王英俊，郝智慧，2，邱 梅，沈 巍

(1.青島康地恩藥業(yè)股份有限公司，山東青島 266061;2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)化學(xué)與藥學(xué)院，山東青島 266111)

雞球蟲病是由艾美耳科艾美耳屬的球蟲寄生于雞腸上皮細(xì)胞內(nèi)所引起的一種危害極為嚴(yán)重的一種流行性寄生蟲病。該病分布廣泛，發(fā)生普遍，危害十分嚴(yán)重，在病初無明顯癥狀，當(dāng)觀察到癥狀，如死亡、拉血便時一般已到了晚期，其發(fā)病率30% ～100%，死亡率 20% ～ 80%，甚至更高［1－2］，嚴(yán)重威脅著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展。目前市場上抗球蟲藥物的過量使用使其產(chǎn)生耐藥性，嚴(yán)重制約了其在防治球蟲病方面的應(yīng)用，開發(fā)新的球蟲藥勢在必行。硝唑尼特(nitazoxanide，NTZ)是一種硝噻柳酸酰胺的衍生物，由Romark實(shí)驗(yàn)室于1976年首次報道作為一種新型抗寄生蟲藥物［3］。它具有廣譜、耐受性好、安全劑量高、毒副作用低等優(yōu)點(diǎn)，而且還具有抗細(xì)菌、抗病毒活性［4］。董靖等［5］以往報道硝唑尼特主要是用在抗原蟲和蠕蟲等方面，在抗球蟲方面少有報道。為了能將硝唑尼特混懸液開發(fā)為新的抗球蟲藥，并檢驗(yàn)其對肉仔雞球蟲病的治療效果，進(jìn)行了以下試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 試驗(yàn)藥物:硝唑尼特混懸液，含量5%，生產(chǎn)批號:20110413，康地恩藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。對照藥物:癸氧喹酯溶液(含量3%，生產(chǎn)批號20110323)、妥曲珠利溶液(含量5%，生產(chǎn)批號20110112)，均為菏澤普恩藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。飽和生理鹽水為實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 試驗(yàn)蟲卵 雞柔嫩艾美爾球蟲卵囊由國家動物用保健品工程技術(shù)研究中心提供。

1.3 試驗(yàn)動物 1日齡AA肉雞，購于青島正大種雞場，出殼后立即運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，全程在經(jīng)火焰消毒的無球蟲環(huán)境內(nèi)飼養(yǎng)，飼喂無抗球蟲藥的全價飼料，自由采食和飲水，24 h光照。飼養(yǎng)至14日齡經(jīng)糞檢無球蟲后用于試驗(yàn)。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計 選用210只14日齡健康A(chǔ)A肉雞，逐只稱重后隨機(jī)分為7組，每組30只(表1)。將含重鉻酸鉀溶液的卵囊，離心洗滌去除重鉻酸鉀，調(diào)整至7×104/mL孢子化卵囊，經(jīng)嗉囊灌胃感染，每只雞感染7×104個孢子化柔嫩艾美爾球蟲卵囊。試驗(yàn)期間，每天觀察記錄雞的精神狀態(tài)、食欲、飲水、排糞、發(fā)病雞和死亡數(shù)。死亡雞稱重后剖檢，以確定病死雞是否死于球蟲病。感染當(dāng)天為第1天，感染后第4天開始檢查糞便，每天記錄各組血糞堆數(shù)(僅有血絲不算)。第5天開始收集每組的糞便，檢查每組雞排出的卵囊總數(shù)，直至第8天剖殺為止。第8天將所有剩余試驗(yàn)雞撲殺、稱重、剖檢。觀察盲腸病變，取盲腸內(nèi)容物，計算盲腸內(nèi)的卵囊數(shù)。

表1 試驗(yàn)分組及處理方法

1.5 檢測指標(biāo)

1.5.1 相對增重率 相對增重率(%)=(感染用藥組或感染不用藥組平均增重/不感染不用藥組平均增重)×100%。不感染不用藥組雞的相對增重率為100%。

1.5.2 存活率 存活率(%)=(組內(nèi)存活雞數(shù)/組內(nèi)總雞數(shù))×100%。

1.5.3 血便記分 參照Morehouse和Baron［6］的方法，對各組雞的糞便進(jìn)行評定記分。

1.5.4 盲腸病變記分 參照 Johnson和 Reid［7］的標(biāo)準(zhǔn)對盲腸病變進(jìn)行評定記分，病變值=每組平均病變記分×10。

1.5.5 卵囊值 參照角田清［8］介紹的方法進(jìn)行。

1.5.6 抗球蟲指數(shù)(ACI)ACI=(相對增重率+存活率)－(病變值+卵囊值)［9］。判斷標(biāo)準(zhǔn):ACI在180以上為高效，160～180為中效，160～120為低效，120以下為無效。

1.5.7 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)結(jié)果采用 SPSS13.0統(tǒng)計分析，采用鄧肯氏(Duncan)法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)［10］。

2 結(jié)果

2.1 攻蟲后臨床癥狀及剖檢病變 試驗(yàn)雞攻蟲3 d后主要表現(xiàn)為精神沉郁，反應(yīng)遲鈍，羽毛蓬亂，無光澤，雙翅下垂，閉目縮頸，擁擠;4 d后部分雛雞排出血樣糞便，或暗紅色、西紅柿樣糞便，飲食廢絕，體質(zhì)消瘦，全身貧血，冠、肉囊、皮膚顏色蒼白。健康對照組臨床觀察狀況良好，糞便正常，剖檢正常。

