說(shuō)明了穴位埋線(xiàn)法在抑制癲癇發(fā)作不僅有效而且安全可靠。但考慮到本實(shí)驗(yàn)穴位預(yù)埋線(xiàn)時(shí)間只有3 d，腸線(xiàn)未能完全吸收，故埋線(xiàn)的持續(xù)刺激作用有限。在以后的研究中，可將穴位埋線(xiàn)的時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng)，有助于完整的觀察穴位埋線(xiàn)的短期速效和長(zhǎng)期續(xù)效兩種作用。

穴位埋線(xiàn)法的抗癲癇療效與西藥丙戊酸鈉以及常規(guī)針刺無(wú)明顯差異，但從西藥長(zhǎng)期服用存在副作用，常規(guī)針刺需要多次針刺操作，患者耐受性、順應(yīng)性低等缺點(diǎn)考慮，穴位埋線(xiàn)法治療癲癇有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，而且在預(yù)防癲癇發(fā)作方面更明顯，可根據(jù)既往患者癲癇發(fā)作史，制定埋線(xiàn)時(shí)間，可較好地預(yù)防癲癇發(fā)作或者減少發(fā)作次數(shù)，降低發(fā)作程度，提高生活質(zhì)量。在癲癇的發(fā)作期，加以穴位埋線(xiàn)，控制或緩解癲癇的發(fā)作，可減少西藥服用的頻率與劑量，降低西藥所致的副作用；在緩解期，采用埋線(xiàn)療法，可減少發(fā)作頻率及患者的就診次數(shù)，提高患者的依從性。目前研究中仍有許多問(wèn)題仍未解決，在穴位埋線(xiàn)的抗癲癇機(jī)理以及對(duì)埋線(xiàn)的介入時(shí)機(jī)、間隔時(shí)間、穴位、針刺的深度對(duì)療效的影響，都需要做進(jìn)一步的探討研究。

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