任光輝 董 朝 耿中利 李鴻濤 馬斌林

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺頭頸外科，新疆 烏魯木齊 830011)

已有研究表明，幾乎所有實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移均依賴于腫瘤的血管生成。腫瘤血管形成受許多因素的調(diào)節(jié)，其中具有重要實(shí)際意義的是血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)。絕大多數(shù)惡性腫瘤中，VEGF呈高表達(dá)，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖，誘導(dǎo)血管新生，并直接作用于腫瘤細(xì)胞刺激其生長(zhǎng)〔1〕。本文對(duì)我院診治的喉癌患者檢測(cè)VEGF及微血管密度(MVD)表達(dá)情況，探討其在喉癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 病例組50例喉癌患者來(lái)自我院2006年6月至2009年6月住院患者，男28例，女22例，年齡50～82〔平均(61.4±10.9)〕歲。所有病例均經(jīng)病理確診，依據(jù)TNM臨床分期，Ⅰ～Ⅱ期21例，Ⅲ～Ⅳ期29例。根據(jù)病理中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否分為轉(zhuǎn)移組與未轉(zhuǎn)移組，轉(zhuǎn)移組26例，未轉(zhuǎn)移組24例。20例對(duì)照來(lái)自我院聲帶息肉患者，男12例，女8例，年齡48～81〔平均(61.5±12.1)〕歲。兩組性別、年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 試劑與方法 一抗鼠CD34單抗、兔VEGF多抗及即用型SABC試劑盒為武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，采用免疫組化SABC法檢測(cè)，VEGF工作濃度為1∶150稀釋?zhuān)珻D34工作濃度為1∶50稀釋?zhuān)琍BS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性喉癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.2.2 結(jié)果判定 VEGF判定:隨機(jī)以200倍視野下計(jì)數(shù)染成棕黃色的腫瘤細(xì)胞數(shù)占整個(gè)腫瘤細(xì)胞的比例，至少計(jì)數(shù)5個(gè)視野，1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞。VEGF的表達(dá)強(qiáng)度分為0～3級(jí)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) ＜10%計(jì)為0，10% ～25%為1，25% ～50%為2，＞50%為3。MVD計(jì)數(shù):CD34抗體顯示MVD，凡是被抗體染成棕黃色或棕褐色的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞簇作為一個(gè)微血管計(jì)數(shù)，即先在低倍鏡下尋找瘤內(nèi)微血管密集區(qū)，選取5個(gè)血管豐富的視野，于200倍視野內(nèi)計(jì)數(shù)，取平均值，即為MVD。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用±s表示，計(jì)數(shù)資料以%表示，相關(guān)性分析用非參數(shù)檢驗(yàn)的Pearson相關(guān)系數(shù)計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 兩組中VEGF及MVD的表達(dá)情況 50例喉癌組織中VEGF表達(dá)陽(yáng)性例數(shù)為31例(62%)明顯高于對(duì)照組陽(yáng)性例數(shù)〔5例(20%)，P＜0.01〕。喉癌組織MVD表達(dá)值亦高于對(duì)照組〔(22.35±2.1)vs(9.1±3.1)，P ＜0.01〕。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，喉癌患者VEGF水平與癌組織中MVD呈明顯正相關(guān)(r=0.729，P=0.005)。

2.2 VEGF陽(yáng)性表達(dá)與喉癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 VEGF陽(yáng)性表達(dá)率與TNM分期及頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。隨臨床分期的進(jìn)展，VEGF表達(dá)率增高;且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。見(jiàn)表1。

表1 VEGF陽(yáng)性表達(dá)率與喉癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n)