剖檢攻蟲病死雞，胸肌、腿肌發(fā)白，心肝正常，腸道發(fā)白，腸壁增厚，盲腸腫脹2～3倍，呈暗紅色，充滿大量血液，盲腸內(nèi)集有大量血液、血凝塊，盲腸壁增厚。

2.2 治療試驗(yàn)結(jié)果 各試驗(yàn)組的存活率、相對增重率、病變值、卵囊值、糞便記分、抗球蟲指數(shù)各項指標(biāo)見表2。在表2中分別對不同組之間的存活率、相對增重率和抗球蟲指數(shù)等三項主要指標(biāo)進(jìn)行了差異顯著性檢驗(yàn)。

表2 治療試驗(yàn)結(jié)果

從表2可以看出，硝唑尼特混懸液高、中劑量組的相對增重率與癸氧喹酯溶液組和妥曲珠利溶液組相比差異不顯著(P＞0.05)，與低劑量組相比差異顯著(P＜0.05)，與空白對照組相比差異顯著(P ＜0.05)。

存活率統(tǒng)計結(jié)果顯示，硝唑尼特混懸液高、中劑量組與低劑量組相比差異顯著(P＜0.05)，與癸氧喹酯溶液組差異顯著(P＜0.05)，與妥曲珠利溶液組差異不顯著(P＞0.05)?？瞻讓φ战M與癸氧喹酯溶液組相比差異不顯著(P＞0.05)。

硝唑尼特高、中劑量組的抗球蟲指數(shù)分別為168.3和 163.6，極顯著高于低劑量組(ACI為137.9)和不給藥組(P＜0.01)，與癸氧喹酯相比差異顯著(P ＜0.05)，與妥曲珠利相比差異不顯著(P ＞0.05)。

與陽性對照組比較，藥物添加后各用藥組仍出現(xiàn)血便，但是除硝唑尼特低劑量組外，其余組與感染不給藥組的比較，血便記分有所降低。

3 討論

從治療試驗(yàn)結(jié)果可以看出，硝唑尼特混懸液的中、高劑量組在抗球蟲指數(shù)、存活率及增重率方面差異不顯著，且都表現(xiàn)出優(yōu)秀的抗球蟲效果，從抗球蟲指數(shù)上看屬于中效抗球蟲藥，此結(jié)果與張西臣等［11］的報道基本相同。

三種藥物均對雞球蟲病有治療效果，能有效減輕球蟲病對雞的損害。硝唑尼特混懸液高、中劑量組的相對增重率明顯高于感染不給藥對照組，與癸氧喹酯組和妥曲珠利組相比差異不顯著(P＞0.05)。從抗球蟲指數(shù)上看，硝唑尼特混懸液屬于中效抗球蟲藥，若采用合理的給藥時間和給藥劑量，可以降低雞球蟲病對雛雞生長性能的負(fù)面影響，有效的抑制卵囊的排出，可以避免造成球蟲卵囊的循環(huán)感染，同時球蟲又是自身限制性疾病，從而可以在未使用該藥的雞場中利用該藥達(dá)到凈化球蟲的目的。

綜上所述，硝唑尼特混懸液對雞柔嫩艾美耳球蟲病具有一定的治療效果，硝唑尼特中劑量組屬中效抗球蟲藥，按360 mg/kg劑量給藥可以達(dá)到與妥曲珠利推薦劑量相同的效果，有望開發(fā)為新的抗球蟲藥物。

［1］寧長申，張龍現(xiàn)，菅復(fù)春，等.中藥防治人工感染雞柔嫩艾美爾球蟲病藥效試驗(yàn)［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2006，25(3):31－33.

［2］王 星，陳 莊，覃宗華，等.中藥“艾球康”煎劑防治雞柔嫩艾美耳球蟲病藥效試驗(yàn)［J］.中國獸醫(yī)寄生蟲病，2007，15(5):15－17.

［3］張可煜，王國友，薛飛群.抗寄生蟲新藥硝唑尼特研究進(jìn)展［J］.獸醫(yī)導(dǎo)刊，2007(12):30231.

［4］Rao R U，Huang Y F，F(xiàn)ischer K，et al.Brugia malayi:Effects of nitazoxanide and tizoxanide on adult worms and microfilariae of filarial nematodes［J］.Exp Parasitol，2008，121(1):38245.

［5］董 靖，鄧旭明，鄧彥宏.抗寄生蟲新藥硝唑尼特研究進(jìn)展［J］.中國獸醫(yī)雜志，2010，44(5):51 －53.

［6］Morehouse N F，Baron R R.Coccidiosis evaluation of coccidiostats of mortality，weight gains and fecal scores［J］.Experimental Parasitology，1970，28(1):25 －29.

［7］Johnson J，Reid W M.Anticoccidia drugs:Lesion scoring techniques in battery and floorpan experiment［J］.Exp Parasitol，1970，28:30－36.

［8］角田清.雞球蟲?。跰］.陳 宜，明如鏡，譯.上海:上海科技出版社，1986:91.

［9］楊茂生.幾種抗球蟲藥對雞球蟲病的防治效果試驗(yàn)［J］.中國獸醫(yī)科技，2001，31(12):47 －49.

［10］譚榮波，梅曉仁.SPSS統(tǒng)計分析實(shí)用教程［M］.北京:科學(xué)出版社，2007.

［11］張西臣，李建華，宮鵬濤，等.硝唑尼特在制備抗艾美耳球蟲藥物中的用途:中國，CN101574342［P］.2009 －11－11.