陳艾媛，娜仁花，彭鴻娟，趙 亞

弓形蟲（Toxopl asma gondii）和瘧原蟲（Pl asmodiu m spp）的分類地位均屬于頂復(fù)門（Phyl u m Apico mplexa），孢子綱（Class Sporozoea），真球蟲目（Or der Eucoccidiida）［1］。頂復(fù)門原蟲都是通過與其質(zhì)膜相連的肌動蛋白－肌球蛋白馬達(dá)，以主動入侵的方式侵入宿主細(xì)胞內(nèi)，而不是被宿主細(xì)胞所攝取或吞噬［2］。兩種原蟲都以納蟲泡的形式在宿主細(xì)胞內(nèi)寄生并增殖，但是弓形蟲、瘧原蟲與宿主細(xì)胞之間的相互作用大部分并不十分清楚，兩者入侵細(xì)胞及納蟲泡膜形成的過程也各有不同的特點(diǎn)。

細(xì)菌、病毒等病原入侵宿主細(xì)胞后都伴隨有宿主細(xì)胞骨架重組的過程［3］。頂復(fù)門的原蟲包括隱孢子蟲（Cr yptosporidiu m par vu m）、弓形蟲、瘧原蟲入侵宿主細(xì)胞后都有引發(fā)宿主細(xì)胞骨架重組的現(xiàn)象：隱孢子蟲感染宿主細(xì)胞時誘導(dǎo)宿主肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)形成片狀結(jié)構(gòu)，將蟲體與宿主細(xì)胞質(zhì)分隔開來，從而形成一個細(xì)胞內(nèi)胞質(zhì)外的小室，并在小室中進(jìn)行增殖［4］；弓形蟲速殖子和伯氏瘧原蟲裂殖子入侵宿主細(xì)胞后在“運(yùn)動連接（moving j unction）”處形成一個宿主細(xì)胞F－肌動蛋白環(huán)，因而推測弓形蟲與瘧原蟲的入侵過程需要宿主細(xì)胞肌動蛋白的極化［2］；弓形蟲的入侵激活宿主細(xì)胞微管和微絲等細(xì)胞骨架元件的重組［5］，而在感染的晚期，弓形蟲啟用宿主細(xì)胞的微管形成管道結(jié)構(gòu)將宿主細(xì)胞器組分運(yùn)輸?shù)郊{蟲泡膜上［6］；瘧原蟲感染紅細(xì)胞后，向紅細(xì)胞的胞質(zhì)中分泌蟲體蛋白，調(diào)控紅細(xì)胞骨架的重組［7－9］。

Rho GTP酶屬于Ras超家族的成員，其分子量一般在20～30 k D。Ras家族成員眾多，在哺乳動物中至少由14個亞族組成，其中最具代表性的為Rho（Ras ho mologous member）、Rac （ras－related C3 bot ulinu m toxin sub－strate）和 Cdc42 （cell division cycle 42）3個亞族。Rho GTP酶廣泛地調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，許多調(diào)節(jié)是通過控制肌動蛋白極性來實(shí)現(xiàn)的。Rho GTP酶家族調(diào)節(jié)肌動蛋白骨架，微管動力學(xué)，細(xì)胞極性和運(yùn)動性，小泡運(yùn)輸路徑以及細(xì)胞吸附、移動、增殖與生存［10－13］。在瘧原蟲入侵紅細(xì)胞時，Rac GTP酶是紅細(xì)胞骨架重組的動態(tài)調(diào)節(jié)因子［14］。肌動蛋白低聚體是紅細(xì)胞骨架重要的結(jié)構(gòu)組成部分，Rac1和Rac2調(diào)節(jié)肌動蛋白結(jié)構(gòu)，在造血細(xì)胞中有許多重疊的和獨(dú)特的功能［14］。Rho A被發(fā)現(xiàn)存在于紅細(xì)胞的胞質(zhì)和膜上，而且高度親合性地結(jié)合于紅細(xì)胞膜的胞質(zhì)面上［15］。而在弓形蟲入侵宿主細(xì)胞時，Rho GTP酶調(diào)控宿主細(xì)胞骨架的重組卻未見文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。

