楊 娟 ，張莉蓉

1鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，鄭州 450001；2鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，鄭州 450001

延胡索具有活血、行氣、止痛的作用，主治氣滯血瘀等證[1]。延胡索乙素是從罌粟科植物延胡索中提取的20余種活性生物堿之一[2]。隨著研究的不斷深入，對(duì)該藥的藥理作用也不斷有新的認(rèn)識(shí)。由于其良好的鎮(zhèn)痛[3]、抗腦缺血[4]、抗心律失常[5]、抗心肌缺血[6]等作用，長(zhǎng)期以來(lái)一直廣泛應(yīng)用于臨床。本文重點(diǎn)研究延胡索乙素的抗血栓作用。

1 材 料

1.1 藥物與試劑

阿司匹林泡騰片（阿斯利康制藥有限公司，批號(hào):1004017）；延胡索乙素（江蘇省南京市藥材公司，純度＞95%）；注射用生理鹽水（鄭州永和藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào):090528）；烏拉坦（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào):080411）；枸櫞酸鈉（北京化工廠，批號(hào):070821）；凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分凝血酶時(shí)間（APTT）測(cè)定試劑盒（南京建成生物技術(shù)研究所，批號(hào):111208）。

1.2 儀器

DS-671分析天平（日本寺岡）；TG 16-WS高速離心機(jī)（南賽特儀器有限公司）。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，雌雄各半，體重200～250 g，購(gòu)自鄭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK（豫）2005-0001。

2 方 法

2.1 大鼠結(jié)扎下腔靜脈致成血栓模型

SD大鼠隨機(jī)分為5組空白對(duì)照組、延胡索乙素低、中、高劑量組（20、40、80 mg·kg-1）、阿司匹林組（40 mg·kg-1），每組 8 只。各組動(dòng)物每天灌胃一次，連續(xù)7 d，空白對(duì)照組給予等量生理鹽水，各組動(dòng)物末次灌胃給藥后2 h，腹腔注射20%烏拉坦（5 mL·kg-1）麻醉，打開(kāi)腹腔在左腎下方手術(shù)結(jié)扎大鼠下腔靜脈，縫合腹壁，造成大鼠下腔靜脈血栓模型，4 h后重新打開(kāi)腹腔，在結(jié)扎下方2 cm處用止血鉗夾住血管，將該段血管內(nèi)血液吸盡，然后縱行剪開(kāi)管腔，觀察有無(wú)血栓形成，如有即取出血栓，用濾紙沾去血栓表面的浮血，置60℃烤箱烤20 h，冷卻后稱血栓干重[7]。

藥物對(duì)血栓抑制率（%）=（空白組血栓重量-給藥組血栓重量）/空白組血栓重量×100%。

2.2 動(dòng)靜脈旁路血栓模型

各組給藥同前，大鼠用烏拉坦麻醉，頸部正中切口，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈及左頸外靜脈，在三段聚乙烯管的中段放入一根長(zhǎng)8 cm的絲線，將肝素生理鹽水溶液（5 U·mL-1）充滿聚乙烯管，將其一端插入右側(cè)頸總動(dòng)脈，另一端插入左頸外靜脈，打開(kāi)動(dòng)脈夾，血液從右頸總動(dòng)脈經(jīng)聚乙烯管返回左頸外靜脈。開(kāi)放血流20 min后，中斷血流，迅速取出絲線稱重，總重量減去絲線重量，即為血栓濕重[8]。然后放入烤箱于60℃烤20 h，冷卻后立即稱重，即為血栓干重。

2.3 FeCl3誘導(dǎo)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成模型[9-10]

大鼠20%烏拉坦5 mL·kg-1腹腔注射麻醉后，沿頸正中線切開(kāi)，鈍性分離右側(cè)頸動(dòng)脈1 cm長(zhǎng)，放入0.6 cm寬的封口膠條，再用浸有20%FeCl3溶液的濾紙條（1.0 cm×0.5 cm）環(huán)裹分離備用的頸動(dòng)脈段，并用封口膠條封住，15 min后，取下濾紙條。40 min后，結(jié)扎濾紙條兩端血管，精確剪下濾紙條包裹的血管段，用潔凈濾紙吸干血管內(nèi)余血，取出血栓后放入烤箱60℃烤20 h，冷卻后立即稱重，即為血栓干重。

