張宏 葉迎賓 李淑敏 張志濤 李強(qiáng) 賀建軍 李軍 賈愛紅

原發(fā)性肝癌(PHC)是全球惡性腫瘤死亡的第三大原因，每年約有60萬人死于肝癌。在我國癌癥患者中，其中56%的為肝癌，已成為第二惡性腫瘤。普遍認(rèn)為肝癌的發(fā)生是一個(gè)包括癌基因激活和抑癌基因失活的多因素、多步驟過程［1］。但關(guān)于肝癌的確切病因尚不清楚。在我國主要以病毒性肝炎(HBV、HCV)的慢性持續(xù)感染是肝癌發(fā)生的主要背景，乙型肝炎相關(guān)者占70% ～80%，丙型與丁型肝炎相關(guān)者為15% ～20%。約5%的肝癌可能與黃曲霉毒素、飲用水污染、遺傳因素等有關(guān)［2］。往往當(dāng)發(fā)現(xiàn)肝癌時(shí)，已錯(cuò)過最佳的治療時(shí)間，因此當(dāng)務(wù)之急就是要找到一種對肝癌細(xì)胞靈敏度和特異性高的標(biāo)志物(如AFP-L3、GPC3、AFU)。本文通過對肝癌患者的 AFP-L3、GPC3、AFU的檢測數(shù)據(jù)的分析，探討三者聯(lián)合檢測來診療肝癌的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年5月至2011年1月在我院肝病科住院且經(jīng)病理學(xué)(瘤體直徑＞2 cm)證實(shí)的肝癌患者100例(PHC組)，男62例，女38例;年齡30～72歲，平均年齡53.2歲。肝硬化患者50例(肝硬化組)，男37例，女13例;年齡31～65歲，平均年齡48.7歲。肝癌和肝硬化患者均符合2000年中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。正常對照者50例為對照組，男25例，女25例;年齡20～30歲，平均年齡24.5歲。3組一般資料具有均衡性。

1.2 儀器與試劑 儀器為Thermo公司的 MK3酶標(biāo)儀(簡稱“酶標(biāo)儀”);AFP-L3、GPC3、AFU試劑盒均由上海雅吉生物科技有限公司提供。檢測AFP的儀器為西安核儀器廠提供的XH—6080十探頭全自動智能γ免疫計(jì)數(shù)器，其試劑盒有北京北方生物技術(shù)研究所提供，嚴(yán)格按照說明書操作。

1.3 標(biāo)本采集 取被檢者空腹靜脈血5 ml，分離血清，置－20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 方法 AFP-L3、GPC3、AFU三者檢測均采用ELISA法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。用酶標(biāo)儀檢測其OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)濃度曲線圖，分別計(jì)算出其濃度。AFP檢測采用放射免疫法，AFP＞20μg/L，AFP-L3＞10%視為陽性;GPC3檢測值 ＞3.0μg/L視為陽性;AFU檢測值＞40μg/L視為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件，3組陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組AFP-L3陽性率比較 PHC組的陽性率明顯高于肝硬化組和正常對照組(P＜0.01);肝硬化組的陽性率與對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。見表1。

表1 3組AFP-L3陽性率比較

2.2 3組GPC3陽性率比較 PHC組的陽性率明顯高于肝硬化組和正常對照組(P＜0.01);肝硬化組的陽性率與對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 3組GPC3陽性率比較

2.3 3組AFU陽性率比較 PHC組的陽性率明顯高于肝硬化組和對照組(P＜0.01);肝硬化組的陽性率與正常對照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見表3。

表3 3組AFU陽性率比較

2.4 單項(xiàng)或AFP-L3與 GPC3和AFU聯(lián)合檢測3組的結(jié)果比較 聯(lián)合檢測中有一項(xiàng)為陽性即為聯(lián)合檢測陽性。三者聯(lián)合檢測時(shí)，PCH的敏感度為96.0%(192/200)，特異度為76.0%(76/100)，準(zhǔn)確度為89.3%(268/300)，高于任何單項(xiàng)和聯(lián)合檢測的敏感度和準(zhǔn)確度。見表4、5。

3 討論

目前，診斷原發(fā)性肝癌的主要血清標(biāo)志物是AFP，其在各種肝病中均有不同程度的升高［3］，是由于肝細(xì)胞再生的過程產(chǎn)生一定量的 AFP［4］。由于 AFP 敏感度和特異性不高［5］，不能滿足臨床的需要。