為了解宿主細(xì)胞Rho GTP酶在弓形蟲與瘧原蟲這兩種原蟲入侵過程中對宿主細(xì)胞骨架重組所起的調(diào)控作用，本研究選取Rho GTP酶家族中的Rho A和Rac1作為靶標(biāo)蛋白，利用細(xì)胞免疫熒光的方法來檢測弓形蟲和瘧原蟲入侵宿主細(xì)胞后，宿主細(xì)胞Rho GTP酶在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 細(xì)胞株、蟲株與實(shí)驗(yàn)動物 人呼吸道上皮細(xì)胞16－HBE購自上海復(fù)祥生物技術(shù)有限公司。SPF級KM鼠（18～22 g雌性鼠）購于南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。弓形蟲RH株為本實(shí)驗(yàn)室保存，接種于SPF級KM鼠腹腔中傳代。惡性瘧原蟲云南地理株由第四軍醫(yī)大學(xué)病原生物學(xué)教研室保存。

1．1．2 主要試劑 Trit on X－100、DAPI購于sigma公司；兔抗人Rac1和兔抗人Rho A單克隆抗體均購于 Cell Signaling公司；二抗 goat anti－rabbit Ig GFITC購于SANTA CRUZ公司。

1．2 實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1 細(xì)胞爬片及涂片的制備

1．2．1．1 16－HBE細(xì)胞爬片制備及弓形蟲感染放置4片蓋玻片于六孔板內(nèi)其中四孔，將16－HBE細(xì)胞平均分到此四孔中，用DMEM＋10%NBS培養(yǎng)基在37℃，5%CO2條件下培養(yǎng)至細(xì)胞覆蓋率達(dá)95%～100%，細(xì)胞長在蓋玻片上制備細(xì)胞爬片，方便下一步的免疫熒光實(shí)驗(yàn)操作與觀察。從KM鼠腹腔中抽取弓形蟲RH株速殖子，3 000×g離心5 min后棄掉上清液，加入4 m L DMEM完全培養(yǎng)基重懸蟲體，混勻后均勻加入四孔16－HBE細(xì)胞爬片的培養(yǎng)孔中，37℃5%CO2培養(yǎng)箱中侵染2 h。吸掉細(xì)胞培養(yǎng)基上清，并用PBS洗滌細(xì)胞3次，洗去未侵染的弓形蟲速殖子。

1．2．1．2 惡性瘧原蟲體外同步化培養(yǎng)和血涂片制備 惡性瘧原蟲復(fù)蘇和傳代培養(yǎng)參照Trager等的方法［16］進(jìn)行。簡述如下：以RPMI1640為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，其中含有25 mmol／L HEPES，0．2%Na HCO和10%人血清，紅細(xì)胞壓積2%～5%，在5%CO2和37℃條件下培養(yǎng)。每天換液一次、每隔3天添加一次新鮮人紅細(xì)胞。選擇瘧原蟲環(huán)狀體較多的發(fā)育階段開始同步化培養(yǎng)，待瘧原蟲同步化至成熟裂殖體為主且出現(xiàn)部分早期環(huán)狀體階段時，吸取適量懸浮紅細(xì)胞，離心，留取適量上清，重懸紅細(xì)胞制作薄血片，同時制作正常紅細(xì)胞薄血片為陰性對照。血片自然晾干，4℃預(yù)冷無水乙醇固定10 min，冷風(fēng)吹干，PAP筆劃分實(shí)驗(yàn)區(qū)域待用。