2.4 PT、APTT 測(cè)定

各組大鼠給藥后2 h取靜脈血，全血按9∶1加入3.8%抗凝劑枸櫞酸鈉，混勻，3000r·min-1離心 10min，得貧血小板血漿（PPP）。樣品于37℃預(yù)溫區(qū)預(yù)溫1 min，加入PT或APTT試劑混勻，37℃預(yù)溫1 min，按試劑盒說(shuō)明書及儀器使用要求測(cè)定APTT、PT。

2.5 數(shù)據(jù)處理

3 結(jié) 果

3.1 延胡索乙素對(duì)大鼠下腔靜脈結(jié)扎血栓形成的影響

與空白組相比，延胡索乙素各劑量組均可抑制大鼠靜脈結(jié)扎血栓的形成，且抑制效果呈劑量依賴性。延胡索乙素低劑量組較空白組血栓重量雖有下降，但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中、高劑量組較空白組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 延胡索乙素對(duì)大鼠下腔靜脈結(jié)扎致血栓形成影響（±s，n=8）

表1 延胡索乙素對(duì)大鼠下腔靜脈結(jié)扎致血栓形成影響（±s，n=8）

注:與空白組相比 *P＜0.05，**P＜0.01

延胡索乙素802.7±0.5**54.2

3.2 延胡索乙素對(duì)大鼠動(dòng)靜脈旁路血栓形成的影響

與空白組相比，延胡索乙素可抑制大鼠動(dòng)靜脈旁路血栓的形成，延胡索乙素低劑量組較空白組血栓重量雖有下降，但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中、高劑量組較空白組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 延胡索乙素對(duì)大鼠動(dòng)靜脈旁路致血栓形成影響（±s，n=8）

表2 延胡索乙素對(duì)大鼠動(dòng)靜脈旁路致血栓形成影響（±s，n=8）

注:與空白組相比 *P＜0.05，**P＜0.01

延胡索乙素組802.7±0.6**43.7

3.3 延胡索乙素對(duì)FeCl3致大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的影響

造模實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)eCl3使動(dòng)脈產(chǎn)生血栓，而延胡索乙素各劑量組對(duì)動(dòng)脈血栓能有效地產(chǎn)生抑制作用；低劑量組減少血栓形成但與對(duì)照組沒(méi)有顯著性差異，中、高劑量組則有效地減輕血栓重量，且與空白組相比有顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 延胡索乙素對(duì)FeCl3致大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的影響（±s，n=8）

表3 延胡索乙素對(duì)FeCl3致大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的影響（±s，n=8）

注:與空白組相比 *P＜0.05，**P＜0.01

3.4 延胡索乙素對(duì)PT、APTT的影響

與空白對(duì)照組比較，延胡索乙素各劑量組均能使大鼠血漿的PT、APTT明顯延長(zhǎng)，且中、高劑量組與空白組相比有顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 延胡索乙素對(duì)大鼠PT、APTT的影響（±s，n=8）

表4 延胡索乙素對(duì)大鼠PT、APTT的影響（±s，n=8）

注:與空白組相比 *P＜0.05，**P＜0.01

4 討 論

雖然近年來(lái)介入式醫(yī)藥療法對(duì)預(yù)防和治療大范圍的血栓事件取得了一些進(jìn)展，但其發(fā)病率和死亡率依然很高。因此仍亟需更安全、更有效的抗血栓治療藥物。靜脈血栓性和動(dòng)脈血栓性疾病常被認(rèn)為是不同發(fā)病機(jī)制和不同臨床特征的疾病，但靜脈血栓性疾病與動(dòng)脈血栓性疾病有許多共同的致病因子[11]；而且兩者在疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中互相促進(jìn)[12-13]?；谶@一事實(shí)，本實(shí)驗(yàn)從靜脈血栓、動(dòng)脈血栓及動(dòng)靜脈旁路血栓綜合檢驗(yàn)延胡索乙素的抗血栓活性。

FeCl3血栓模型就是通過(guò)刺激內(nèi)皮損傷激活凝血通路造成血栓[14]；誘導(dǎo)的動(dòng)脈血栓主要由血小板和纖維蛋白組成[15]，模擬臨床動(dòng)脈血栓疾病；而下腔靜脈結(jié)扎模型和動(dòng)靜脈旁路模型分別模擬臨床上靜脈血栓和混合血栓疾病。實(shí)驗(yàn)表明，延胡索乙素對(duì)大鼠靜脈血栓、動(dòng)脈血栓及動(dòng)靜脈旁路血栓模型均有較好作用，并能有效延長(zhǎng)PT和APTT指標(biāo)，且對(duì)PT的延長(zhǎng)更為顯著，提示延胡索乙素可能主要是通過(guò)抑制凝血外源性途徑來(lái)抑制血栓的形成。更深入的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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