曾 超，宋玉蘭，姚運紅

(1.廣東醫(yī)學院病理學教研室，廣東 東莞 523808；2.廣東藥學院附屬第一醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510080)

乙酰肝素酶-2在結腸癌中的表達及其臨床意義

曾 超1，宋玉蘭2，姚運紅1

(1.廣東醫(yī)學院病理學教研室，廣東 東莞 523808；2.廣東藥學院附屬第一醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510080)

目的研究乙酰肝素酶-2(Hpa-2)在結腸癌組織中的表達及其與各臨床病理因素的相關性。方法采用免疫組化檢測結腸癌組織和癌旁正常結腸組織中Hpa-2蛋白表達情況。結果結腸癌組織中Hpa-2蛋白表達陽性率高于癌旁組織，差異具有統計學意義(P＜0.05)。結腸癌臨床分期越高，陽性表達率越高；分化程度越高，陽性表達率越低；Hpa-2表達在有淋巴結轉移組中明顯高于無淋巴結轉移組(P均＜0.05)。結論Hpa-2在結腸癌的進展中起著重要作用，可作為判斷大腸癌惡性程度的指標。

結腸癌；乙酰肝素酶-2；免疫組化

乙酰肝素酶(Hpa)是一種內源性β-葡萄糖醛酸酯酶，識別并且切割硫酸乙酰肝素蛋白多糖的側鏈，硫酸乙酰肝素被切割和降解為10個左右糖單位大小的短鏈。因此，Hpa不僅可以破壞細胞外基質和基底膜，降低細胞間質屏障功能，還可以促進腫瘤細胞侵入基質和血管壁，從而在腫瘤轉移過程中起重要作用[1]。Hpa是目前發(fā)現的唯一的作用于細胞外基質多聚糖成分的酶，可以認為它是引起腫瘤轉移關鍵酶，同時也是一個抗腫瘤轉移的新靶點。人類Hpa有Hpa-l、Hpa-2兩個亞型，目前人們的研究熱點都集中在Hpa-l，已經證實Hpa-l高表達與多種惡性腫瘤的侵襲和轉移密切相關[2-5]，而對HPa-2的研究報道較少?？紤]到人類Hpa-l和Hpa-2的氨基酸序列約有35%的一致性，因此，Hpa-2可能在惡性腫瘤的進展過程中起重要作用。本實驗旨在探討Hpa-2的表達與結腸癌發(fā)生發(fā)展的關系，闡明Hpa-2在結腸癌進展過程中的作用，以期尋找結腸癌診斷及治療的新靶點。

1 資料與方法

1.1 病例資料 收集廣東藥學院附屬第一醫(yī)院2002年2月至2004年2月的手術存檔石蠟標本40例，男性26例，女性14例；年齡48～76歲，中位年齡62歲。所有病例都經病理醫(yī)生證實為腺癌，其中低分化及未分化腺癌10例，高分化及中分化腺癌30例；有淋巴結轉移19例，無淋巴結轉移21例；癌組織侵及黏膜及黏膜下層的18例，侵及肌層和漿膜層的22例；TNM分期標準分為Ⅰ/Ⅱ期21例，Ⅲ/Ⅳ期19例?；颊咝g前均未行任何治療。

1.2 主要試劑 免疫組化染色試劑盒購自邁新生物公司，實驗采用S-P免疫組化法，兔抗人多克隆抗體Hpa-2購自Santa Cruz(sc-30123)。實驗步驟按試劑盒說明書進行。

1.3 免疫組化染色結果判定 Hpa-2表達陽性染色定位于腫瘤細胞胞漿。以陽性細胞比例和細胞染色強度的乘積判定腫瘤細胞中Hpa-2評分。腫瘤細胞染色強度評分標準：無著色，0分；淡黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分；陽性細胞比例評分標準：陽性細胞數＜6%，6%～24%，25%～49%，50%～74%及≥75%的病例，分別判定評分為0、1、2、3、4。用強度和陽性細胞數的評分的乘積進行最終評分：＜2分為陰性表達，≥2分為陽性表達。

1.4 統計學處理 應用SPSS11.0統計軟件分析，對所獲得數據進行卡方檢驗和Fisher確切概率法檢測，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 結腸癌組織與癌旁正常結腸黏膜組織中Hpa-2的表達情況檢測 免疫組化分析結果表明：癌旁正常結腸黏膜中Hpa-2蛋白陽性表達率為37.50%(15/40)，在結腸癌組織中Hpa-2蛋白陽性表達率為72.50%(29/40)，兩者比較差異有統計學意義(P＜0.05)。Hpa-2在癌旁結腸黏膜組織中表達陽性率低(圖1)，Hpa-2在不同分化程度的結腸癌組織中均有陽性表達，其表達主要定位于腫瘤細胞胞漿中(圖2～圖4)，陽性染色腫瘤細胞呈彌漫性分布于腫瘤間質之中。

圖1 Hpa-2在癌旁正常結腸黏膜組織中陰性表達(200×)；圖2 Hpa-2在高分化結腸癌組織中的表達(200×)；圖3 Hpa-2在中分化結腸癌組織中的表達(200×)；圖4 Hpa-2在低分化結腸癌組織中的表達(200×)

