龍 宇， 劉 琪

(1.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽421001;2.衡陽市中醫(yī)院藥劑科，湖南衡陽421001)

婦健安合劑是在中醫(yī)臨床驗方和現(xiàn)代藥理學(xué)研究基礎(chǔ)上，由白芍、黨參、敗醬草、萹蓄等8味中藥組成，具有健脾疏肝、祛濕止帶的功效.臨床主要用于治療腎虛、濕熱帶下，效果顯著.根據(jù)傳統(tǒng)用藥，為群藥用水共煎.為客觀地評價本制劑的提取工藝，我們以提取物浸膏得率以及君藥芍藥的有效成分芍藥苷作為評價指標(biāo)，對該方進行水提取工藝考察.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Aglient 1100型高效液相色譜儀，Aglient 1100色譜工作站，VWD紫外檢測器;光學(xué)讀數(shù)分析天平(型號:TG328A);RE52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);乙腈(色譜純，Tiada試劑廠);水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純.

1.2 試藥

芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110736-200423).

2 方法與結(jié)果

2.1 芍藥苷含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱:PhenomenexC18-ODS色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-水(18∶82);檢測波長:230 nm;流速:1.0 mL·min－1;柱溫:30℃;靈敏度:2AUFS.理論塔板數(shù)以芍藥苷計不低于3 500.照高效液相色譜法(《中國藥典》附錄ⅥD)測定.

2.1.2 對照品溶液的制備

取芍藥苷對照品適量，精密稱定為10.4 mg，置25 mL容量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再吸取1 mL稀釋液至10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得 41.6 μg·L－1的對照品液.

2.1.3 供試品溶液的制備與測定

精密量取提取液5 mL，置25 mL容量瓶中，加入甲醇適量超聲處理(200 W，40 kHz)10 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取適量溶液離心5 min，取上清液濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液.

芍藥苷對照品、缺白芍空白樣品與供試品色譜圖見圖1.供試品色譜中，在與對照品色譜圖相應(yīng)的位置上有一相同的色譜峰，而陰性對照液未見干擾.結(jié)果表明該檢測方法準(zhǔn)確可行.

圖1 HPLC色譜圖Fig.1 RP-HPLC chromatogram of Fu Jian'an Mixture

2.2 浸膏得率的測定

精密量取提取液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上濃縮至稠膏狀，于105℃干燥至恒重，計算浸膏得率.

2.3 提取工藝的優(yōu)選

2.3.1 提取溶媒的考察

取白芍、黨參、敗醬草、萹蓄等藥材，按處方比例加水及不同濃度的乙醇浸泡1.0 h，加熱回流提取三次，加溶媒為藥材的10倍量，提取時間為1.5 h.依次收集各種溶媒下提取液，準(zhǔn)確記錄提取液體積.按“2.1.3”項下制備供試品溶液并進行測定.結(jié)果見表1.芍藥苷浸出量(mg)=提取液中芍藥苷含量(mg·mL－1)×提取液體積(mL).

表1 不同提取溶媒實驗結(jié)果Tab.1 Experimental result of different extraction solvent

由表1可知，不同濃度乙醇作為溶媒進行提取，芍藥苷浸出量均較水提取時高.但是作為醫(yī)院制劑生產(chǎn)，水提取成本低且工藝簡單，因此選用水作為提取溶媒.

2.3.2 提取次數(shù)的考察

取白芍、黨參、敗醬草、萹蓄等藥材，按處方比例加水浸泡1.0 h，加熱回流提取三次，加水量分別為藥材的 10倍、8倍、8倍量，提取時間分別為1.5 h、1.0 h、0.5 h，分別收集各次提取液，準(zhǔn)確量取體積，備用.從上述三份提取液中各取適量，分別按上述方法測定浸膏得率與芍藥苷的含量.結(jié)果見表2.

表2 水提次數(shù)實驗結(jié)果Tab.2 Experimental result of water extraction times

由表2可知，第三次提取液中，芍藥苷浸出量與浸膏得率均比較低(分別占三次總浸出量的5.90%與11.97%).因此，白芍、黨參、敗醬草、萹蓄等藥材以水提2次為宜.

2.3.3 正交試驗優(yōu)選提取工藝條件

1)正交實驗設(shè)計.在預(yù)實驗的基礎(chǔ)上，確定主要影響因素，即浸泡時間，加水量，回流時間，各設(shè)三個水平，選用L9(34)正交表進行實驗，因素水平安排見表3.

表3 水提工藝優(yōu)選因素水平表Tab.3 The water extracting technology for optimal factor level table

2)實驗統(tǒng)計處理.采用SPASS12.0統(tǒng)計軟件，將上述實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果見表4～表6.

表4 水提工藝優(yōu)選正交試驗設(shè)計表及結(jié)果Tab.4 Extraction process optimization orthogonal design table and results

表5 浸膏得率方差分析表Tab.5 Extract yield table of variance analysis

表6 芍藥苷浸出量方差分析表Tab.6 Paeoniflorin leaching volume table of variance analysis

由表5可知，各因素對浸膏得率均無顯著影響.由表6可知，B因素對芍藥苷浸出量有顯著的影響，A、C兩因素對芍藥苷浸出量無顯著的影響，根據(jù)制劑大生產(chǎn)的實際需要，擬定為A1B3C1.由于選擇方案未在正交試驗表中，需進行工藝的驗證實驗.以A1B3C1重復(fù)進行試驗(n=3)，浸膏得率為14.78 mg.芍藥苷浸出量為 95.49 mg，與正交試驗表中浸膏得率和芍藥苷浸出量最高的第9號方案A3B3C2相差不大，故確定水提工藝的最優(yōu)條件為A1B3C1，即提取時加水浸泡0.5 h，提取2次，加水量分別為藥材的10倍、8倍，提取時間分別為1.0 h、0.5 h.

3 討論

1)測定波長的選擇.取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成對照品溶液，置紫外分光光度計記錄其紫外吸收光譜，結(jié)果顯示，芍藥苷在230 nm波長處有最大吸收，故選擇230作為測定波長，與中國藥典2010年版一部中白芍[1]的檢測方法一致.

2)筆者根據(jù)文獻[2～4]采用流動相乙腈∶水=14∶86，發(fā)現(xiàn)出峰時間較長，增大乙腈比例，按照本文中流動相乙腈∶水=18∶82，出峰時間短，峰型很好，且基線平穩(wěn)，陰性無干擾.

3)在供試品的制備中，考慮到提取液直接稀釋未能充分溶解，采用超聲處理.并對提取時間進行考察，以5 min，10 min，15 min進行對比，超聲 10 min即能提取完全.

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 吳巧鳳，嚴(yán)云良，樓小紅.白芍中芍藥苷的提取工藝研究[J].中成藥，2006，28(9):1379-1380.

[3] 鮑邢杰，宿樹蘭.對《中國藥典》2010版Ⅰ部中白芍中芍藥苷含量測定方法的探討[J].時珍國醫(yī)國藥，2012，23(5):1309-1310.

[4] 滕 宇，李正言，李鐵銘，等.HPLC法測定抗感片中芍藥苷的含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2008，10(4):140-141.