侯小濤，趙超超，鄧家剛，*

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧530021；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧 530001；3.廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530001）

甘蔗葉多糖除蛋白工藝研究

侯小濤1，2，3，趙超超2，鄧家剛1，2，3，*

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧530021；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧 530001；3.廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530001）

目的：篩選甘蔗葉多糖除蛋白的最佳工藝。方法：以蛋白質(zhì)清除率、多糖保留率為指標(biāo)，比較Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑法、Sevage法、三氯乙酸法（TCA法）、三氯乙酸-Sevage法清除甘蔗葉多糖中蛋白質(zhì)的效果，并通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化出最佳工藝。結(jié)果：Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑能有效純化甘蔗葉多糖，且除蛋白最佳工藝為澄清劑用量為6%/3%（B/A），溫度為30℃，多糖溶液濃度為3%，時(shí)間為1h/1h。結(jié)論：Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑能有效清除甘蔗葉多糖中的蛋白質(zhì)，且澄清效果與溫度和澄清劑用量有關(guān)。

甘蔗葉，天然澄清劑，多糖，除蛋白

Abstract：Objective：To select deproteinization-technology of polysaccharides in sugarcane leaf.Methods：These different ways to removing protein from polysaccharides in sugarcane leaf contain natural clarifying agents，Sevage method，TCA and TCA-Sevage method，and that were compared with the clearance rate of protein and the polysaccharide retention as indexes，and the technology was optimized by orthogonal experiment.Results：TypeⅡZTC1+1 natural clarifying agents could effectively purify sugarcane leaf polysaccharides，and the optimum condition of deproteinization with typeⅡZTC1+1 natural clarifying agents were as follows：the adding amount of natural clarifying agents（i.e B and A） were 6%and 3%respectively，the clarifying temperature was 30℃，concentration of polysaccharides was 3%（m/v），the clarifying time（i.e B and A） were 1h and 1h respectively.Conclusion：TypeⅡZTC1+1 natural clarifying agents could effectively remove protein of sugarcane leaf polysaccharides，which was relatived to the amount of clarifying agents and temprature.

Key words：sugarcane leaf；natural clarifying agents；polysaccharides；deproteinization

甘蔗葉是禾本科植物甘蔗Saccharum sinensis Roxb.的葉。甘蔗廣泛種植于熱帶、亞熱帶地區(qū)，全世界有100多個(gè)國(guó)家種植甘蔗，中國(guó)蔗區(qū)主要分布在廣西、廣東等地。甘蔗葉作為甘蔗豐收后的副產(chǎn)品，每年產(chǎn)量頗高，卻未得到充分利用，除少部分作為動(dòng)物飼料外，大部分被蔗農(nóng)就地焚燒，造成資源浪費(fèi)、污染環(huán)境。另外，中藥資源面臨著嚴(yán)峻的可持續(xù)發(fā)展問(wèn)題，對(duì)這樣既有藥用價(jià)值同時(shí)又是農(nóng)作物的資源進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其新用途，對(duì)于資源保護(hù)和開發(fā)具有重要意義。據(jù)報(bào)道，甘蔗葉含有大量葉綠素、氨基酸、多糖和黃酮等物質(zhì)，其嫩葉和蔗梢含過(guò)氧化物酶等物質(zhì)，具有抗氧化、抗菌、降血糖、抗腫瘤[1-6]等藥理作用。甘蔗葉多糖為甘蔗葉的有效成分，但世界范圍內(nèi)對(duì)其研究極少，僅見(jiàn)一般提取工藝研究的報(bào)道[2]。目前多糖的提取多采用水提醇沉法，水提液經(jīng)醇沉處理時(shí)，沉淀中除含有多糖類物質(zhì)，同時(shí)還含蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，影響多糖的純度，因此有待進(jìn)一步純化，除去多糖中蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑是從食品中提取的天然高分子物質(zhì)，是替代聚丙烯酰胺、聚合鋁等人工合成絮凝劑的理想品種。它主要用于除去鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)、樹膠、蠟質(zhì)等膠體不穩(wěn)定成分，而中藥有效成分如黃酮、生物堿、皂苷類、苷類、萜類、多糖、氨基酸、多肽、礦物質(zhì)等小分子物質(zhì)不受影響[7]。本實(shí)驗(yàn)以多糖保留率和蛋白質(zhì)清除率為指標(biāo)，比較研究天然澄清劑法、Sevage法、三氯乙酸法（TCA法）、三氯乙酸-Sevage法等4種不同除蛋白方法，并采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑除蛋白的工藝，期望制備出高純度的甘蔗葉多糖，為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