3 討論

惡性腫瘤可呈現(xiàn)出無(wú)限制的生長(zhǎng)、增殖和侵襲的特點(diǎn)，這一切都依賴于建立更多的血管網(wǎng)絡(luò)供給大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并帶走更多的代謝產(chǎn)物，其中VEGF在腫瘤血管生成中發(fā)揮著重要作用〔2，3〕。本組結(jié)果說(shuō)明 VEGF在喉癌發(fā)生中起重要作用。VEGF是一個(gè)分子量為34～35 kD的高度糖基化的堿性蛋白，由分子量為17～22 kD的同源雙聚體構(gòu)成。人體的許多組織可檢測(cè)到VEGF的表達(dá)，VEGF在腫瘤細(xì)胞株中的表達(dá)也很普遍，目前已肯定的有胃腸道原發(fā)腺瘤、喉癌、腎癌、乳腺癌、肺癌、黑色素瘤等。研究表明，腫瘤生長(zhǎng)到1～2 mm3時(shí)，必須有新生血管的形成，才能保證其快速生長(zhǎng)〔4，5〕。VEGF生物學(xué)功能主要有:(1)促進(jìn)血管形成。作為特異內(nèi)皮細(xì)胞分裂素，能直接促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂，增殖，體外促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，并可誘導(dǎo)血管增生。(2)增加血管通透性。(3)增加組織因子的產(chǎn)生，可直接改變內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞浸潤(rùn)，有利于血管形成。腫瘤新生血管有重要作用:(1)輸送氧氣、營(yíng)養(yǎng)，轉(zhuǎn)運(yùn)代謝產(chǎn)物，滿足腫瘤組織無(wú)限生長(zhǎng)的需要。(2)內(nèi)皮細(xì)胞本身對(duì)腫瘤細(xì)胞有旁分泌刺激作用，產(chǎn)生生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移。(3)腫瘤的血管化使癌細(xì)胞易于接近血管系統(tǒng)，并且腫瘤血管的結(jié)構(gòu)缺陷更有利于腫瘤的血管播撒。VEGF可能通過(guò)促進(jìn)喉癌新生血管及淋巴管的增生、提高血管的滲透性等機(jī)制促進(jìn)癌組織的發(fā)展和轉(zhuǎn)移〔6〕。惡性腫瘤轉(zhuǎn)移很少發(fā)生在血管新生之前，腫瘤的轉(zhuǎn)移及其在轉(zhuǎn)移部位的生長(zhǎng)也依賴腫瘤組織的血管新生。腫瘤血管生成分前血管期與血管期，缺乏血液供應(yīng)的腫瘤細(xì)胞主要靠彌散供氧，其體積一般不會(huì)超過(guò)1～2 mm3，可存在數(shù)月至數(shù)年而不發(fā)生轉(zhuǎn)移，一旦其獲得血供則迅速生長(zhǎng)并發(fā)生轉(zhuǎn)移。

腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移受多種因素的影響，其中腫瘤內(nèi)MVD是影響腫瘤生物學(xué)特征的重要因素之一。近年來(lái)，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)腫瘤內(nèi)的血管形成程度與腫瘤的臨床病理特征和預(yù)后有密切的關(guān)系。MVD是利用針對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞抗原的免疫組化技術(shù)對(duì)腫瘤血管進(jìn)行定量，可直接量化反映腫瘤血管生成的程度。MVD指切片中血管“熱點(diǎn)”區(qū)在1個(gè)200倍視野下的血管數(shù)目。一般認(rèn)為腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)與“熱點(diǎn)”區(qū)的MVD有良好的相關(guān)性。本組喉癌患者VEGF水平與癌組織中MVD呈明顯正相關(guān)。表明隨著VEGF水平的增高，MVD增多，血管增生，促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)。

綜上所述，VEGF促進(jìn)血管再生，在喉癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到了重要作用，與淋巴轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)。喉癌中VEGF的表達(dá)與MVD呈正相關(guān)，可以作為判斷腫瘤惡性程度和估計(jì)預(yù)后的獨(dú)立影響因子，為抗血管治療提供依據(jù)。抗腫瘤血管生成的基因治療策略適用于多種實(shí)體瘤，隨著對(duì)VEGF在喉癌發(fā)病機(jī)制中作用研究的進(jìn)一步深入，抑制血管形成治療腫瘤的新策略會(huì)越來(lái)越被重視，配合其他抗腫瘤方法必將提高治療效果。

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