劉善齋，劉洪瑜，涂曉華，劉永文

（1.國家肉牛牦牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系亳州綜合試驗(yàn)站，安徽 亳州236800；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥230036）

供體母牛的超數(shù)排卵（簡稱超排）是牛胚胎移植的主要技術(shù)環(huán)節(jié)之一，超排是獲得有效體內(nèi)胚胎的重要來源［1］。家畜胚胎移植可以充分發(fā)揮優(yōu)良母畜在品種改良和育種中的作用，尤其是對牛羊單胎動(dòng)物來說，通過超排和胚胎移植技術(shù)（multiple ovulation and embryo transfer，MOET）可以使供體的繁殖后代增加6～7倍，它也是一項(xiàng)代替種畜引進(jìn)，利用生產(chǎn)性能低下母牛繁殖良種牛的經(jīng)濟(jì)安全實(shí)用的高效繁殖技術(shù)。于2010年11月～2012年3月在亳州綜合試驗(yàn)站依托單位（譙城區(qū)智純?nèi)馊辄S牛繁育場），選擇青年和牛母牛作為供體牛進(jìn)行了超數(shù)排卵、胚胎采集工作；同時(shí)選擇育成荷斯坦母牛和西雜母牛作為受體進(jìn)行了的鮮胚胎移植工作，取得一定的效果?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供體牛和受體牛的選擇 選擇本場飼養(yǎng)的4頭純種青年和牛母牛作為供體牛，年齡在12～18月齡，體重400kg以上，營養(yǎng)中上等；并在本場選擇67頭育成荷斯坦母牛及西雜母牛作為受體牛，年齡1～1.5歲，均采用散欄圈養(yǎng)。選擇自然發(fā)情正常的受體牛。

1.1.2 凍精來源 本站制作和牛凍精和國外凍精。

1.1.3 藥品及器械 孕酮栓（CIDR），由新西蘭進(jìn)口，供體牛每次超排使用一支；促卵泡素（FSH）是中科院動(dòng)物所生產(chǎn)，規(guī)格10IU/瓶；獸用前列腺素（PG）由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所研制生產(chǎn)，規(guī)格0.3mg/支；促排卵素（LHRH－A3），由寧波市激素制品有限公司生產(chǎn)，規(guī)格25μg/支；采卵液（PBS），由實(shí)驗(yàn)室配制；PBSS液從國外進(jìn)口，由美國AB公司生產(chǎn)，規(guī)格50mL/袋；維生素 A、D、E針劑（VADE）由北京維爾德生物科技有限公司生產(chǎn)；胚胎采集器械由日本富士平株式會(huì)社進(jìn)口。

1.2 方法

1.2.1 供體牛超排處理方法與程序 供體牛超排處理使用CIDR十FSH十PG方法［2］，見表1。

1.2.2 供體牛人工輸精技術(shù) 觀察和確定牛的發(fā)情時(shí)間，做到適時(shí)輸精。一般情況在第9d和第10 d各輸精一次，即第一次配種，在穩(wěn)定發(fā)情后10～12 h，凍精1支/頭，同時(shí)肌注促排3號25μg/頭，第二次配種，在第一次配種后12h，凍精1支/頭。對供體牛外陰清潔、消毒，輸精器保持無菌，進(jìn)行子宮體輸精。

1.2.3 受體牛同期發(fā)情 同期發(fā)情的方法都采用CIDR十PG法，在受體牛陰道內(nèi)放入CIDR的當(dāng)天為0d；到第7d受體牛肌注PG（0.6mg/頭）；到第10d下午取出CIDR；到第11～13d全天觀察發(fā)情情況，以站立接受爬跨不動(dòng)為發(fā)情標(biāo)準(zhǔn)。對發(fā)情的 牛到第19d進(jìn)行移植。

表1 供體牛超排處理程序和方法

表2 受體牛同期發(fā)情實(shí)施方案

1.2.4 胚胎移植 胚胎從供體牛體內(nèi)取出，在顯微鏡下檢出，放入小平皿中的PBSS液中，胚胎移入PBSS液洗滌10次，鑒定胚胎質(zhì)量A級、B級和C級胚胎為可用胚胎，三段法裝入細(xì)管一裝槍。

胚胎移植：保持無菌狀態(tài)下將裝有胚胎的細(xì)管裝入移植槍，套上硬外套、軟外套，移植前，在受體牛薦尾結(jié)合部硬鞘膜外腔內(nèi)注射5%的鹽酸利多卡因2～3mL進(jìn)行局麻，使其保持安靜，便于操作［3］。然后清洗外陰，用無菌紙擦拭，稍干酒精棉消毒，再用高壓消毒過的生理棉片擦拭，用直腸把握法將胚胎輸入具有黃體一側(cè)的子宮角。

