趙琳蕾

（甘肅省康復中心醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

中藥骨脂公英湯修復混合菌所致小鼠輸卵管炎性狹窄的實驗研究

趙琳蕾

（甘肅省康復中心醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

目的觀察中藥骨脂公英湯灌胃給藥后對混合菌導致的小鼠輸卵管炎性狹窄的影響，為臨床應用骨脂公英湯治療輸卵管炎性所致的不孕癥提供實驗依據(jù)。方法將昆明小鼠隨機分為對照組（n=10）、模型組（n=10）、模型+生理鹽水處理組（n=10）、模型+骨脂公英湯處理組（n=20），輸卵管炎性狹窄模型采用混合菌（溶血性鏈球菌、大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌，2∶1∶1）輸卵管接種法制作，處理組分別灌胃生理鹽水和骨脂公英湯30天。應用組織學方法觀察各組的病理學改變，評判各處理組病理學轉(zhuǎn)歸情況。結(jié)果在使用混合菌接種后，小鼠輸卵管管壁結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，主要包括黏膜層水腫、上皮細胞頂端纖毛變短或消失、固有層炎性細胞浸潤、毛細血管充血、管腔狹窄甚至閉塞。長期灌胃骨脂公英湯后明顯使上述病理改變，向正常組織轉(zhuǎn)歸。結(jié)論中藥骨脂公英湯能夠修復混合菌導致的小鼠輸卵管炎性狹窄的病理改變，為臨床應用該藥治療輸卵管炎性所致的不孕癥提供了實驗依據(jù)。

中藥；骨脂公英湯；輸卵管炎性狹窄

輸卵管因素導致不孕是婦科常見病和疑難病之一，據(jù)統(tǒng)計，不孕癥患者中30%～50%由輸卵管因素引起[1]。輸卵管具有運送精子、攝取卵子、提供受精部位以及把受精卵運送到子宮腔的作用，因而在生殖中起著關(guān)鍵的作用，任何破壞輸卵管結(jié)構(gòu)和功能的因素都可導致不孕癥的發(fā)生。而輸卵管性不孕癥的病因包括慢性輸卵管炎、子宮內(nèi)膜異位癥、輸卵管結(jié)核，其中慢性輸卵管炎約占一半以上[2]。輸卵管炎癥主要由盆腔感染和性傳播疾病引起，盆腔感染被認為是引起輸卵管病變最常見的原因。感染可破壞輸卵管內(nèi)膜結(jié)構(gòu)，形成斑痕，造成阻塞或使管壁僵硬以及輸卵管周圍粘連，輸卵管扭曲，改變了其與卵巢的關(guān)系，從而影響攝卵[2]。

骨脂公英湯為新研發(fā)的治療輸卵管炎導致不孕癥的中藥。本研究擬采用混合菌接種小鼠制作輸卵管炎性狹窄模型，觀察中藥骨脂公英湯對模型動物輸卵管組織結(jié)構(gòu)的影響，目的是探明該藥的作用機理。

1 材料和方法

1.1 材料

實驗于2009年4月至2010年12月在甘肅省康復中心醫(yī)院完成。選用雌性昆明小鼠，鼠齡60天，體重20～25 g，由蘭州大學動物實驗中心提供。小鼠飼養(yǎng)環(huán)境溫度（20±4）℃，濕度（60±20）%，室內(nèi)整潔安靜，通風良好，自由進食和普通飲水。

設(shè)計、實施、評估者均受過專業(yè)培訓，未采用盲法評估。

1.2 方法

1.2.1 藥物及儀器 中藥骨脂公英湯主要由補骨脂、公英、香附、當歸、郁金、丹參組成。用煎制的水劑灌胃給藥。使用MOTIC DIGITAL MICROSCOPE中國 B5 PROFESSIONAL SERIES，美國AO 820 ROTRAY MICROTOME切片機。

1.2.2 實驗細菌菌落 溶血性鏈球菌（菌號：ATCC21059）、大腸埃希菌（菌號：ATCC25922）和金黃色葡萄球菌（菌號：ATCC29213）按照2∶1∶1比例用無菌生理鹽水稀釋，配成濃度約為3×109個/升的混合菌。菌種由蘭州大學基礎(chǔ)醫(yī)學院微生物教研室提供、培養(yǎng)。

1.2.3 造模方法乙醚吸入麻醉小鼠，下腹正中縱切口，切口長大約1 cm，打開腹腔后，沿小鼠雙角子宮找到雙側(cè)輸卵管，夾閉雙側(cè)輸卵管子宮端，在子宮角近輸卵管處進針，向輸卵管—子宮方向注入混合菌稀釋液0.5 ml。手術(shù)盡量避免損傷周邊組織，然后分層關(guān)腹，恢復飲水，正常清潔喂食。

