史繼靜 崔中鋒 李廣明

河南省傳染病醫(yī)院，河南鄭州 450000

慢性丙型肝炎（CHC）由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）引起，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康，是導(dǎo)致慢性肝炎肝硬化及肝細(xì)胞癌的重要誘因[1-3]。CHC中20%～30%最終發(fā)展成肝硬化及肝細(xì)胞癌。CHC的治療尚無(wú)理想藥物，干擾素是目前唯一有效的抗病毒藥物，但其療效尚難令人滿(mǎn)意，治愈率低且停藥后約一半病例復(fù)發(fā)。近年來(lái)研究表明：HCV感染所誘發(fā)的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL，效應(yīng)性CD8+T細(xì)胞）在清除HCV和控制HCV感染中起重要作用[4]。本研究中，筆者采用HCV特異性T淋巴細(xì)胞輸注療法治療慢性丙肝，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年1月～2011年12月在我院住院治療的慢性丙型肝炎患者45例，其中，男28例，女17例；年齡14～65歲，平均（32±17）歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2000年修訂的《病毒性肝炎防治方案》[5]。在知情同意的基礎(chǔ)上愿意接受自體HCV特異性CTL輸注治療的入選為治療組（30例），不愿意接受該療法，同時(shí)亦不愿接受干擾素等抗病毒治療的歸為對(duì)照組（15例）。兩組患者性別構(gòu)成、年齡、病程、病情的嚴(yán)重程度、輔助檢查等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具可比性。治療前丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）超過(guò)正常值上限1倍?？笻CV及HCV RNA陽(yáng)性，其他肝炎血清學(xué)指標(biāo)均為陰性。所有患者均無(wú)肝硬化失代償表現(xiàn)及嚴(yán)重的心肺功能不全，并排除自身免疫性肝炎、EB和巨細(xì)胞病毒感染及酒精性肝損害。治療組采用自體HCV特異性CTL輸注治療，2周1次，6次為1個(gè)療程，并輔以一般護(hù)肝及支持療法；對(duì)照組采用一般護(hù)肝及支持療法。兩組均不使用免疫調(diào)節(jié)劑及抗病毒制劑。療程結(jié)束后兩組均隨訪(fǎng)半年。

1.2 方法

1.2.1 HCV特異性T淋巴細(xì)胞的制備

①HCV特異性CTL誘導(dǎo)劑：誘導(dǎo)劑為混合性，由北京希波醫(yī)學(xué)技術(shù)開(kāi)發(fā)公司提供。②制備方法：抽取患者外周血100 mL，肝素抗凝，離心后分為血漿層、中間白膜層和紅細(xì)胞層，取中間白膜層即外周血單個(gè)核細(xì)胞層于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中用HCV特異性CTL誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)培養(yǎng)6 h后，與血漿和紅細(xì)胞一并回輸給患者。

1.2.2 觀(guān)察指標(biāo)與方法

1.2.2.1 癥狀與體征 記錄治療前后主要癥狀和體征、肝功能變化情況及相關(guān)不良反應(yīng)。

1.2.2.2 檢測(cè)指標(biāo) 治療前、治療6周、12周及隨訪(fǎng)結(jié)束時(shí)分別檢測(cè)患者的肝功（Beckman公司）、HCV RNA（泰普生物科學(xué)有限公司）、抗-HCV（上?？迫A公司）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析，非正態(tài)分布資料采用秩和檢驗(yàn)或χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀及不良反應(yīng)發(fā)生情況

兩組患者的精神、食欲、體力等均較治療前好轉(zhuǎn)，治療組改善更明顯。兩組患者均未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)及并發(fā)癥。

2.2 兩組患者ALT復(fù)常率

治療后兩組患者的肝功能均有改善，治療組ALT復(fù)常率明顯高于對(duì)照組。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者ALT復(fù)常率的比較