2 結(jié)果與分析

2.1 超排效果與分析

選擇4頭青年純種和牛母牛進(jìn)行超排，重復(fù)沖胚采卵13頭次，共沖胚122枚、頭均沖胚9.38枚，其中可用胚胎75枚，頭均可用胚5.77枚，見表3。

如表3所示，整個(gè)超排結(jié)果得到平均5.77枚/頭次的可用胚胎，可用胚胎率為61.48%。牛的超數(shù)排卵是一個(gè)復(fù)雜的生理過程，受很多因數(shù)的影響，包括品種、生物學(xué)特性、年齡、季節(jié)、時(shí)間、FSH品牌及劑量、卵巢狀態(tài)、超排方法等等因數(shù)的影響。吳柱月等報(bào)道［4］，肉牛（包括西門塔爾牛、短角牛等）的超排結(jié)果，頭均可用胚胎數(shù)，青年牛為5.9～7.2枚之間，經(jīng)產(chǎn)牛為5.8～7.5枚之間，可用胚胎率，青年牛為63.6%，經(jīng)產(chǎn)牛為69.2%。與此相比，本試驗(yàn)中和牛母牛的超排效果稍低，這是否與品種、激素或 營養(yǎng)等因素有關(guān)，還有待進(jìn)一步研究。

表3 和牛青年母牛超排效果

2.2 受體牛的同期發(fā)情和胚胎移植妊娠結(jié)果

2011年2～3月在依托單位養(yǎng)殖場，對60頭荷斯坦母牛和24頭西雜母牛進(jìn)行同期發(fā)情處理，處理結(jié)果見表4。結(jié)果獲得75頭同期發(fā)情，同期發(fā)情率達(dá)到89.2%，實(shí)際鮮胚移植了67頭受體牛。2個(gè)月妊娠檢查有35頭懷孕，移植受胎率為52.23%。效果見表4。

表4 受體牛同期發(fā)情和胚胎移植效果

3 討論

1）供體牛超排和重復(fù)超排效果極不穩(wěn)定，受激素種類、劑量、超排程序、家畜品種、年齡、胎次、機(jī)體狀況、遺傳特性、繁殖力、卵巢功能、子宮環(huán)境、季節(jié)、環(huán)境等諸多因素的影響。此外，獲得可用胚胎的數(shù)量尚受采卵操作技術(shù)水平的影響。所以在實(shí)踐工作中要減少各種因素的影響，以求達(dá)到最好的效果。

2）由于胚胎移植技術(shù)已經(jīng)成為一項(xiàng)成熟的技術(shù)，因此受體牛飼養(yǎng)管理已成為影響移植成功率的主要因素，所以必須對受體牛在胚胎移植前和移植后加強(qiáng)飼養(yǎng)管理［5］。這次荷斯坦牛和雜交牛獲得移植妊娠率的效果相差很大，可能與受體牛品種及營養(yǎng)狀況有關(guān)。

3）本次實(shí)驗(yàn)研究，使用和牛母牛進(jìn)行超排，利用和牛純種凍精輸精生產(chǎn)胚胎，以及利用受體牛獲得純種和牛二代，在縮短世代間隔和快速擴(kuò)繁方面與人工授精相比體現(xiàn)出胚胎移植的巨大優(yōu)勢。

4）本次試驗(yàn)研究，使用75頭受體牛，同期發(fā)情后可移植胚胎頭數(shù)為67頭。如果能夠使用鮮胚和凍胚結(jié)合移植受體牛，使受體牛能得到充分的利用，可以更大發(fā)揮胚胎移植的優(yōu)勢。

4 結(jié)論

和牛母?？梢允褂肅IDR十FSH十PG方法進(jìn)行超數(shù)排卵，并采用胎移植技術(shù)提高其利用效率。

［1］李 銘，吳柱月，蔣小剛，等.供體牛重復(fù)超數(shù)排卵效果試驗(yàn)初報(bào)［J］.廣西畜牧獸醫(yī)，2005，（5）214－216.

［2］李 銘，吳柱月，莫柳忠，等.廣西地區(qū)荷斯坦牛超數(shù)排卵效果分析［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2008，（3）：53－56.

［3］梁 坤.如何提高牛超排效果［J］.黑龍江動(dòng)物繁殖，2002，（4）：14－15.

［4］吳柱月，李 銘，莫柳忠，等.廣西牛胚胎移植技術(shù)研究結(jié)果及分析明［J］.中國畜牧雜志，2009，（增刊）：236－239.

［5］吳柱月，李 銘，莫柳忠，等.廣西西門塔爾青年母牛和荷斯坦母牛超數(shù)排卵及胚胎移植初報(bào)［J］.廣西畜牧獸醫(yī)，2003，（4）：149－151.