甘蔗葉（新臺(tái)糖22號(hào)） 采集于廣西甘蔗研究所，經(jīng)該所許樹寧高級(jí)農(nóng)藝師鑒定為禾本科甘蔗屬植物甘蔗（Saccharum sinensis Roxb.）的葉；Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑 由A劑和B劑組成，從食品中提取的天然高分子物質(zhì)，天津振天成科技有限公司；D-無(wú)水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品 中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110833-200503；牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 Sigma；考馬斯亮藍(lán)G-250 上海源葉生物科技有限公司；苯酚、濃硫酸、三氯乙酸（TCA）、氯仿、正丁醇 均為國(guó)產(chǎn)分析純。

UV-160A紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 日本島津公司；SartoriusBP211D電子天平 北京賽多利斯天平有限公司；HHS4數(shù)顯恒溫水浴鍋 金壇市醫(yī)療儀器廠；LDZ4-1.2離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)廠；B3500SMT超聲波清洗器 必能信超聲上海有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 甘蔗葉多糖的制備 取甘蔗葉粗粉335kg，置于1t提取罐中，加30倍量純水于100℃浸提3次，每次2h，過(guò)濾，合并濾液，并濃縮至飽和狀態(tài)，加無(wú)水乙醇至濃度達(dá)到80%，靜置12h，離心，沉淀依次用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚反復(fù)洗滌數(shù)次，抽濾，真空干燥后得甘蔗葉粗多糖粉末。

1.2.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 稱取干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品25.30mg，置于25mL容量瓶中，加蒸餾水溶解、稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1.012mg/mL的母液。精密吸取母液5.0mL置100mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度作為貯備液，吸取貯備液2.0mL，苯酚-硫酸法[8]顯色，在400～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描光譜，確定λmax。然后精密吸取貯備液1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0mL分別置于具塞試管中，加蒸餾水補(bǔ)至2.0mL，苯酚-硫酸法顯色，另以蒸餾水2.0mL同上操作作為空白對(duì)照，于λmax處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程。

1.2.3 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 稱取干燥至恒重的牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品12.44mg，置100mL容量瓶中，加蒸餾水溶解，稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度為124.4μg/mL的貯備液。吸取貯備液1.0mL，根據(jù)考馬斯亮藍(lán)G-250法[9]（考馬斯亮藍(lán)試劑配制參照李如亮[10]的方法），在400～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描光譜，確定λmax。然后吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL貯備液，加蒸餾水補(bǔ)至1.0mL，加入考馬斯亮藍(lán)G-250試劑5mL，搖勻，以蒸餾水為空白，10min后于λmax處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程。

1.2.4 色素表征吸收[11]取甘蔗葉多糖配成適宜濃度的溶液，在400～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，確定色素表征吸收。

1.2.5 除蛋白方法比較

1.2.5.1 多糖溶液的配制 稱取甘蔗葉粗多糖10g，加入200mL蒸餾水超聲溶解，離心，配制質(zhì)量濃度為5%的甘蔗葉多糖溶液，備用。

1.2.5.2 澄清劑的配制 根據(jù)Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑說(shuō)明書所示，配制方法如下：

A組分：稱取澄清劑A組分1g，用10mL蒸餾水溶解，并攪拌成糊狀，再加入剩余90mL蒸餾水，不斷攪拌，使其充分溶解，溶脹24h，配成1%黏膠液（用前搖勻）100mL，即得。