1．2．2 細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn) 室溫條件下用多聚甲醛固定細(xì)胞爬片或紅細(xì)胞涂片10 min，PBS振蕩洗滌（5 min×3次），透化液（0．5%Tritonx－100，PBS稀釋）500μL覆蓋細(xì)胞后室溫靜置10 min。PBS振蕩洗滌（5 min×3次），封閉液（0．1%Triton X－100，用新生牛血清稀釋）500μL覆蓋細(xì)胞并在37℃下孵育1 h。棄去封閉液，加入500μL一抗（封閉液稀釋，稀釋度1∶500），37℃孵育3 h。棄一抗，PBS振蕩洗滌（5 min×3次）。加入500μL FITC標(biāo)記的二抗 （封閉液稀釋，稀釋度1∶300）37℃條件下避光孵育1 h。在陰性對照實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞不用一抗孵育，僅以FITC標(biāo)記的二抗（封閉液稀釋，稀釋度1∶300）孵育。以下過程均在避光條件下進(jìn)行，PBS振蕩洗滌（5 min×3次），10 n mol／L DAPI染色5 min，PBS振蕩洗滌（5 min×3次），用雙蒸水洗去玻片上的鹽分。將玻片避光置于濾紙上風(fēng)干，封片并在熒光顯微鏡下觀察。

2 結(jié) 果

在熒光顯微鏡下用FITC濾光片觀察可見，經(jīng)抗人Rac1和Rho A單抗及FITC標(biāo)記的二抗孵育后的16－HBE細(xì)胞內(nèi)，在弓形蟲納蟲泡膜上有熒光的豐度聚集（見圖1－A和圖1－C，黃色箭頭所示）；陰性對照實(shí)驗(yàn)中，只用FITC標(biāo)記的二抗與16－HBE細(xì)胞內(nèi)孵育，在弓形蟲納蟲泡膜上沒有熒光的豐度聚集（見圖1－E）；而在未被侵染的16－HBE細(xì)胞中，只見Rho A和Rac1 GTP酶在細(xì)胞質(zhì)中的均勻分布（見圖1－B和圖1－D）。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在弓形蟲入侵宿主細(xì)胞后，出現(xiàn)了宿主細(xì)胞的Rho A和Rac1 GTP酶聚集在弓形蟲納蟲泡膜上的現(xiàn)象。然而，在用抗人Rac1和Rho A單抗孵育后的被惡性瘧原蟲侵染的紅細(xì)胞中，瘧原蟲納蟲泡上沒有看到熒光的聚集（見圖2－A和圖2－C，黃色箭頭所示）；而在未被侵染的紅細(xì)胞中只見Rho A和Rac1 GTP酶在紅細(xì)胞中均勻分布（見圖2－B和圖2－D）。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在被惡性瘧原蟲感染的紅細(xì)胞內(nèi)的納蟲泡膜上未出現(xiàn)Rho A和Rac1 GTP酶聚集的現(xiàn)象。

圖1 弓形蟲RH株速殖子侵染16－HBE細(xì)胞后抗Rho A、Rac1單抗免疫熒光檢測結(jié)果Fig．1 The immunofluorescence detection with anti－RhoA and anti－Rac1 mAb of 16－HBE cells infected with T．gondii RH tachyzoites

在綠色熒光顯微鏡下可見宿主細(xì)胞的Rho A和 Rac1 GTP酶在弓形蟲納蟲泡膜上的高豐度聚集（Fig 1－A，和 Fig 1－C，黃色箭頭所示），而在陰性對照實(shí)驗(yàn)組中，當(dāng)細(xì)胞只與FITC標(biāo)記的Ig G二抗孵育時，熒光沒有在納蟲泡膜上聚集的現(xiàn)象（Fig 1－B，和 Fig 1－D）。

在綠色熒光顯微鏡下可見紅細(xì)胞的Rho A和Rac1 GTP酶在惡性瘧原蟲（包括環(huán)狀體、未成熟裂殖體和成熟裂殖體等階段）納蟲泡膜上均沒有聚集（Fig 2－A，和 Fig 2－C，黃色箭頭所示），而在未被侵染的紅細(xì)胞中只見Rho A和Rac1 GTP酶在紅細(xì)胞中均勻分布（Fig 2－B，和 Fig 2－D）。