2.2 Hpa-2的表達與結腸癌各臨床病理因素之間的關系 Hpa-2表達與結腸癌臨床病理因素之間的關系詳見表1。統計結果表明，Hpa-2表達與腫瘤細胞浸潤深度、TNM分期和腫瘤有無淋巴結轉移有關(P＜0.05)，而與患者的性別、年齡、腫瘤分化程度等臨床病理因素之間無明顯相關性(P＞0.05)。

表1 結腸癌組織中Hpa-2蛋白表達與各臨床病理因素的關系（例）

3 討論

結腸癌是消化系統最為常見的惡性腫瘤之一。研究表明，隨著人民生活水平質量的不斷提高，飲食結構發(fā)生變化，結腸癌發(fā)病率和病死率也呈逐年上升趨勢。與大多數其他惡性腫瘤一樣，侵襲和轉移是結腸癌的重要生物學特征，也是嚴重影響患者預后的主要因素。研究發(fā)現，Hpa-1在腫瘤的侵襲和轉移中發(fā)揮重要作用，Hpa-1可以破壞、改變基底膜和細胞外基質的結構，從而突破侵襲和轉移的屏障，加速腫瘤細胞的侵襲和轉移；Hpa-1還可通過調控VEGF的表達，誘導腫瘤血管生成。值得注意的是，作為Hpa家族的另一重要成員[6]，與Hpa-1具有高度同源性的Hpa-2在結腸癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用尚未見報道。

本實驗發(fā)現Hpa-2蛋白高表達于在結腸癌癌細胞胞漿中，且其陽性表達率明顯高于癌旁正常結腸黏膜組織，提示Hpa-2蛋白表達在結腸癌的發(fā)生中發(fā)揮著重要作用。Hpa-2蛋白在黏膜及黏膜下層中陽性表達率顯著低于在肌層和漿膜層中的表達，提示Hpa-2可能在促進癌細胞的浸潤和侵襲能力等方面起著重要作用。Hpa-2蛋白在Ⅲ/Ⅳ期中的表達明顯高于Ⅰ/Ⅱ，表明Hpa-2與結腸癌的臨床進展具有顯著相關性。Hpa-2蛋白在高-中與低-未不同分化程度結腸癌組織中的表達差異無統計學意義，揭示Hpa蛋白表達可能與結腸癌分化程度無關。Hpa-2蛋白表達在有淋巴結轉移組明顯高于無淋巴結轉移組，提示Hpa-2與結腸癌組織的淋巴結轉移密切相關。

總之，實驗結果表明，Hpa-2蛋白在結腸癌組織中的表達不僅可以促進結腸癌的進展，而且嚴重影響患者的預后。本研究為結腸癌的基因治療提供了新的分子靶點和實驗依據，但Hpa-2促進結腸癌侵襲轉移的具體分子機制需進一步深入研究。

[1]Watanabe M,Aoki Y,Kase H,et a1.Heparanase expression and angiogenesis in endometrialesncer[J].Gynecol Obstet Invest,2003,56 (2):77-82.

[2]Maxhimer JB,Quiros RM,Stewart R,et a1.Heparanase-1 expression is associated with the metastatic potentialof breastcancer[J]. Surgery,2002,132(2):326-333．

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[4]Friedmann Y,Vlodavsky I,Aingmo HT,et a1.Expression of heparanase in normol dysplastic and neoplastichuman colon mucosa and stroma Evidenceforitsroleinclonictumoirgenesis[J].Am J Pathol, 2000,157(4):1167-1175.

[5]Kin AM,Xu X,Hollinger EF,et a1.Human heparanase gene expression in adenocarcinoma[J].J Gastrointest Surg,2002,6(2):167-172. [6]Mekeie E,Tyson K,Stamps A,et al.Cloing and expression Profiling of HPa-2 a novel mammalian heParanase family member[J]. Biochem Biophys Res Commun,2000,276(30):1170-1177.

Expression of Heparanase-2 in colorectal carcinoma and its clinical significance.

ZENG Chao1,SONG Yu-lan2, YAO Yun-hong1.
1.Department of Pathology,Guangdong Medical College,Guangzhou 523808,Guangdong,CHINA;2. Department of Pathology,the First Affiliated Hospital of Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510080, Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the expression of Heparanase-2(Hpa-2)protein in colorectal carcinoma and its relation to clinicopathologic features.MethodsThe Hpa-2 protein levels were detected in 40 patients of colorectal carcinoma by immunohistochemistry.ResultsThe positive expression rates of Hpa-2 in colorectal carcinoma were significantly higher than those in adjacent normal tissues(P＜0.05).The positive expression of Hpa-2 was associated with TNM stage and lymphnode metastasis.ConclusionHpa-2 may play a role in the carcinogenesis of colorectla carcinoma.

Colorectal carcinoma;Hpa-2;Immunohistochemistry

R735.3+5

A

1003—6350（2012）20—003—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.20.002

2012-03-27)

曾 超(1979—)，男，湖南省邵東縣人，講師，博士，研究方向：結腸癌病因和發(fā)病機制。