B組分：先配制1%醋酸（v/v），稱取澄清劑B組分1g，用10mL 1%醋酸溶解，并攪拌成糊狀，加入余下的90mL 1%醋酸，充分?jǐn)嚢枋蛊淙芙猓苊?4h，配成1%黏膠液（用前搖勻）100mL，即得。

1.2.5.3 Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑法 取5%甘蔗葉多糖溶液，按澄清劑用量（B/A）為8%/4%，在60℃下，保溫2h/1h（每隔半小時(shí)攪勻一次），過(guò)濾，定容，分別測(cè)定多糖、蛋白質(zhì)含量。

1.2.5.4 TCA法 取5%甘蔗葉多糖溶液，按體積比為1∶1的比例，加入10%三氯乙酸溶液，充分振搖，置于4℃冰箱，靜置2h，離心，上清液用5%NaOH中和，定容，分別測(cè)定多糖、蛋白質(zhì)含量。

1.2.5.5 Sevage法 取5%甘蔗葉多糖溶液，按照多糖溶液∶氯仿∶正丁醇=25∶5∶1（v∶v∶v）的比例，先后加入氯仿、正丁醇，劇烈振搖15min，待其靜置分層，得上層水層，同上操作，重復(fù)6次實(shí)驗(yàn)，離心，取上清液定容，分別測(cè)定多糖、蛋白質(zhì)含量。

1.2.5.6 TCA Sevage法 取5%甘蔗葉多糖溶液，先按照體積比為1∶1的比例，加入10%三氯乙酸溶液，充分振搖，置于4℃冰箱，靜置2h，離心，上清液用5%NaOH中和，然后按多糖溶液∶氯仿∶正丁醇=25∶5∶1（v∶v∶v）的比例，先后加入氯仿、正丁醇，劇烈振搖15min，離心，取上清液定容，分別測(cè)定多糖、蛋白質(zhì)含量。

1.2.6 單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.6.1 澄清劑用量對(duì)除蛋白效果的影響 固定多糖溶液濃度為5%，溫度為60℃，時(shí)間2/1（B/A，h/h），分別加入澄清劑，用量（B/A）為4%/2%、6%/3%、8%/4%、10%/5%，進(jìn)行澄清處理。

1.2.6.2 溫度對(duì)除蛋白效果的影響 固定多糖溶液濃度為5%，澄清劑用量（B/A）為6%/3%，時(shí)間2/1（B/A，h/h），分別在溫度為20、40、60、80℃條件下進(jìn)行澄清處理。

1.2.6.3 多糖濃度對(duì)除蛋白效果的影響 固定溫度為40℃，澄清劑用量（B/A）為6%/3%，時(shí)間2/1（B/A，h/h），分別取濃度為2%、4%、6%、8%、10%的甘蔗葉多糖溶液進(jìn)行澄清處理。

1.2.6.4 時(shí)間對(duì)除蛋白效果的影響 固定多糖濃度為2%，澄清劑用量（B/A）為6%/3%，溫度為40℃，在保溫時(shí)間分別為0.5/0.5、0.5/1、1/1、2/1、2/2（B/A，h/h）的條件下進(jìn)行澄清處理。

1.2.7 樣品溶液測(cè)定 精密吸取除蛋白前后的多糖溶液，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線下方法分別測(cè)定多糖、蛋白質(zhì)含量和色素A400。

1.2.8 指標(biāo)的確定 以多糖保留率、蛋白質(zhì)清除率和脫色率為考察指標(biāo)，兼顧多糖保留率（權(quán)值為0.4）、蛋白質(zhì)清除率（權(quán)值為0.5）和脫色率（權(quán)值為0.1），采用加權(quán)法進(jìn)行綜合評(píng)分。多糖保留率（%）=M2/M1×100；蛋白質(zhì)清除率（%）=（N1-N2）/N1×100；脫色率（%）=（A1-A2）/A1×100；綜合評(píng)分=0.1×脫色率+0.4×多糖保留率+0.5×蛋白質(zhì)清除率（式中，M1、M2分別為處理前后的多糖含量；N1、N2分別為處理前后的蛋白質(zhì)的含量；A1、A2分別為處理前后色素A400）。