2.3 兩組患者HCV-RNA陰轉(zhuǎn)率

治療組患者HCV-RNA陰轉(zhuǎn)率在療程結(jié)束時(shí)為46.67%，隨訪(fǎng)24周發(fā)現(xiàn)隨著患者機(jī)體免疫應(yīng)答的增強(qiáng)，有2例在隨訪(fǎng)期發(fā)生陰轉(zhuǎn)；而對(duì)照組無(wú)一例陰轉(zhuǎn)。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者HCV-RNA轉(zhuǎn)陰率的比較[n（%）]

2.4 治療組患者治療前病毒復(fù)制水平與HCV-RNA轉(zhuǎn)陰的關(guān)系

對(duì)治療組患者治療前的病毒復(fù)制水平進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，HCV RNA＞105copies/mL時(shí)病毒的陰轉(zhuǎn)率明顯低于HCV RNA≤105copies/mL時(shí)病毒的陰轉(zhuǎn)率。見(jiàn)表3。

表3 HCV RNA水平與轉(zhuǎn)陰率的關(guān)系[n（%）]

3 討論

目前，全世界HCV感染率為0.1%～5.0%，約70%的患者感染后成為慢性肝炎，我國(guó)有3 000～4 000萬(wàn)的HCV感染者，HCV感染引起的慢性丙型肝炎已成為重大的世界衛(wèi)生問(wèn)題。且HCV是除了HBV感染外引起肝細(xì)胞癌的主要致病因素之一[6-7]。因此，對(duì)CHC的有效治療已成為眾多學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。

體外誘導(dǎo)抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞治療技術(shù)[8]最初用于腫瘤治療。其治療丙肝原理為采用特異性T淋巴細(xì)胞回輸，用HCV多肽抗原在體外誘導(dǎo)、增殖、活化丙肝患者的單個(gè)核細(xì)胞，此種細(xì)胞回輸體內(nèi)后可在體內(nèi)繼續(xù)增殖并聚集在其他靶細(xì)胞部位，引起強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫反應(yīng)而起到清除丙肝病毒的作用。本研究中，30例接受HCV特異性T淋巴細(xì)胞治療的患者，在治療12周HCV RNA陰轉(zhuǎn)率為46.67%，隨后在隨訪(fǎng)中又有2例發(fā)生陰轉(zhuǎn)，這可能與該療法改善了患者自身的免疫功能有關(guān)。同時(shí)，筆者對(duì)治療組患者按照不同的病毒復(fù)制狀態(tài)進(jìn)行分層分組研究，發(fā)現(xiàn)治療前HCV-RNA≤105copies/mL時(shí)病毒的轉(zhuǎn)陰率較高，這可能與病毒的高復(fù)制狀態(tài)不利于特異性T淋巴細(xì)胞回輸后在體內(nèi)進(jìn)行免疫激活有關(guān)。對(duì)該類(lèi)患者的治療是否可與其他藥物聯(lián)合以提高療效是筆者后續(xù)研究的問(wèn)題。

干擾素聯(lián)合利巴韋林是目前公認(rèn)的治療慢性丙肝的方法，但療效欠滿(mǎn)意，尤其是治療過(guò)程中出現(xiàn)的嚴(yán)重副作用，使不少患者無(wú)法耐受。筆者用HCV特異性T淋巴細(xì)胞輸注治療的30例慢性丙型肝炎患者，治療及隨訪(fǎng)期間未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)，患者耐受性良好，精神體力明顯好轉(zhuǎn)，這無(wú)疑為不愿接受干擾素治療或干擾素?zé)o法耐受的患者提供了一種新的治療策略。

本研究證實(shí)，HCV特異性T淋巴細(xì)胞輸注療法治療慢性丙肝安全有效，為CHC的治療提供了新的思路和方法，但其遠(yuǎn)期療效如何，值得臨床進(jìn)一步研究。

[1]項(xiàng)波.利巴韋林聯(lián)合干擾素α對(duì)慢性丙型肝炎患者免疫功能及病毒應(yīng)答的影響[J].中國(guó)醫(yī)師進(jìn)修雜志，2010，33（13）： 60-62.

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