馮磊，么宏偉，謝晨陽，吳洪軍，趙鳳臣，張學(xué)義

（黑龍江省林副特產(chǎn)研究所，黑龍江省非木質(zhì)林產(chǎn)品研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，牡丹江157011）

松茸［TricholomaMatsutake（S.Ito et Imai）Sing］屬擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、口蘑科、口蘑屬。它是一種純天然的珍稀名貴食用菌類，被譽(yù)為“菌中之王”。松茸的抗腫瘤成分主要是多糖。無論是從從新鮮的或干的松茸子實(shí)體中都可提取到有明顯抗腫瘤活性的多糖物質(zhì)。松茸含有的多糖具有活化人體內(nèi)免疫活性細(xì)胞活性的功能，這些免疫活性細(xì)胞包括自然殺傷（NK）細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和T細(xì)胞，并且刺激抗體產(chǎn)生從而達(dá)到提高人體免疫力，增強(qiáng)人體抗病防癌的能力激活細(xì)胞的免疫功能，增強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)功能；增強(qiáng)B淋巴細(xì)胞功能的作用；促進(jìn)白細(xì)胞介素1（IL－1），克隆刺激因子（CSF）和IL－3的產(chǎn)生，并因此促進(jìn)淋巴細(xì)胞成熟、分化和增殖，提高機(jī)體免疫力，增強(qiáng)人體抗病能力，具有抗病毒作用，抗變效應(yīng)，它可抗基因突變，保護(hù)DNA的正常結(jié)構(gòu)和功能，把病變消滅于DNA層次，防患于未然，從而起到延長癌癥患者的壽命和預(yù)防疾病的作用。因此，松茸多糖已作為新的細(xì)胞免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于病毒性肝炎的治療以及其它免疫功能低下、缺陷、障礙的疾病，如尋常型銀屑病、硬皮病、風(fēng)濕病等。

鑒于傳統(tǒng)提取方法復(fù)雜，成本高，而吸附樹脂成本低，工藝簡(jiǎn)便，效率高，可再生重復(fù)使用等特點(diǎn)，研究采用大孔吸附樹脂分離松茸多糖的工藝，確定其最佳分離純化條件及工藝路線，為黑龍江省食用菌深加工產(chǎn)業(yè)提供技術(shù)支撐。

1 試劑和儀器

松茸為牡丹江地產(chǎn)。質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%H2SO4、苯酚、體積分?jǐn)?shù)95%乙醇、葡萄糖，均為分析純。苯酚使用前經(jīng)蒸餾處理，收集180～182℃餾分待用。紫外可見分光光度計(jì)（上海美普達(dá)），BS 124S電子分析天平（北京賽多利斯），RE52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮），氣浴恒溫振蕩器（哈東聯(lián)），循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司），電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密）。

2 分析方法

采用紫外分光光度法定量分析松茸多糖。經(jīng)紫外掃描（200～600nm）知，松茸多糖在490nm處有特征吸收峰，樣品中雜質(zhì)組分在該波長下無吸收，定量分析在該波長下進(jìn)行。分別準(zhǔn)確稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品配成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，測(cè)得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線為y＝47.575x＋0.0015（R2＝0.9992），線性范圍0.0016～0.0260mg／mL，取適量樣品進(jìn)行分光光度分析，通過上述標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中多糖濃度。

3 樹脂的類型

本研究考察了D3520（非極性）、AB－8（弱極性）、S－8（極性）、D4020（非極性）、X－5（非極性）、NKA－9（極性）這6種樹脂對(duì)多糖的吸附容量和吸附率。

4 樹脂的預(yù)處理

各樹脂用乙醇浸泡，充分溶脹，用蒸餾水將乙醇洗凈。各樹脂在室溫下真空干燥備用。

5 靜態(tài)吸附量和吸附率的測(cè)定

準(zhǔn)確稱取經(jīng)過預(yù)處理的干樹脂2.0g，置于250mL具塞磨口三角瓶中，分別加入25mL 3.9201mg／mL的食用菌多糖溶液。33℃下恒溫振蕩過夜，樹脂充分吸附后，測(cè)定溶液中食用菌多糖濃度，按（1）、（2）式計(jì)算各樹脂的平衡吸附量q及吸附率E。