圖2 惡性瘧原蟲裂殖子侵染人紅細(xì)胞后抗Rho A、Rac1單抗免疫熒光檢測結(jié)果Fig．2 The i mmunofluorescence detection with anti－Rho A and anti－Rac1 mAb of human erythrocytes infected with Plasmodium f alcipar um mer ozoites

3 討 論

雖然弓形蟲與瘧原蟲均屬于頂復(fù)門的細(xì)胞內(nèi)原蟲，并以納蟲泡的形式在宿主細(xì)胞內(nèi)寄生并增殖，但是兩者入侵細(xì)胞及納蟲泡膜形成的過程卻各有不同的特點(diǎn)。弓形蟲對宿主細(xì)胞無特異的選擇性，幾乎可以感染所有的有核細(xì)胞。弓形蟲入侵宿主細(xì)胞的過程是主動入侵，弓形蟲以滑動的運(yùn)動方式靠近宿主細(xì)胞膜，其類錐體緊密粘附于宿主細(xì)胞膜并向前推進(jìn)，弓形蟲棒狀體與前端表膜融合后釋放調(diào)控蛋白誘導(dǎo)宿主細(xì)胞表面形成絲狀偽足和通道輔助其入侵，同時宿主細(xì)胞膜向內(nèi)凹陷，蟲體通過類錐體端進(jìn)入細(xì)胞［17］。入侵部位的宿主細(xì)胞膜形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)壓縮包圍蟲體，入侵完成后宿主細(xì)胞膜封閉，納蟲泡形成［18－20］。在與宿主細(xì)胞的吸附過程中，弓形蟲分泌的微粒體蛋白和棒狀體頸蛋白形成的運(yùn)動連接（moving junction，MJ）［21－22］是弓形蟲吸附于宿主細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，且具有從納蟲泡膜中篩選宿主細(xì)胞膜組分的功能［23］。一些宿主細(xì)胞膜組分如與膜筏（membrane raft）、細(xì)胞骨架定位及分子多聚體形成相關(guān)的跨膜蛋白等，被迅速清除并在成熟的納蟲泡膜中消失，這些組分的排除可避免納蟲泡被內(nèi)膜系統(tǒng)融合［24］，但許多膜脂卻被保留下來。納蟲泡外表面還與宿主細(xì)胞的細(xì)胞器如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)緊密結(jié)合，這些細(xì)胞器的膜組分為納蟲泡的生長擴(kuò)大提供膜組分來源［18－19］。納蟲泡膜的組分中，大部分來源于宿主細(xì)胞膜，少數(shù)來源于宿主細(xì)胞質(zhì)，還包括弓形蟲分泌的棒狀體蛋白、微粒體蛋白、致密顆粒蛋白［18－19］。由此，弓形蟲在入侵后在宿主細(xì)胞內(nèi)形成了一個非融合小室—納蟲泡包圍著蟲體，來抵抗宿主細(xì)胞內(nèi)涵體的酸化及溶酶體的融合作用，即防止被宿主細(xì)胞清除。

瘧原蟲裂殖子入侵紅細(xì)胞則具有高度的宿主特異性，這是因?yàn)榀懺x是以配體－受體結(jié)合的方式來識別紅細(xì)胞的［25］。瘧原蟲裂殖子入侵紅細(xì)胞的過程開始于裂殖子與紅細(xì)胞表面之間的微弱的吸附作用，是通過尚未鑒定的原蟲配體與紅細(xì)胞受體之間的相互作用，接著裂殖子的類錐體頂端與紅細(xì)胞表面緊密結(jié)合［26－27］。裂殖子觸發(fā)了與紅細(xì)胞之間“連接（junction）”的形成，該連接在電子顯微鏡下顯示為電子致密區(qū)，存在于裂殖子類錐體的一端。此外，裂殖子分泌棒狀體蛋白進(jìn)入紅細(xì)胞，可能促進(jìn)入侵的過程［27－29］。裂殖子最終通過原蟲表面蛋白和原蟲的肌動蛋白－肌球蛋白馬達(dá)之間的相互作用，隨著該“連接”向紅細(xì)胞內(nèi)的移動而進(jìn)入紅細(xì)胞［30］。因此，該“連接”的形成及其與原蟲分子馬達(dá)之間的相互作用是入侵的關(guān)鍵步驟［31－32］。而納蟲泡是由紅細(xì)胞膜向細(xì)胞內(nèi)流動而形成，與原蟲進(jìn)入紅細(xì)胞的過程同步完成［29］，在入侵過程結(jié)束的時候，“連接”部分的電子致密區(qū)成為納蟲泡的一部分包裹著剛?cè)肭值脑x［27］。