1.2.4 分組及給藥 50只小鼠隨機分為4組：（1）對照組（n=10），同齡同種在常規(guī)條件下飼養(yǎng)的正常鼠；（2）模型組（n=10），輸卵管炎造模，與對照組相同飲食；（3）模型+生理鹽水處理組（n=10），造模后第16天開始，生理鹽水50 ml/kg·d的劑量灌胃，每天一次，至處死；（4）模型+骨脂公英湯處理組（n=20），造模后第16天開始，骨脂公英湯丸4.5 g/kg·d的劑量煎成水劑灌胃，每天一次，至處死。各組均進行組織學觀察。

1.2.5 主要觀察目標 肉眼觀察小鼠輸卵管形狀、色澤改變情況，與周圍組織有無粘連，是否增粗或變細，彈性變化，以及有無積水、化膿等情況。肉眼觀察完畢，精確切取輸卵管，置于4%中性甲醛溶液中固定，常規(guī)切片，HE染色，光鏡下觀察病理改變。

2 結(jié)果

2.1植入混合菌所致輸卵管炎的動物模型以及生理鹽水灌胃后輸卵管的病理學改變

2.1.1 肉眼觀察 與對照組相比，肉眼觀察模型組及生理鹽水處理組輸卵管明顯較正常組變粗糙，與周圍組織有粘連，色澤鮮紅，脆而易于破損，部分輸卵管及其周圍組織可見積水（見圖1）。

圖1 輸卵管巨視照片

2.1.2 光鏡下病理改變 對照組：正常小鼠輸卵管管壁由黏膜、肌層、外膜三層構(gòu)成。黏膜由單層纖毛柱狀上皮和固有層組成，上皮內(nèi)主要有纖毛細胞和分泌細胞，纖毛細胞表面有較多纖毛，細胞間緊密連接，黏膜層可以形成皺褶，尤其在壺腹部。管壁其余組織結(jié)構(gòu)清晰，間質(zhì)細胞排列緊密。模型組及生理鹽水處理組：小鼠輸卵管管壁結(jié)構(gòu)不完整，黏膜層水腫，黏膜柱狀上皮細胞變成矮柱狀，頂部纖毛顯著變短或消失；固有層細胞增生明顯，細胞間質(zhì)內(nèi)可見嗜中性粒細胞和分葉核細胞及淋巴細胞浸潤，毛細血管擴張充血；管壁可見纖維細胞及纖維母細胞增生，致管壁增厚硬化，黏膜皺襞變平、減少，嚴重者管腔狹窄甚至閉塞（見圖2）。

A：正常輸卵管黏膜上皮頂端有大量纖毛，黏膜形成許多皺褶；B：造模45天輸卵管黏膜層，纖毛柱狀上皮變成矮柱狀，頂端纖毛消失，固有層可看到大量血管擴張、充血；C：造模45天+生理鹽水15天輸卵管黏膜層，上皮細胞明顯減少；D：造模45天+骨脂公英湯30天輸卵管黏膜層，黏膜形成許多皺褶，上皮頂端有大量纖毛

2.2 骨脂公英湯對小鼠炎性輸卵管作用的組織學觀察

用藥15天和30天后，分別處死上述4組小鼠的一半，取輸卵管進行觀察，主要觀察項目及結(jié)果如下。

2.2.1 肉眼觀察 骨脂公英湯給藥30天后輸卵管較模型組細，色澤變淡，與周圍組織的粘連減輕，分離容易，彈性較好（見圖1）。

2.2.2 光鏡下輸卵管組織學改變 骨脂公英湯用藥15天后小鼠輸卵管管腔通暢，纖毛上皮細胞排列整齊，頂端可以看到纖毛，黏膜皺褶增多，炎性細胞減少，血管擴張充血減輕。骨脂公英湯用藥30天后小鼠輸卵管管壁結(jié)構(gòu)清晰，管腔通暢，纖毛上皮細胞排列整齊，纖毛細胞頂端有較多纖毛，黏膜皺褶明顯變多；固有層細胞增生減輕，可見個別嗜中性粒細胞，毛細血管擴張充血明顯減輕（見圖2）。