1.2.9 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表 選擇澄清劑用量、溫度、多糖濃度、時(shí)間四個(gè)因素，按L9（34）安排正交實(shí)驗(yàn)，因素水平表見(jiàn)表1。

表1 因素水平表Table 1 Factors and levels table

1.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

為考察工藝的穩(wěn)定性，配制質(zhì)量濃度為3%的多糖溶液三份，根據(jù)最佳工藝條件處理后，分別測(cè)定的多糖、蛋白質(zhì)含量和色素表征吸收，計(jì)算出多糖保留率、蛋白質(zhì)清除率、脫色率及RSD。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

吸取葡萄糖貯備液，顯色后進(jìn)行光譜掃描，如圖1所示，確定λmax為487nm。以葡萄糖濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度A487為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A487=0.0133C+0.0136，r=0.9956，表明葡萄糖濃度在25.30～50.60μg/mL范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系（見(jiàn)圖2）。

圖1 葡萄糖掃描光譜圖Fig.1 Glucose by visible wavelength

圖2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 The standard curve of glucose

2.2 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線

吸取牛血清白蛋白貯備液，顯色后進(jìn)行光譜掃描，如圖3所示，確定λmax為593nm。以牛血清白蛋白濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度A593為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=0.0055C+0.0396，r=0.9992，表明牛血清白蛋白濃度在24.88～124.4μg/mL范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系（見(jiàn)圖4）。

圖3 蛋白質(zhì)掃描光譜圖Fig.3 Protein by visible wavelength

圖4 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 The standard curve of protein

2.3 色素表征吸收

將多糖溶液在400～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，如圖5所示，由此選擇400nm處吸光值（A400）表征色素含量。

圖5 多糖溶液掃描光譜圖Fig.5 Polysaccharides solution by visible wavelength

2.4 除蛋白效果比較

如表2所示，甘蔗葉多糖采用Sevage法除蛋白，反復(fù)處理6次后多糖損失相對(duì)較少，蛋白質(zhì)的清除率較高，該法條件溫和，在避免多糖降解方面有較好效果，但該法效率低，且需消耗大量有毒有機(jī)試劑，易殘留；三氯乙酸法除蛋白效果明顯，與Sevage法相比，多糖損失相差不大，但由于其酸性較強(qiáng)，容易導(dǎo)致多糖的降解；天然澄清劑在除蛋白過(guò)程中優(yōu)勢(shì)明顯，多糖損失少，蛋白質(zhì)清除率相對(duì)較高，且經(jīng)過(guò)澄清處理后的多糖溶液具有顏色淺、易過(guò)濾、無(wú)殘留的特點(diǎn)。故本實(shí)驗(yàn)選用Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑用于去除甘蔗葉多糖中蛋白質(zhì)，并通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化其除蛋白工藝。

表2 除蛋白效果比較（±s，n=3）Table 2 The comparison of deproteinization effec（t±s，n=3）

表2 除蛋白效果比較（±s，n=3）Table 2 The comparison of deproteinization effec（t±s，n=3）

指標(biāo) Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑法 TCA法 Sevage法 TCA-Sevage法除蛋白次數(shù) 1 1 6 1多糖保留率（%） 95.77±0.11 71.80±0.05 77.27±0.15 92.06±0.14蛋白質(zhì)清除率（%） 56.92±0.15 59.01±0.11 43.06±0.11 17.67±0.12

2.5 除蛋白單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5.1 澄清劑用量對(duì)除蛋白效果的影響 如圖6所示，隨著澄清劑用量的增加，除蛋白效果呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，說(shuō)明澄清劑用量并非越大越好，可能是澄清劑體系內(nèi)高分子與蛋白質(zhì)結(jié)合已經(jīng)達(dá)到飽和，剩余澄清劑產(chǎn)生的絮凝物吸附作用使多糖損失增加。

圖6 澄清劑用量對(duì)除蛋白效果的影響Fig.6 Effect of the amount of clarifying agents on deproteinization effect

