陳 華，伍 燕，王嬌華

新生兒溶血病 (hemolytic disease of the newborn，HDN)是由于母嬰血型不合引起的同種免疫性疾病，可見于 ABO、Rh、MN等血型系統(tǒng)［1］，早期檢測診斷和治療可避免造成新生兒膽紅素腦病等嚴重后果。傳統(tǒng)的試管法因操作步驟多、時間長、重復性較差等得不到重視。微柱凝膠技術是近年來應用于新生兒溶血病抗體檢測的新技術，因其具有靈敏度高、結果穩(wěn)定等優(yōu)點，受到廣泛關注。本研究對這兩種方法進行比較，分析結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012－01－01—05－31在?？谑腥嗣襻t(yī)院住院的臨床表現(xiàn)為高膽紅素血癥、診斷為HDN的患兒62例，其中男38例，女24例;年齡為新生兒出生后12 h～7 d;母親血型均為O型，Rh陽性;患兒血型為A型31例，B型31例，Rh均為陽性。

1.2 HDN診斷標準 根據(jù)文獻 ［2］中標準并符合以下條件:(1)母嬰ABO血型不合;(2)新生兒早期出現(xiàn)高膽紅素血癥 (病理性黃疸)和 (或)貧血;(3)HDN 3項試驗 (即直接抗人球蛋白試驗、游離抗體試驗、抗體放散試驗)中1項陽性。

1.3 儀器和試劑 微柱凝膠卡、孵育器及離心機由達亞美公司提供，抗A、抗B、Rh定型血清由長春博德生物技術有限責任公司提供;ABO反定型紅細胞、直接抗人球蛋白試劑由上海市血液生物公司提供。

1.4 方法

1.4.1 血型鑒定 分別對母親及新生兒進行ABO及Rh血型鑒定。

1.4.2 傳統(tǒng)試管法 離心分離患兒血標本紅細胞和血清，紅細胞用0.9%氯化鈉溶液洗3次后配成濃度為5%的懸液。取紅細胞懸液1滴加廣譜抗人球蛋白試劑2滴，離心，觀察直接抗人球蛋白試驗結果;取試管3支，分別標記 A、B、O，每管加入患兒血清和放散液2滴，按標記分別加入 A、B、O試劑紅細胞 1滴，37℃孵育1 h后，用0.9%氯化鈉溶液洗3次，加入抗人球蛋白試劑2滴，離心，觀察抗體游離試驗、抗體放散試驗結果。

1.4.3 微柱凝膠技術檢測法 在凝膠卡中加入患兒0.8%三洗紅細胞50 μl，離心，觀察直接抗人球蛋白試驗結果;在凝膠卡中加入患兒血清或紅細胞放散液50 μl，按標記分別加入 50 μl 0.8%A、B及O型試劑紅細胞懸液，37℃孵育15 min，離心10 min，觀察抗體游離試驗、抗體放散試驗結果。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計處理，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

62例患兒血標本，采用微柱凝膠技術檢出直接抗人球蛋白試驗陽性54例(87.1%)，抗體游離試驗陽性56例(90.3%)，抗體放散試驗陽性59例(95.2%);采用試管法檢出直接抗人球蛋白試驗陽性42例 (67.7%)，抗體游離試驗陽性48例 (77.4%)，抗體放散試驗陽性52例 (83.9%);兩種方法直接抗人球蛋白試驗陽性率、抗體游離試驗陽性率、抗體放散試驗陽性率比較，差異均有統(tǒng)計學意義 (χ2=6.64，P=0.01;χ2=3.86，P=0.04; χ2=4.21，P=0.04)。

3 討論

母嬰ABO血型不合所致新生兒溶血在 HDN 中占多數(shù)［3－4］，是新生兒高膽紅素血癥常見的病因。雖然多數(shù)新生兒ABO溶血病臨床表現(xiàn)較輕，預后較好，但仍有部分表現(xiàn)較為嚴重的病例［5］。其中高膽紅素血癥可導致神經(jīng)系統(tǒng)損害，嚴重時出現(xiàn)核黃疸甚至死亡。因此，早期診斷ABO血型不合新生兒溶血病，并積極治療，可以有效減少后遺癥的發(fā)生率，對新生兒溶血病的防治和優(yōu)生優(yōu)育均有重要的臨床意義。

HDN傳統(tǒng)的檢測方法是試管法，該法操作繁雜，靈敏度低，結果不易判斷，漏檢率高，易造成早期漏檢。目前，微柱凝膠技術作為一項免疫學檢測技術［6］，在HDN檢測診斷中已逐漸推廣應用［7］。該技術具有操作簡單，靈敏度高、重復性好，結果穩(wěn)定易判斷、技術易掌握等優(yōu)點，較傳統(tǒng)的試管法更能準確地檢測患兒血液中的免疫性IgG抗體和效價。本研究利用微柱凝膠技術和試管法對62例HDN的患兒血標本分別進行溶血三項試驗，檢測結果均高于張勇萍等［8］報道的結果。微柱凝膠檢測技術的靈敏度明顯高于試管法。

抗體放散試驗是新生兒溶血三項試驗中最敏感的試驗［9］，可直接反映IgG型抗A(B)抗體特異性致敏患兒紅細胞的狀況，是診斷新生兒溶血病的確診試驗［10］。從試驗結果可見2種檢測方法中抗體放散試驗陽性率最高，而直接抗人球蛋白試驗陽性率最低，這可能因剛出生的新生兒ABO抗原發(fā)育仍不完全，抗原位點少，不足以和抗人球蛋白產(chǎn)生明顯可見的凝集反應，而結合有足夠IgG抗體分子的年輕紅細胞又大部分已被溶解掉等造成。因此在對HDN的診斷中，除直接抗人球蛋白試驗外，還要結合抗體游離試驗和抗體放散試驗以及膽紅素的檢測結果進行綜合分析，以便提高檢測診斷的準確性。

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4 楊紹明，吳巧英，羅洪清，等.韶關地區(qū)新生兒溶血病與孕婦血清相關抗體的相關性分析［J］.中國實驗血液學雜志，2005，13(5):875－877.

5 Miqdad AM，Abdelbasit OB，Shaheed MM，et al.Intravenous immunoglobulin G(IVIG)therapy for significant hyperbilirubinemia in ABO hemolytic disease of the newborn ［J］.J Matern Fetal Neonatal Med，2004，16(3):163－166.

6 武峰，劉亞玲.微柱凝集技術在血型免疫學相關檢測中的應用進展［J］.臨床血液學雜志，2008，21(1):101－104.

7 Cate JC，Reilly N.Evaluation and implementation of thegel test for indirect antiglobulin testing in a communityhospital laboratory ［J］.Arch Pathol Lab Med，1999，123(8):693－694.

8 張勇萍，安寧，李娜，等.微柱凝膠法與試管法檢測新生兒溶血病免疫性抗體的比較［J］.臨床血液學雜志，2011，24(12):697－701.

9 柳愛華，儲穆庭.2537例孕婦ABO血型抗體效價檢測結果及分析 ［J］.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2011，38(1):49－51.

10 蔡興權，夏蘭，符小玲，等.259例新生兒溶血病的臨床分析 ［J］.臨床血液學雜志 (輸血與檢驗版)，2010，23(8):490－491.