3 討論

目前，對輸卵管炎性不孕的臨床報道多見，但無論是西醫(yī)還是中醫(yī)治療，療效均不是很滿意。近年來，隨著對人類盆腔炎及輸卵管炎性疾病研究的不斷深入，利用動物模型來探討其發(fā)病機理、判定藥效已為國內(nèi)外很多學者所重視。國外有用大鼠[3]、兔[4]及猴[5]等動物接種衣原體等病原微生物致炎癥建立輸卵管炎動物模型的報道。國內(nèi)制作慢性輸卵管炎癥動物模型最初多借鑒輸卵管絕育術(shù)[6]，用苯酚膠漿劑[7]注入單側(cè)大鼠子宮，另側(cè)子宮做自身正常對照，制作子宮內(nèi)膜粘連模型。也有采用30%的苯酚糊劑0.05～0.1 ml[8]注入家兔雙側(cè)輸卵管，制作家兔化學損傷性輸卵管炎癥模型。雖然病理結(jié)果有慢性炎癥等一致表現(xiàn)，但一些學者認為在致病原因方面，化學性炎癥與病原體致炎畢竟有所差異，后者所致炎癥與人類盆腔炎的患病途徑與過程更為接近，于是細菌性盆腔炎動物模型應運而生。而在臨床上，輸卵管炎性狹窄以細菌感染所致為主，主要為非特異性慢性輸卵管炎。慢性輸卵管炎大多是由急性輸卵管炎演變而來，其致病菌多為鏈球菌、化膿性葡萄球菌和大腸埃希菌等[9]。近年來，用β-溶血性鏈球菌[10]對雌兔雙側(cè)輸卵管進行接種制作了兔輸卵管炎變阻塞模型，以混合菌感染法[11]制作了大鼠細菌性盆腔炎模型。本實驗經(jīng)長期摸索，最終選取昆明小鼠作為實驗動物，最主要的原因是由于造模后成活率高，且易于灌胃給藥。在造模后灌胃給藥期間，除因灌胃操作不當而死亡2只外，其余均存活。另外，本實驗造模方法是將混合菌直接注入小鼠子宮內(nèi)，因此患病率高；且形成的病理變化均勻一致；本模型的致病菌與人類慢性輸卵管炎性狹窄致病菌相似，而且病理變化與臨床病理非常相似，因此證明使用混合菌感染法可以成功制造小鼠輸卵管炎性模型，從而為深入探討慢性輸卵管炎的發(fā)病機理和相應藥物的治療作用提供了良好的模型。

骨脂公英湯對小鼠輸卵管炎性狹窄的影響：肉眼觀察輸卵管形態(tài)以及與周圍組織粘連情況，給藥組明顯輕于生理鹽水處理組，說明骨脂公英湯具有消除積水、松解粘連的作用。鏡下觀察輸卵管各層炎癥改變程度，給藥時間較長組炎癥明顯輕于給藥時間較短組，且給藥組炎癥明顯輕于生理鹽水處理組，其中輸卵管上皮細胞纖毛及形成的皺襞的改變特別明顯，說明骨脂公英湯不僅能夠?qū)股掀ぷ冃裕€具有減少炎性細胞浸潤的作用。本實驗結(jié)果提示，骨脂公英湯具有對抗輸卵管炎癥的作用，本作用可能是通過改善組織細胞代謝，促進其再生、修復、減少炎性浸潤等途徑來實現(xiàn)的。

[1]吳玉英，馮攢中.輸卵管檢查和疏通術(shù)的進展[J].生殖與避孕，1995，15（4）：207.

[2]王芬，瑪依努爾.輸卵管性不孕癥的病因及診斷治療的研究進展[J].海南醫(yī)學，2004，15（2）：80～83.

[3]Tuffrey M，Woods C，Inman C，et al.The effect of a single oral dose of azithromycin on chlamydial infertility and oviduct ultrastructure in mice[J].Antimicrob Chemother，1994，34（6）：989～999.

[4]Pearlman M D，McNeeley S G，F(xiàn)rank T S，et al.Antiendotoxin antibody is protective against tubal damage in an Escherichia coli rabbit salpingitis model，AM[J].Obstet Gynecol，1994，171（6）：1558～1593.

[5]Patton D L，Sweeney Y T，Kuo C C.Demonstration of delayed hypersensitivity in Chlamydia trachomatis salpingitis in monkeys:a pathogenic mechanism of tubal damage[J].Infect Dis，1994，169（3）：680～683.

[6]陳鎮(zhèn)娜.苯酚膠漿劑注入輸卵管絕育的病理過程及其成敗原因的探討[J].中華婦產(chǎn)科雜志，1979，14（2）：84～85.

[7]陳學中.活血化瘀方防治子宮內(nèi)膜粘連的實驗研究[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志，1968，6（12）：740～741.

[8]李玲.通管湯對家兔輸卵管炎的抗炎作用[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志，1987，7（5）：293～294.

[9]趙光興，王春田，馬寶璋，等.大鼠輸卵管炎性不孕癥模型的建立[J].中國比較醫(yī)學雜志，2004，2（14）：23～26.

[10]李祥云，胡小梅，李路，等.“峻竣煎”對輸卵管炎變阻塞動物模型影響的實驗研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，1997（10）：41～43.

[11]馬寶璋，王樹林，方鳳奇，等.炎克寧沖劑對大鼠慢性盆腔炎局部免疫功能的調(diào)節(jié)作用[J].中國中醫(yī)藥科技，2000，7（1）：20～21.

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