式中：q，平衡吸附量（mg／g）；E，吸附率；C0，起始濃度（mg／mL）；Ce，平衡濃度（mg／mL）；V ，溶液體積（mL）；m，加入樹脂的重量（g）。

6 洗脫劑的選擇

準(zhǔn)確稱取多糖吸附量已知的樹脂2.0g，置于250mL三角瓶中，加入適當(dāng)?shù)南疵搫?，?3℃下振蕩洗脫12h，解吸吸附在樹脂上的多糖，按（3）式計(jì)算解吸率。

式中：D，解吸率；C，洗脫液中多糖的濃度（mg／mL）；V，洗脫液的體積（mL）；w，吸附在樹脂上的多糖的總量（mg）。

7 結(jié)果與討論

7.1 樹脂的篩選

表1 不同類型樹脂對(duì)食用菌多糖的吸附能力（33℃）

從表1數(shù)據(jù)可知，X－5對(duì)多糖的吸附明顯高于其它樹脂，本文以X－5樹脂為研究對(duì)象，探討X－5樹脂對(duì)松茸多糖的吸附分離特性。

7.2 吸附等溫線的測(cè)定

稱取X－5樹脂各2.0g，共8份，分別加入不同濃度的松茸多糖溶液25mL，于33℃、120r／min恒溫振蕩過夜至吸附平衡，測(cè)定樹脂的吸附量。以多糖的平衡濃度對(duì)分別計(jì)算得到的平衡吸附量作圖，結(jié)果如圖1。從圖1可以看出，隨著溶液中多糖平衡濃度增大，樹脂吸附量也隨之提高，當(dāng)濃度增大到一定程度后，樹脂對(duì)多糖吸附逐步趨于穩(wěn)定。

圖1 X－5吸附等溫線

7.3 動(dòng)力學(xué)曲線的測(cè)定

準(zhǔn)確稱取X－5樹脂210g，加入25mL濃度為3.9201mg／mL的多糖溶液，于33℃恒溫振蕩，每隔一定時(shí)間測(cè)1次溶液濃度，測(cè)定多糖吸附量隨時(shí)間的變化，得到動(dòng)力學(xué)曲線，如圖2所示。由動(dòng)力學(xué)曲線可以看出，隨著時(shí)間的增長，吸附量增加，12h左右達(dá)到平衡。

7.4 洗脫劑的選擇

準(zhǔn)確稱取吸附量已知的樹脂2.0g，置于250mL三角瓶中，然后分別用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%、30%、40%、50%、60%的丙酮溶液40mL進(jìn)行洗脫24h，測(cè)定溶液中多糖濃度，得到丙酮濃度與解吸率的關(guān)系如表2。

圖2 X－5吸附動(dòng)力學(xué)曲線

表2 丙酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)與解吸率的關(guān)系

由表2可以看出，隨著洗脫劑中丙酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大，多糖解析率增大，當(dāng)丙酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過50%后解析率趨于穩(wěn)定，變化不顯著。因此，選用質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%的丙酮作為洗脫劑。

7.5 動(dòng)態(tài)吸附和解吸

用濃度為3.9201mg／mL的多糖溶液通過裝有X－5樹脂的柱子，柱規(guī)格為φ210cm×30cm，流速為0.6 mL／min，每10min用紫外分光光度計(jì)分析流出液中多糖濃度，得穿透曲線，如圖3所示。用質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%的丙酮溶液以0.6mL／min進(jìn)行洗脫，得到洗脫曲線（見圖4）。揮去洗脫液中有機(jī)溶劑，測(cè)定洗脫液中的多糖含量，測(cè)得產(chǎn)品中食用菌多糖純度為71.3% ，多糖洗脫率為81%。

圖3 吸附穿透曲線

圖4 洗脫曲線

8 結(jié)論

采用大孔吸附樹脂分離純化食用菌提取液中的松茸多糖是可行的。X－5樹脂是良好的吸附樹脂，對(duì)松茸多糖的吸附率可達(dá)30.83mg／g；質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%丙酮濃度以0.6mL／min進(jìn)行洗脫時(shí)，洗脫率達(dá)81%；通過該工藝，可以有效去除糖類等水溶性雜質(zhì)及脂溶性雜質(zhì)，選擇性地保留有效成分，使松茸多糖的含量提高15%左右。該產(chǎn)品顏色較淺，吸潮性較低，既可方便開發(fā)成藥品使用，也可作為高純產(chǎn)品制備的原料。吸附樹脂用于松茸多糖的分離，省去了傳統(tǒng)溶劑萃取法的煩瑣工藝，僅吸附－ 脫附一步工藝即可提高多糖含量，成本低、操作簡(jiǎn)便、易于工業(yè)化生產(chǎn)。