劉匯，高曉晨

（1.吉林省延邊朝鮮族自治州食品藥品檢驗所，吉林 延吉 133000；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心，吉林 長春 130117）

紫外分光光度法測定小兒化毒散中膽紅素的含量

劉匯1*，高曉晨2

（1.吉林省延邊朝鮮族自治州食品藥品檢驗所，吉林 延吉 133000；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心，吉林 長春 130117）

目的：建立小兒化毒散中膽紅素的含量測定方法。方法：本實驗采用紫外分光光度法測定膽紅素的含量，用重氮化試劑顯色，對樣品的提取檢測波長為533 nm。結(jié)果：膽紅素濃度在0.010 3～0.050 0 mg·mL-1與吸收度呈良好的線性關(guān)系，r＝0.999 8（n＝5），平均回收率為99.33%，RSD＝0.54%（n＝6）。結(jié)論：該法簡便、快速、穩(wěn)定、可靠，可用于測定小兒化毒散中膽紅素的含量。

小兒化毒散；人工牛黃；膽紅素；紫外分光光度法

小兒化毒散收載于 《中國藥典》2010年版一部，由大黃、冰片、人工牛黃、黃連、天花粉、珍珠、赤芍、川貝母等12味藥組成，具有清熱解毒，活血消腫功能，用于熱毒內(nèi)蘊、毒邪未盡所致的口瘡腫痛、瘡瘍潰爛、煩躁口渴、大便秘結(jié)［1］。有報道對該藥中的大黃素以及芍藥苷進行含量測定［2-3］，其中人工牛黃含有效成分膽紅素，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未收載檢測方法，且未見測定小兒化毒散中膽紅素含量的相關(guān)文獻報道。為能更好地控制本制劑質(zhì)量，本文采用紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2010年版一部附錄V A）對膽紅素進行含量測定［1］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

紫外可見分光光度計（美國 Varian公司），BP211D型電子天平（德國Sartorius公司），電熱恒溫水浴鍋 （江蘇南通縣通海電器廠）。

1.2 試劑

膽紅素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：10077-0101），水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。小兒化毒散（廣西南珠制藥有限公司，批號：20100412，20100730，20100823，規(guī)格：0.6 g/瓶）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取膽紅素對照品10 mg置100 mL棕色量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 mL置50 mL棕色量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備［4］

取裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，精密稱取15 g裝量的樣品，置圓底燒瓶中，加三氯甲烷-乙醇（7∶3）混合溶液30mL、鹽酸1滴，搖勻，置水浴65℃中加熱回流30 min，放冷，過濾，至50 mL棕色量瓶中。容器用少量混合溶液洗滌，洗液并入同一量瓶中，加上述混合溶液至刻度，搖勻。精密量取上清液10 mL，置50 mL棕色量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.3 測定波長的選擇

精密量取膽紅素對照品9 mL，置具塞試管中，精密加入重氮化溶液 （甲液：取對氨基苯磺酸0.1 g，加鹽酸1.5 mL與純化水適量使成100mL。乙液：取亞硝酸鈉0.5 g，用純化水溶解并稀釋至100 mL，置冰箱內(nèi)保存。臨用時取甲液10 mL、乙液0.3 mL，混勻）1 mL，搖勻，在15℃暗處放1 h，以相應(yīng)的試劑為空白，掃描，在400～800 nm波長范圍內(nèi)測定吸收光譜。結(jié)果膽紅素對照品溶液在533 nm波長處有最大吸收峰，故以533 nm為測定波長，見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取2.1項下對照品溶液1，2，3，4，5mL，置試管中，分別加乙醇至9 mL，按2.3項下自 “精密加入重氮化溶液”起依法操作，相應(yīng)試劑做空白，在533 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝6.441X+0.006 7，r＝0.999 8。膽紅素濃度在0.010 3～0.050 0 mg·mL-1與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

圖1 膽紅素的全波長掃描圖

2.5 精密度試驗

取供試品溶液，按2.3項依法重復(fù)測定6次吸光度，計算RSD＝1.17%。結(jié)果表明，本方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別于配制后0，3，6，9 h，按上述的方法測定吸光度，計算RSD＝1.08%，結(jié)果供試品溶液在9 h之內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗

分別精密吸取供試品溶液6份，按2.3項下操作，測定吸光度，計算RSD＝0.37%。結(jié)果表明，此方法有較好的重現(xiàn)性。

2.8 回收率試驗

精密稱取樣品細粉約1瓶總量，置圓底燒瓶中，按2.2項下方法制備溶液6份，加膽紅素對照品0.05 mg，在533 nm波長處測定其吸光度，計算膽紅素平均回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品測定

取3批小兒化毒散（批號：20100412，20100730，20100823），每批一瓶樣品，按2.2項下方法平行制備3份供試品溶液，根據(jù)測定出的吸光度和標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定含量，結(jié)果平均含量分別為41.7，42.3，42.1μg/瓶。

表1 小兒化毒散中膽紅素回收率試驗

3 討論

按方法同時制備空白樣品溶液，在400～800 nm的波長范圍內(nèi)掃描，無紫外吸收，不干擾膽紅素的含量測定，故選擇533 nm波長作為膽紅素含量測定的檢測波長是合理的。

小兒化毒散的原標(biāo)準(zhǔn)中無人工牛黃的含量測定，不能完整地控制該藥品的質(zhì)量。經(jīng)多次測定，小兒化毒散中膽紅素的含量限度不低于41.4μg/瓶。通過上述方法學(xué)考察，建立了小兒化毒散中膽紅素的含量測定方法，該方法簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性、回收率好，能有效控制小兒化毒散中人工牛黃的質(zhì)量。

［1］國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：478，附錄 30.

［2］黃澤中，何利華，尹雄章.小兒化毒散中芍藥苷含量測定［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，31（7）：916-917.

［3］孫新建，李志浩，吳進，等.RP-HPLC測定小兒化毒散中大黃素和大黃酚的含量［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，16（10）：93-95.

［4］吳春敏，謝敏.紫外分光光度法測定片仔癀中膽紅素的含量［J］.中成藥，1995，17（6）：14-15.

UV Spectrophotometry Determ ination of Bilirubin in Xiao’er Huadu Powder

LIU Hui1，GAO Xiao-chen2
（1.Institute of Food and Drug，Yanbian Korean Autonomous Prefecture，Yanji133000，China；2.Development Center of Traditional Chinese Medicine and Bioengineering，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun130117，China）

Objective：A method of determination of bilirubin in Xiao’er Huadu Powder.Methods：The content of Bilirubin in Bovis Calculus Artifactus was determined by UV spectrophotometry.The detection wavelength was 533 nm.Results：The linear ranged over 0.010 3～0.050 0 mg·mL-1（r＝0.999 8，n＝5）.The average recovery was 99.33%（RSD＝0.54%，n＝6）.Conclusion：The methods were proved to be simple，precise sensitive and reproducible.It can be used for quality control of Xiao’er Huadu Powder.

Xiao’er Huadu Powder；Bovis Calculus Artifactus；Bilirubin；UV spectrophotometry

2012-11-29）

*［通訊作者］劉匯，Tel：（0433）2265069，E-mail：liuhuiw5＠hotmail.com