2.5.2 溫度對(duì)除蛋白效果的影響 如圖7所示，隨著溫度的升高，澄清劑除蛋白效果趨勢(shì)先升后降，可能是因?yàn)闇囟鹊?，澄清劑體系內(nèi)粒子熱運(yùn)動(dòng)不劇烈，絮凝作用不充分，效果差；溫度過(guò)高，澄清劑體系內(nèi)高分子活性受限制，影響絮凝作用。

圖7 溫度對(duì)除蛋白效果的影響Fig.7 Effect of temperature on deproteinization effect

2.5.3 多糖濃度對(duì)除蛋白效果的影響 從圖8可以看出，隨著多糖濃度增加，澄清劑除蛋白效果呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，可能是由于多糖濃度過(guò)大，使得澄清劑在藥液中分散不均勻，且濃的藥液在澄清時(shí)所產(chǎn)生的大量絮凝物可能會(huì)夾雜目標(biāo)成分，從而影響有效成分含量。

2.5.4 時(shí)間對(duì)除蛋白效果的影響 從圖9可以得知，隨著澄清時(shí)間延長(zhǎng)，綜合評(píng)分并沒(méi)有顯著上升，且基本保持在75%以上，待2h后有所下降，可能是由于澄清劑產(chǎn)生的絮凝物長(zhǎng)時(shí)間吸附作用，影響澄清效果。根據(jù)澄清劑說(shuō)明書所示，加入澄清劑后保溫1～2h即可。

圖8 多糖濃度對(duì)除蛋白效果的影響Fig.8 Effect of polysaccharides concentration on deproteinization effect

圖9 時(shí)間對(duì)除蛋白效果的影響Fig.9 Effect of time on deproteinization effect

2.6 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

由表3可知，各因素對(duì)脫色率和多糖保留率的影響順序?yàn)椋築＞A＞C＞D；對(duì)蛋白質(zhì)清除率的影響順序?yàn)椋築＞C＞A＞D。

由表4可知，以多糖保留率為指標(biāo)，溫度對(duì)多糖保留率有顯著影響，澄清劑用量有一定影響，其他因素幾乎沒(méi)有影響；以脫色率和蛋白質(zhì)清除率為指標(biāo)，溫度對(duì)溶液澄清度和蛋白質(zhì)清除率都有顯著影響，其他因素幾乎沒(méi)有影響。溫度是具有顯著影響的因素，故選擇反應(yīng)溫度為30℃；澄清劑用量是有一定影響的因素，根據(jù)直觀分析結(jié)果，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究目的，選擇澄清劑用量為6%/3%；多糖濃度和時(shí)間是幾乎沒(méi)有影響的因素，以綜合評(píng)分為指標(biāo)，根據(jù)極差分析結(jié)果，選擇多糖濃度為3%；從節(jié)約能源、提高效率的角度出發(fā)，選擇處理時(shí)間為1/1（h/h）；故篩選出最佳工藝：配制質(zhì)量濃度為3%的多糖溶液，在溫度為30℃、澄清劑用量為6%/3%的條件下，加入B組分加熱1h，然后加入A組分加熱1h。

2.7 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示，在該工藝條件下，各指標(biāo)RSD均小于3%，說(shuō)明該工藝穩(wěn)定、可行。

3 結(jié)論

比較幾種脫蛋白方法可知，Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑清除蛋白效果最佳，且多糖損失少、色澤淺，蛋白質(zhì)清除率較高，且經(jīng)過(guò)處理后的多糖溶液清澈透亮、色澤淺、易過(guò)濾、無(wú)異味。采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化除蛋白工藝為澄清劑用量為6%/3%（B/A），溫度為30℃，多糖溶液濃度為3%，時(shí)間為1/1（h/h）。在該工藝條件下，多糖保留率平均為88.38%，蛋白質(zhì)清除率平均為71.21%，脫色率平均為58.30%，綜合評(píng)分平均為76.79%，RSD均小于3%，說(shuō)明該工藝穩(wěn)定、可行。可見(jiàn)，Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑能有效純化甘蔗葉多糖。