1970年，通過對原發(fā)性肝癌患者血清的淀粉凝膠電泳試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)AFP電泳移動度不同源于唾液酸含量的不同，因此提出AFP異質(zhì)體這一概念［6］。1981年有學(xué)者報(bào)道了LCA結(jié)合型AFP在肝癌診斷中的價(jià)值，并很快得到了臨床資料的驗(yàn)證［7］。Sato等［8］報(bào)道，AFP異質(zhì)體升高的肝硬化患者多數(shù)在3～18個(gè)月內(nèi)被診斷為肝癌。Shiraki等［9］對AFP異質(zhì)體陽性的肝癌患者進(jìn)行回顧分析后也發(fā)現(xiàn)在影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)肝癌特征性占位性病變前12個(gè)月就有41%的患者AFP異質(zhì)體升高。甲胎蛋白異質(zhì)體AFP-L3現(xiàn)已列入1999年第四屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議上通過的原發(fā)性肝癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)的肝癌標(biāo)記物之一，也已經(jīng)列入2007年6月衛(wèi)生部頒布的臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目列表中，臨床意義清晰，但是長期以來缺乏能夠應(yīng)用于臨床常規(guī)使用的方法而無法推廣。美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)2005年批準(zhǔn)檢測AFP-L3指標(biāo)用于肝癌預(yù)警，并把AFP-L3診斷肝癌的陽性臨界值定為10%［10］。2007年6 月，王永忠等［11］報(bào)道，AFP-L3 是肝癌鑒別診斷的有用指標(biāo)，其靈敏度為72.3%，特異性為97.2%。2010年9月，丁賢等［4］報(bào)道，表明AFP-L3用于肝癌的診斷不受AFP≥400μg/L作為肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)的限制，當(dāng)AFP-L3% ＞10%而AFP輕度升高提示發(fā)生肝癌的可能性較大。從表1和表5中聯(lián)合分析，由于本文收集的肝癌標(biāo)本其瘤體直徑大于2 cm，所以ALP-L3的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度高于國內(nèi)其他文獻(xiàn)。PHC和肝硬化的鑒別，ALP-L3運(yùn)用具有明顯的優(yōu)勢。

表4 3組聯(lián)合檢測模式患者分布 例

表4 AFP-L3/GPC3/AFU單項(xiàng)或聯(lián)合檢測PHC的診斷效能比較%

GPC3是1996年克隆出來的一種新型基因［12］，對生長調(diào)控起著重要作用。由于該基因的突變導(dǎo)致了細(xì)胞增殖和凋亡失去平衡。Hsu等［13］報(bào)道154例肝癌組織中，74.8%檢測到GPC3mRNA，而在正常肝和肝炎組織中只有3.2%檢測到GPC3基因。2010年7月Bruix等［14］共同指出，小病灶的肝活組織病理學(xué)檢查不能確認(rèn)為HCC的組織，應(yīng)用所有可用標(biāo)志物之一的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3進(jìn)行染色，以提高診斷準(zhǔn)確性。宋孟锜［15］等指出，GPC3在肝癌組織表達(dá)高于癌旁和正常肝組織，GPC3與腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、HBsAg及AFP水平無明顯相關(guān)，而與病理分級和臨床分期有關(guān)。因此，提示臨床要慎重對待高于正常肝組織的GPC3的檢測值，要科學(xué)合理地進(jìn)行檢查，防止漏檢，進(jìn)而提高肝癌的診治率。到目前為止文獻(xiàn)多次報(bào)道［16－18］，本文顯示，GPC3作為一項(xiàng)靈敏度和特異性較高的新型指標(biāo)，為今后診斷早期肝癌走向常規(guī)化奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

1980年法國學(xué)者 Deugnier等［19］研究發(fā)現(xiàn)，AFU在診斷肝細(xì)胞癌中敏感性好，陽性率高，是AFP陽性率的三倍以上，對AFP陰性病例及小細(xì)胞肝癌的診斷價(jià)值極大，是早期原發(fā)性肝癌診斷的有用指標(biāo)。AFU的高低與腫瘤的大小無明顯的關(guān)系，可能有利于小肝癌的診斷。2004年，徐偉等［20］在AFU和AFP聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的臨床意義中表明AFU和AFP在診斷PHC時(shí)無相關(guān)性，但有較大的互補(bǔ)性。聯(lián)合檢測AFU和AFP則可顯著提高PHC陽性檢出率。2007年5月，殷建立等［21］提出AFU診斷PHC存在假陽性，與慢性肝病間有重疊現(xiàn)象，AFP和AFU聯(lián)合檢測遠(yuǎn)高于單項(xiàng)檢測。2008年，許勇臣等［22］提出，雖然AFP是原發(fā)性肝癌最特異的腫瘤標(biāo)志物，但靈敏度不如AFU，二者聯(lián)合用于檢測原發(fā)性肝癌可相互補(bǔ)充，如果二者檢測結(jié)果同時(shí)為陰性時(shí)，該聯(lián)合檢測不能作為排除性診斷的依據(jù)。從表5中發(fā)現(xiàn)也能證實(shí)這一點(diǎn)。

總之，蛋白質(zhì)組學(xué)本身正在迅速發(fā)展，同時(shí)隨著其在腫瘤標(biāo)志物研究中的廣泛應(yīng)用，新的腫瘤標(biāo)志物不斷被發(fā)現(xiàn)。因此要通過試驗(yàn)組織的合作，綜合分析大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，使我們能夠發(fā)現(xiàn)具有高敏感度和高特異度的腫瘤標(biāo)志物用于臨床。

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