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(1.寧夏回族自治區(qū)隆德縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，寧夏隆德 756300；2.寧夏回族自治區(qū)隆德縣奠安畜牧獸醫(yī)站；3.寧夏回族自治區(qū)隆德縣畜牧技術(shù)推廣服務(wù)中心)

胚胎移植技術(shù)是家畜胚胎工程的基礎(chǔ)與關(guān)鍵技術(shù)。目前國際上每處理1頭供體牛,獲可用胚5.5～8.0枚,鮮胚移植妊娠率高達(dá)55%～65%，凍胚移植妊娠率達(dá)50%～60%。某些發(fā)達(dá)國家，如美國、西歐、日本均已成功實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化。我國在胚胎移植方面的研究始于20世紀(jì)70年代,并先后在牛、羊、兔、豬等家畜取得了成功，一般每處理1頭供體牛，可獲可用胚胎4.5～6.0枚，牛鮮胚移植妊娠率為50%～60%，凍胚一般在45%～55%[1]。

目前,胚胎移植技術(shù)已成為良種引進(jìn)、育種、擴(kuò)大種群、保存遺傳資源的有效方法。然而,由于受許多條件限制,我國牛胚胎移植至今尚未全面進(jìn)入商業(yè)化應(yīng)用階段。分析原因很多,其中除胚胎生產(chǎn)的成本較高外,另一個主要原因是胚胎移植受胎率較低。在保證胚胎高質(zhì)量的情況下，受體的飼養(yǎng)管理是影響胚胎受胎率的關(guān)鍵因素。本試驗(yàn)旨在確保胚胎質(zhì)量的條件下，研究如何提高受體移植受胎率的問題。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1受體牛 選自寧夏某養(yǎng)牛場,品種為黃牛，發(fā)情周期正常，直腸檢查無繁殖機(jī)能障礙和生殖器官疾病。年齡3～6歲，經(jīng)產(chǎn)牛為產(chǎn)后90 d以上，按常規(guī)飼養(yǎng)方式飼養(yǎng)。

1.1.2供試胚胎 自制凍胚，冷凍前組織形態(tài)學(xué)鑒定均為A級。

1.1.3供試藥品 PG(氯前列烯醇)，由上海某計(jì)劃生育研究所生產(chǎn)，規(guī)格為0.2 mg/2 mL/支；VADE，由中科院某生物藥品廠生產(chǎn)，100 mL/瓶；HCG，由寧波某激素廠生產(chǎn)，1 000 IU/瓶。

1.2試驗(yàn)方法 預(yù)選合格受體牛490頭,隨機(jī)分為6組。

第1組(對照組)：直接應(yīng)用2次PG，在第1次注射后，間隔11 d進(jìn)行第2次注射。每次注射量為2支/頭。

第2組：每頭肌內(nèi)注射0.3%亞硒酸鈉10 mL。

第3組：每頭肌內(nèi)注射VADE10 mL。

第4組：常規(guī)飼料中添加5%能量飼料。

第5組：每頭肌內(nèi)注射HCG 2 000 IU。

第6組：常規(guī)飼料中添加5%蛋白質(zhì)飼料，保證飼料中總蛋白量達(dá)到12%左右。

1.3受體牛發(fā)情和黃體鑒定 對受體牛進(jìn)行48h不間斷發(fā)情觀察，以靜立接受爬跨為標(biāo)準(zhǔn)，準(zhǔn)確記錄發(fā)情開始時(shí)間。發(fā)情后，第7 d進(jìn)行黃體檢查。直腸檢查一側(cè)黃體直徑達(dá)1.2 cm以上，軟硬度適中均勻，形狀為球形或卵圓形，確定為合格黃體，進(jìn)行胚胎移植。

1.4黃體質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn) 詳見表1。

1.5統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

試驗(yàn)采用冷凍前鑒定為A級的冷凍胚胎215枚，移植受體牛215頭，受胎116頭，受胎率53.9%。不同處理方式對受體受胎率的影響詳見表2。

表1 黃體質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)

表2 不同處理方式對受體受胎率的影響

由表2可見，同期發(fā)情處理的發(fā)情率和黃體合格率，第1組與第4、6組差異不顯著(P>0.05)，第1組與第2、3、5組之間差異顯著(P<0.05)。試驗(yàn)表明，注射亞硒酸鈉(第2組)、VADE(第3組)、HCG(第5組)可提高受體受胎率5%～10%。

另據(jù)試驗(yàn)，受體牛子宮和黃體的生理狀況是影響移植受胎率的主要因素之一，子宮和黃體等級為A級時(shí)移植受胎率達(dá)55.8%，B級時(shí)受胎率為45.9%，C級時(shí)受胎率為6.7%，詳見表3。