從弓形蟲與瘧原蟲入侵宿主細(xì)胞的過程和納蟲泡形成過程來看，兩者都具有很多的相同之處，如在入侵開始時，弓形蟲速殖子和瘧原蟲裂殖子入侵宿主細(xì)胞都形成一個特殊的結(jié)構(gòu)——“運(yùn)動連接（moving junction）”，并在該連接處形成一個宿主細(xì)胞F－肌動蛋白環(huán)，激活宿主細(xì)胞骨架發(fā)生重組［2］；此外，兩種原蟲納蟲泡膜的組分大部分是來源于宿主細(xì)胞膜，小部分來源于原蟲本身的分泌蛋白，而且還有一些來源于宿主細(xì)胞質(zhì)。

弓形蟲感染宿主細(xì)胞后，在納蟲泡膜上有宿主細(xì)胞Rho A與Rac1 GTP酶的聚集，這兩種宿主細(xì)胞的酶類被納入了弓形蟲的納蟲泡膜上的方式有可能包括以下三種：1、隨同宿主細(xì)胞膜一同被組成到納蟲泡膜上；2、通過擴(kuò)散作用，從宿主細(xì)胞質(zhì)中被組成到納蟲泡膜上；3、來源于與弓形蟲納蟲泡膜緊密結(jié)合且作為納蟲泡擴(kuò)大中主要膜成分來源的宿主細(xì)胞器如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等。

盡管Rho AGTP酶被發(fā)現(xiàn)存在于紅細(xì)胞的胞質(zhì)和胞膜上，而且高度親合性地結(jié)合于紅細(xì)胞膜的胞質(zhì)面上［15］，但是瘧原蟲納蟲胞膜上沒有發(fā)現(xiàn)Rho A和Rac1 GTP酶聚集，這個現(xiàn)象有可能說明：1、紅細(xì)胞膜上的Rho GTP酶并沒有在納蟲泡形成時隨著紅細(xì)胞膜被納入到納蟲泡膜上；2、細(xì)胞質(zhì)中的Rho GTP酶也沒有被組成到納蟲泡膜上；3、因?yàn)榧t細(xì)胞內(nèi)沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器，因而也不可能通過膜融合的方式被組成到納蟲泡膜上。

盡管弓形蟲、瘧原蟲的入侵過程需要宿主細(xì)胞骨架發(fā)生重組，而細(xì)胞骨架的重組又是由Rho GTP酶家族所調(diào)控，但是這個過程的具體細(xì)節(jié)仍是未知。宿主細(xì)胞Rho GTP酶在弓形蟲速殖子與瘧原蟲裂殖子入侵宿主細(xì)胞時不同的分布現(xiàn)象，顯示這兩種原蟲通過不同的途徑來調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞骨架重組。

［1］Zhao WX．Hu man parasitology［M］．3rded．Beijing：People’s Health Publishing House，2004：175．（in Chinese）趙慰先．人體寄生蟲學(xué)［M］．3版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：175．

［2］Gonzalez V，Combe A，David V，etal．Host cell entry by apico mplexa parasites requires actin poly merization in the host cell［J］．Cell Host Micr obe，2009，5（3）：259－272．DOI：10．1016／j．cho m．2009．01．011

