趙金娟

合肥市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，安徽 合肥 230061

宮頸癌是女性惡性腫瘤中發(fā)病率位居第二的腫瘤。宮頸癌新發(fā)病例數(shù)全世界每年達(dá)到47萬(wàn)例，其中，發(fā)展中國(guó)家占80%。宮頸癌有可逆且較長(zhǎng)的癌前病變期，因此，宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)就顯得尤其重要[1]。另外，目前控制宮頸癌的主要手段是篩查[2]。本文進(jìn)行了高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）檢測(cè)聯(lián)合肉眼醋酸試驗(yàn)在宮頸癌前病變篩查中應(yīng)用的研究，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009年8月～2010年2月于我院就診的532例可疑宮頸癌前病變患者為研究對(duì)象，年齡21～62歲，平均31.2歲。

1.2 方法

1.2.1 肉眼醋酸試驗(yàn) 于試驗(yàn)前向所有可疑宮頸癌前病變患者講解檢查過(guò)程，簽署《知情同意書》。患者取膀胱截石位于檢查床上，先觀察有無(wú)分泌物，外生殖器和會(huì)陰部有無(wú)疣、潰瘍、丘疹、水泡、水腫、表皮剝脫等，有無(wú)腹股溝淋巴結(jié)腫大。暴露宮頸，觀察宮頸形態(tài)及大小，拭凈宮頸表面的分泌物，辨別鱗柱狀交界區(qū)，觀察是否有宮頸炎、濕疣、白斑、陳舊性裂傷、納氏囊、息肉、宮頸外翻等；將沾有5%醋酸溶液的棉球涂于宮頸表面，1 min后觀察宮頸著色情況。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù) 取凍存已裂解的細(xì)胞，沉淀RNA，清洗RNA后將RNA干燥，合成樣品cDNA，將包含逆轉(zhuǎn)錄buffer、上游引物、下游引物、dNTP、逆轉(zhuǎn)錄酶、DEPC水、RNA模板共10 μl的反應(yīng)體系混合，得到逆轉(zhuǎn)錄終溶液后，將梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品及待測(cè)樣品的管家基因行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，制備出用于繪制梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線的DNA模板，最后將待測(cè)樣品的待測(cè)基因行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肉眼醋酸試驗(yàn)情況

532例可疑宮頸癌前病變患者均進(jìn)行肉眼醋酸試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)異常著色的患者320例，占60.15%，年齡28～59歲，平均35.4歲。

2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)高危型HPV感染情況

320例肉眼醋酸試驗(yàn)異常著色的患者中，高危型HPV陽(yáng)性190例，陽(yáng)性率為59.38%。212例肉眼醋酸試驗(yàn)正常著色的患者中，高危型HPV陽(yáng)性18例，陽(yáng)性率為8.49%。肉眼醋酸試驗(yàn)異常著色患者高危型HPV感染陽(yáng)性率（59.38%）明顯高于肉眼醋酸試驗(yàn)正常著色患者（8.49%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見(jiàn)表 1。

表1 不同檢測(cè)方法高危型HPV感染情況比較

3 討論

宮頸癌在發(fā)展中國(guó)家是嚴(yán)重威脅婦女健康和生命的疾病之一[3]，也是唯一通過(guò)人為干預(yù)即可降低病死率和發(fā)病率的惡性腫瘤[4]。宮頸癌前病變是指癌癥發(fā)生部位于癌癥發(fā)生前產(chǎn)生的病變。其中，與宮頸浸潤(rùn)癌密切相關(guān)的癌前病變主要是指宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN），其進(jìn)展變化過(guò)程中的細(xì)胞學(xué)改變則被作為篩選方法的依據(jù)[5]。宮頸癌前病變主要通過(guò)篩查達(dá)到及時(shí)、有效診斷的目的。HPV持續(xù)感染是宮頸癌前病變和宮頸癌發(fā)病、致病的主要原因[6]。

以往傳統(tǒng)的宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為宮頸巴氏涂片法，雖然宮頸巴氏涂片法在以前大大降低了宮頸癌的死亡率和發(fā)病率，但是巴氏涂片法漏診率高，假陰性率高。李潔等[7]報(bào)道，宮頸巴氏涂片法的敏感度為20%～35%，已逐漸被其他的檢查方法如肉眼醋酸試驗(yàn)和HPV-DNA法代替。肉眼醋酸試驗(yàn)的試驗(yàn)原理為蛋白凝固。HPV感染上皮的不正常細(xì)胞和細(xì)胞過(guò)多產(chǎn)生的蛋白質(zhì)與醋酸結(jié)合后凝固，出現(xiàn)發(fā)亮、雪白的損害，其邊緣為羽毛狀、角狀或鋸齒狀。Ottaviano等[8]最早將肉眼醋酸試驗(yàn)應(yīng)用于臨床，他認(rèn)為宮頸不典型增生細(xì)胞、宮頸不典型鱗化狀細(xì)胞等由于含有較豐富的染色質(zhì)，細(xì)胞核漿比例大，加入醋酸后表層細(xì)胞和細(xì)胞漿發(fā)生凝結(jié)，降低細(xì)胞的透明度，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的白色，而正常的柱狀上皮雖然在醋酸的作用下出現(xiàn)細(xì)胞腫脹，血管收縮，一過(guò)性降低細(xì)胞透明度，也可出現(xiàn)一過(guò)性白色改變，但是時(shí)間較短，故涂抹醋酸1 min后觀察到白色改變則為宮頸不典型增生細(xì)胞和宮頸不典型鱗化狀細(xì)胞。肉眼醋酸試驗(yàn)具有依從性好，失訪率低，方法簡(jiǎn)單，易于掌握，具有只需集中、系統(tǒng)、短期的培訓(xùn)即可操作等優(yōu)勢(shì)[9-11]。全球?qū)m頸癌聯(lián)盟（ACCP）認(rèn)為，在發(fā)展中國(guó)家，可將肉眼醋酸試驗(yàn)作為宮頸癌前病變的初篩方法[12-13]。本研究肉眼醋酸試驗(yàn)的靈敏度為60.15%，稍低于Sankaranarayanan[11]研究中選取56939例患者篩查的靈敏度76.8%。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是一種近年來(lái)發(fā)展較快的多色熒光檢測(cè)核酸定量技術(shù)[14-15]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)定量檢測(cè)PCR擴(kuò)增引物，且在封閉狀態(tài)下檢測(cè)，克服了擴(kuò)增引物污染導(dǎo)致的假陰性、假陽(yáng)性等缺陷，特異性增強(qiáng)，提高了檢測(cè)質(zhì)量，是臨床應(yīng)用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的一種可靠的方法[16]。本研究結(jié)果顯示，肉眼醋酸試驗(yàn)異常著色患者HPV感染陽(yáng)性率為59.38%，類似于劉紅衛(wèi)等[17]報(bào)道的高危型HPV陽(yáng)性率為63.39%。

本研究分別檢測(cè)了肉眼醋酸試驗(yàn)異常著色患者的高危型HPV感染陽(yáng)性率和肉眼醋酸試驗(yàn)正常著色患者的高危型HPV感染陽(yáng)性率，意在用較為精確的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)證明正常著色和異常著色患者中高危型HPV陽(yáng)性率的差異，從而進(jìn)一步說(shuō)明肉眼醋酸可作為較為可靠的初篩方法篩選出宮頸癌前病變患者。

綜上所述，肉眼醋酸試驗(yàn)聯(lián)合高危型HPV-DNA檢測(cè)可及時(shí)有效地發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，可作為宮頸癌前病變篩查方案應(yīng)用于臨床。

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