表3 黃體質(zhì)量對移植受胎率的影響觀察

3 分析討論

3.1據(jù)生產(chǎn)實(shí)踐，受體牛群的飼養(yǎng)管理、營養(yǎng)狀況可直接影響母牛的排卵、著床和妊娠。據(jù)李樹靜(2001)[2]等報(bào)道，對放牧型不補(bǔ)飼、放牧型補(bǔ)飼和標(biāo)準(zhǔn)舍飼型3種飼養(yǎng)方式的牛群進(jìn)行胚胎移植效果試驗(yàn)，其妊娠率分別為35.6%、48.5%和52.0%，放牧型補(bǔ)飼、標(biāo)準(zhǔn)舍飼受體的移植妊娠率顯著高于放牧型不補(bǔ)飼的受體。因此，必須重視牛群的飼養(yǎng)管理工作，滿足其各種營養(yǎng)需要，防止?fàn)I養(yǎng)水平的極端化供給。但營養(yǎng)應(yīng)激對孕酮水平的影響仍有不同爭議，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，營養(yǎng)應(yīng)激會造成黃體重量變輕，發(fā)育程度達(dá)不到移植標(biāo)準(zhǔn)，從而影響移植受胎率[3]。據(jù)試驗(yàn)，對體況較差的個體，增加營養(yǎng)有利于提高妊娠率，因?yàn)檎诎l(fā)育的胚胎或胎兒在附植前和附植過程中對降低營養(yǎng)水平的反應(yīng)十分敏感[4]。相反，體況過肥的母牛，如果提高營養(yǎng)水平則會明顯降低妊娠率。另外，有研究表明，飼養(yǎng)管理不當(dāng)也會造成胚胎移植受體流產(chǎn)率升高[5]。本次試驗(yàn)結(jié)果，在常規(guī)飼養(yǎng)管理?xiàng)l件下，增加5%能量水平和5%蛋白質(zhì)水平，對移植受體的受胎率與對照組相比，無明顯影響。

3.2據(jù)試驗(yàn)，在良好的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件下，受體牛的子宮及卵巢生理狀況是影響受胎率的主要因素之一。試驗(yàn)結(jié)果表明，受體牛子宮及卵巢生理狀況A級比B級的受胎率提高21%，而C級的受胎率明顯低于A、B級，說明子宮卵巢黃體的生理狀況可明顯影響受體的受胎率，進(jìn)行胚胎移植時(shí)，受體牛子宮的黃體狀況必須達(dá)到A級或B級。

3.3在胚胎質(zhì)量較好的情況下，胚胎移植時(shí)子宮內(nèi)細(xì)菌感染是造成受胎率降低的重要因素，子宮在黃體期的抗感染能力要比發(fā)情期差。據(jù)門紅升等(1998)[6]報(bào)道，87.5%母牛的陰道前庭部存在鏈球菌等各種細(xì)菌，29.2%的牛陰道深部帶菌。因此，移植前陰部的清潔和消毒及操作過程的無菌環(huán)境非常重要。另外，胚胎移植前對受體牛分別注射HCG(2 000～3 000 IU/頭)、維生素制劑(10 mL/頭)和子宮內(nèi)注射碘劑(20～50 mL/頭)，結(jié)果注射HCG比對照組的受胎率高6%，維生素在缺乏時(shí)可以增加受胎率5%～10%，碘制劑則未見預(yù)期效果。

[1]陳靜波,竇忠英.牛胚胎移植技術(shù)在我國養(yǎng)牛業(yè)中的應(yīng)用及前景[J].黑龍江動物繁殖，2002(4)：16-18.

[2]李樹靜，余文莉.牛胚胎移植技術(shù)在中國內(nèi)蒙古的研究和應(yīng)用[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2001(1)：92-95.

[3]柏學(xué)進(jìn)，薛建華，等.牛胚胎移植技術(shù)的開發(fā)與應(yīng)用研究階段總結(jié)報(bào)告[J].黑龍江畜牧科技，1999(4)：14-16.

[4]丁玉臣.提高牛胚胎移植受胎率的措施[J].河北畜牧獸醫(yī)，2003(8)：40-41.

[5]朱志偉,俞頌東，等.提高牛冷凍胚胎移植妊娠產(chǎn)犢率的研究[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2003(1):31-35.

[6]門紅升，季維智，楊上川，等.提高胚胎移植中受體牛妊娠率的研究進(jìn)展[J].動物學(xué)研究，1998(2):165-170.