［3］Go mes－Santos CS，Itoe MA，Afonso C，etal．Highly dynamic host actin reorganization around developing Pl asmodiu m inside hepatocytes［J］．PLoS One，2012，7（1）：e29408．

［4］Elliott DA，Clar k DP．Cr yptosporidiu m par vu m induces host cell actin accu mulation at the host－parasite interface［J］．Infect Immun，2000，68（4）：2315－2322．DOI：10．1128／IAI．68．4．2315－2322．2000

［5］da Silva CV，da Silva EA，Cruz MC，etal．ARF6，PI3－kinase and host cell actin cytoskeleton in Toxopl asma gondii cell invasion［J］．Biochem Biophys Res Co mmun，2009，378（3）：656－661．DOI：10．1016／j．bbrc．2008．11．108

［6］Coppens I，Dunn JD，Ro mano JD，etal．Toxopl asma gondii sequesters lysoso mes from ma mmalian hosts in the vacuolar space［J］．Cell，2006，125（2）：261－274．DOI：10．1016／j．cell．2006．01．056

［7］Oh SS，Voigt S，F(xiàn)isher D，etal．Plasmodiu m f alcipar u m erythrocyte membrane protein 1 is anchored to the actin－spectrin junction and knob－associated histidine－rich pr otein in the eryt hrocyte skeleton［J］．Mol Biochem Parasitol，2000，108 （2）：237－247．DOI：10．1016／S0166－6851（00）00227－9

［8］Pei X，Guo X，Coppel R，etal．Plasmodiu m f alcipar u m erythr ocyte me mbrane protein 3 （Pf EMP3）destabilizes er yt hr ocyte membrane skeleton［J］．J Biol Chem，2007，282 （37）：26754－26758．DOI：10．1074／jbc．M701612200

［9］Mill holland MG，Chandramohanadas R，Pizarr o A，etal．The malaria parasite progressively dismantles the host erythrocyte cytoskeleton for efficient egress［J］．Mol Cell Pr oteo mics，2011，10（12）：M111．010678．DOI：10．1074／mcp．M111．010678

［10］Hall A．Rho GTPases and the actin cytoskeleton［J］．Science，1998，279（5350）：509－514．DOI：10．1126／science．279．5350．509

［11］Sch wartz M．Rho signalling at a glance［J］．J Cell Sci，2004，117（Pt 23）：5457－5458．DOI：10．1242／jcs．01582

［12］Burridge K，Wennerberg K．Rho and Rac take center stage［J］．Cell，2004，116（2）：167－179．DOI：10．1016／S0092－8674（04）00003－0

［13］Etienne－Manneville S，Hall A．Rho GTPases in cell biology［J］．Nature，2002，420（6916）：629－635．DOI：10．1038／nat ure01148

［14］Kalfa TA，Pushkaran S，Mohandas N，etal．Rac GTPases regulate the mor phology and defor mability of the er yt hr ocyte cyt oskeleton［J］．Blood，2006，108（12）：3637－3645．DOI：10．1182／blood－2006－03－005942

［15］Boukharov AA，Cohen CM．Guanine nucleotide－dependent translocation of Rho A from cytosol to high affinity membrane binding sites in hu man er yt hr ocytes［J］．Biochem J，1998，330（Pt 3）：1391－1398．

［16］Trager W，Jensen JB．Hu man malaria parasites in continuous culture［J］．Science，1976，193 （4254）：673－675．DOI：10．1126／science．781840

［17］Mac Laren A，Attias M，de Souza W．Aspects of the early moments of interaction bet ween tachyzoites of Toxopl asma gondii with neutrophils［J］．Vet Parasitol，2004，125（3－4）：301－312．DOI：10．1016／j．vetpar．2004．07．006

［18］Peng HJ，Chen XG，Lindsay DS．A review：Co mpetence，co mpromise，and concomitance－reaction of the host cell to Toxopl asma gondii infection and develop ment［J］．J Parasitol，2011，97（4）：620－628．DOI：10．1645／GE－2712．1