表3 L（934）正交試驗(yàn)結(jié)果（±s，n=3）Table 3Results of L（934）orthogonal test（±s，n=3）

表3 L（934）正交試驗(yàn)結(jié)果（±s，n=3）Table 3Results of L（934）orthogonal test（±s，n=3）

實(shí)驗(yàn)號(hào) A B C D 脫色率（%） 多糖保留率（%） 蛋白質(zhì)清除率（%） 綜合評(píng)分（%）1 1 1 1 1 51.33±0.02 90.77±0.18 61.52±0.09 72.20±0.09 2 1 2 2 2 53.01±0.04 84.88±0.15 66.91±0.19 72.71±0.04 3 1 3 3 3 49.34±0.02 89.29±0.12 59.82±0.03 70.56±0.06 4 3 57.34±0.02 89.11±0.13 68.81±0.04 75.78±0.04 5 2 2 3 1 54.98±0.02 84.53±0.14 65.86±0.06 72.24±0.09 2 1 2 6 2 59.34±0.08 88.12±0.15 69.45±0.08 75.91±0.09 7 3 1 3 2 53.30±0.02 83.63±0.13 62.56±0.17 70.06±0.05 8 3 2 1 3 65.54±0.07 82.65±0.12 66.98±0.10 73.10±0.05 2 3 1 9 3 3 2 1 61.75±0.02 81.41±0.16 70.92±0.15 74.20±0.09 K1 153.68 284.88 176.21 168.06 K2 171.66 173.53 172.10 165.65 K3 180.59 170.43 157.62 172.22 R 26.91 114.45 18.59 6.57 K′1 264.94 441.42 261.54 256.71 K′2 261.76 252.06 255.40 256.63 K′3 247.69 258.82 257.45 261.05 R′ 17.25 189.36 6.14 4.42 K″1 188.25 328.28 197.95 198.30 K″2 204.12 199.75 206.64 198.92 K″3 200.46 200.19 188.24 195.61 R″ 15.87 128.53 18.40 3.31 K?1 215.47 369.19 221.21 218.64 K?2 223.93 218.05 222.69 218.68 K?3 217.36 220.67 212.86 219.44 R? 8.46 151.14 9.83 0.80

表4 方差分析Table 4 Analysis of variance

在純化工藝中，溫度對(duì)澄清劑有顯著影響，可能是溫度對(duì)體系內(nèi)粒子熱運(yùn)動(dòng)、高分子生物活性有影響[12]，從而影響其絮凝作用。澄清劑用量對(duì)除雜效果有一定影響，一定范圍內(nèi)澄清劑用量越大，溶液越澄清，蛋白質(zhì)含量越低，但是多糖也會(huì)相應(yīng)減少，故需要合理選擇澄清劑的用量。有關(guān)多指標(biāo)優(yōu)選Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑用于甘蔗葉多糖純化工藝研究還未見(jiàn)報(bào)道，因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)絮凝技術(shù)應(yīng)用于甘蔗葉多糖的純化有一定指導(dǎo)意義，同時(shí)為制備高純度甘蔗葉多糖提供技術(shù)支持。

表5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 5 Results of process verification

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Study on deproteinization-technology of polysaccharides in sugarcane leaf

HOU Xiao-tao1，2，3，ZHAO Chao-chao2，DENG Jia-gang1，2，3，*
（1.School of Pharmacy，Guangxi Medical University，Nanning 530021，China；2.School of Pharmacy，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China；3.Guangxi Key Laboratory of Pharmacodynamic Studies of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530001，China）

TS201.1

B

1002-0306（2012）20-0240-06

2012-04-24 *通訊聯(lián)系人

侯小濤（1969-），女，博士，教授，主要從事中藥活性成分及質(zhì)量控制方面的研究。

廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科技專項(xiàng)（GZKZ09-9）；廣西科技廳技術(shù)研究與開發(fā)項(xiàng)目（桂科攻10124008-11）。