［19］Peng HJ．For mation mechanism and the f unction of parasitophorous vacuole of Toxopl asma gondii［J］．Chin J Parasitol Parasit Dis，2010，28（5）：81－84．（in Chinese）彭鴻娟．剛地弓形蟲納蟲泡的形成機(jī)制及其作用［J］．中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志，2010，28（5）：81－84．

［20］Liang ZH．Research progress of Toxoplasma gondii invading host cells mechanism［J］．Chin J Zoonoses，1995，11（5）：34－36．（in Chinese）梁志慧．弓形蟲速殖子侵入宿主細(xì)胞機(jī)理的研究進(jìn)展［J］．中國人獸共患病雜志，1995，11（5）：34－36．

［21］Alexander DL，Mital J，War d GE，etal．Identification of the moving junction co mplex of Toxopl asma gondii：a collaboration bet ween distinct secret or y organelles［J］．PLoS Pat hog，2005，1（2）：e17．

［22］Cao J，Kaneko O，Thongkukiatkul A，etal．Rhoptry neck protein RON2 for ms a co mplex wit h micr one me pr otein A MA1 in Pl asmodiu m f alcipar u m merozoites［J］．Parasitol Int，2009，58（1）：29－35．DOI：10．1016／j．parint．2008．09．005

［23］Straub K W，Cheng SJ，Sohn CS，etal．Novel co mponents of the apico mplexan moving junction reveal conser ved and coccidia restricted elements［J］．Cell Microbiol，2009，11（4）：590－603．DOI：10．1111／j．1462－5822．2008．01276．x

［24］Sibley LD，Dobrowolski JM，Morisaki JH，etal．Invasion and intracell ular survival by Toxopl asma gondii［M］／／Russell DG．In：Strategies for Intracellular Sur vival of Microbes．London：Bailliere Tindall．1994：245－264．

［25］Srinivasan P，Beatty WL，Diouf A，etal．Binding of Plasmodiu m merozoite proteins RON2 and A MA1 triggers commit ment to invasion［J］．Pr oc Natl Acad Sci U S A，2011，108（32）：13275－13280．DOI：10．1073／pnas．1110303108

［26］Dvorak JA，Miller LH，Whitehouse WC，etal．Invasion of er yt hr ocytes by malaria mer ozoites［J］．Science，1975，187（4178）：748－750．DOI：10．1126／science．803712

［27］Aikawa M，Miller LH，Johnson J，etal．Erythrocyte entry by malarial parasites．A moving junction bet ween er yt hr ocyte and parasite［J］．J Cell Biol，1978，77（1）：72－82．

［28］Miller LH，Aikawa M，Johnson JG，etal．Interaction bet ween cytochalasin B－treated malarial parasites and eryt hrocytes．Attach ment and junction for mation［J］．J Exp Med，1979，149（1）：172－184．

［29］Aikawa M，Miller L H，Rabbege JR，etal．Freeze－fracture st udy on the er yt hr ocyte me mbrane during malarial parasite invasion［J］．J Cell Biol，1981，91（1）：55－62．

［30］Bau m J，Richar d D，Healer J，etal．A conser ved molecular motor drives cell invasion and gliding motility acr oss malaria life cycle stages and other apicomplexan parasites［J］．J Biol Chem，2006，281（8）：5197－5208．DOI：10．1074／jbc．M509807200

［31］Jewett TJ，Sibley LD．Aldolase for ms a bridge bet ween cell surface adhesins and the actin cyt oskelet on in apico mplexan parasites［J］．Mol Cell，2003，11（4）：885－894．DOI：10．1016／S1097－2765（03）00113－8

［32］Buscaglia CA，Coppens I，Hol WG，etal．Sites of interaction bet ween aldolase and t hro mbospondin－related anony mous protein in plasmodiu m［J］．Mol Biol Cell，2003，14（12）：4947－4957．DOI：10．1091／mbc．E03－06－0355