李 鋒, 黃作平, 黃學(xué)平, 王志強(qiáng), 鐘 琳, 周新華, 吳自勍, 朱梅剛, 趙 彤△

(1南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510515;2武警廣東省總隊(duì)醫(yī)院腫瘤科，廣東 廣州 510507)

1000-4718(2012)03-0409-06

2011-10-20

2012-01-05

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30770908;No.81071941)

△通訊作者 Tel:020-61648228;E-mail:zhaotongketizu@126.com

BCL-6在經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤細(xì)胞株L428和過表達(dá)CD99的L428中的表達(dá)差異及其意義*

李 鋒1,2, 黃作平1, 黃學(xué)平1, 王志強(qiáng)1, 鐘 琳1, 周新華1, 吳自勍1, 朱梅剛1, 趙 彤1△

(1南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510515;2武警廣東省總隊(duì)醫(yī)院腫瘤科，廣東 廣州 510507)

目的探究BCL-6在經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin’s lymphoma，cHL)細(xì)胞株L428和過表達(dá)CD99的L428(L428-CD99+)中的表達(dá)差異及其意義。方法應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光共聚焦檢測BCL-6和CD99在cHL細(xì)胞株L428和L428-CD99+中的表達(dá)；運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blotting檢測細(xì)胞株L428和L428-CD99+中BCL-6和CD99的表達(dá)水平；MTT實(shí)驗(yàn)檢測L428和L428-CD99+細(xì)胞增殖能力的差異；流式細(xì)胞術(shù)檢測L428和L428-CD99+細(xì)胞的凋亡差異。結(jié)果免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光共聚焦顯示CD99在L428細(xì)胞中為陰性表達(dá)，在L428-CD99+細(xì)胞中為陽性表達(dá)，并定位于細(xì)胞膜；BCL-6在L428細(xì)胞為陰性表達(dá)，在L428-CD99+細(xì)胞株中為陽性表達(dá)，并定位于細(xì)胞核。Western blotting顯示CD99和BCL-6在L428細(xì)胞為陰性表達(dá)，在L428-CD99+細(xì)胞為陽性表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，與L428細(xì)胞相比，CD99和BCL-6 mRNA在L428-CD99+細(xì)胞中的表達(dá)量增高(P<0.01)。MTT顯示L428細(xì)胞增殖能力強(qiáng)于L428-CD99+細(xì)胞(P<0.01)；流式細(xì)胞術(shù)顯示L428-CD99+細(xì)胞凋亡較L428細(xì)胞增多(P<0.01)。結(jié)論過表達(dá)CD99誘發(fā)BCL-6表達(dá)增高，可導(dǎo)致L428細(xì)胞增殖能力下降及凋亡增加。

L428細(xì)胞株； CD99； BCL-6

原癌基因bcl-6位于3q27，編碼706個氨基酸殘基的鋅指蛋白[1]。BCL-6蛋白為一核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子，可作為序列特異性的轉(zhuǎn)錄抑制劑，參與非霍奇金淋巴瘤中彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)的發(fā)生發(fā)展[2]。CD99蛋白是一個分子量為32 000的跨膜糖蛋白，在大多數(shù)細(xì)胞表面表達(dá)。它作為一種細(xì)胞黏附分子，參與細(xì)胞黏附、凋亡過程，在腫瘤細(xì)胞的遷移、浸潤、侵襲及腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用[3]。文獻(xiàn)和我們以往研究發(fā)現(xiàn)CD99表達(dá)缺失與經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin’s lymphoma,cHL)的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[4]，為此我們構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)CD99的cHL細(xì)胞株L428(L428-CD99+)[5]。本研究在以往研究基礎(chǔ)上，采用免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光共聚焦、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western blotting等方法比較CD99和BCL-6在L428和L428-CD99+細(xì)胞之間的表達(dá)差異及其意義，從而明確在霍奇金淋巴瘤中CD99和BCL-6之間的關(guān)系及對細(xì)胞增殖和凋亡的影響。

材 料 和 方 法

1材料

1.1細(xì)胞株 cHL細(xì)胞株L428細(xì)胞由南方醫(yī)科大學(xué)廣東省分子腫瘤病理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存，過表達(dá)CD99的L428細(xì)胞株L428-CD99+由課題組前期構(gòu)建，L428-CTR細(xì)胞為應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染了空載體的L428細(xì)胞，均由南方醫(yī)科大學(xué)廣東省分子腫瘤病理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2主要儀器和試劑 胎牛血清為杭州四季青生物工程材料有限公司產(chǎn)品；兔抗人CD99單克隆抗體購自Abcam,鼠抗人CD99單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,兔抗人BCL-6多克隆抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，山羊抗兔IgG/辣根酶標(biāo)記、山羊抗兔IgG/FITC和山羊抗鼠IgG/TRITC購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；免疫組化SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；熒光共聚焦顯微鏡為Olympus FluoView 1000；流式細(xì)胞儀為Becton Dickinsion產(chǎn)品；總RNA提取試劑盒RNAisoTMPlus、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)和熒光定量PCR試劑盒SYBR Premix Ex TaqTM均為大連寶生物工程有限公司產(chǎn)品；Western blotting I抗稀釋液、II抗稀釋液和發(fā)光液均購自碧云天生物技術(shù)有限公司。

2方法

2.1細(xì)胞培養(yǎng) L428細(xì)胞、L428-CD99+細(xì)胞和L428-CTR細(xì)胞在含10%胎牛血清、1×105U/L青霉素和100 mg/L鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基中，置37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，取對數(shù)期、生長狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2細(xì)胞蠟塊制作 具體制作方法見參考文獻(xiàn)[6]。

2.3免疫細(xì)胞化學(xué) 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測采用SP法，具體操作如下：細(xì)胞蠟塊2 μm連續(xù)切片，石蠟切片脫蠟水化；用3%H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶；PBS洗后，分別用EDTA和檸檬酸溶液微波修復(fù)6 min和10 min，滴加I抗，37 ℃孵育1 h，PBS洗后，滴加過氧化物酶標(biāo)記的II抗，37℃孵育45 min；PBS洗后，DAB顯色；蘇木素復(fù)染、脫水、透明、中性樹膠封片。以已知陽性片作為陽性對照，以陰性表達(dá)的細(xì)胞作陰性對照。

2.4免疫熒光共聚焦檢測細(xì)胞株中CD99和BCL-6的表達(dá)差異 (1)吸取培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液，經(jīng)離心去上清轉(zhuǎn)移至1.5 mL的EP管，0.02 mol/L PBS洗滌3次，每次5 min，用4%多聚甲醛0.5 mL室溫固定30 min，再用0.02 mol/L PBS洗滌3次，每次5 min；(2)0.2% Triton X-100 0.5 mL室溫破膜10 min，0.02 mol/L PBS洗3次，每次5 min；(3)10% 正常山羊血清0.2 mL封閉20 min，不洗；(4)I抗孵育：工作液鼠抗CD99抗體200 μL，稀釋后兔抗BCL-6抗體200 μL，4 ℃孵育過夜，第2 d室溫孵育30 min，0.02 mol/L PBS洗滌4次，每次3 min；(5)II抗孵育：在暗室內(nèi)操作，I抗為CD99樣品加山羊抗鼠IgG/TRITC 200 μL，I抗為BCL-6樣品加山羊抗兔IgG/FITC 200 μL，室溫避光，加上錫箔紙，孵育1 h，0.02 mol/L PBS洗3次，每次3 min；(6)每個樣品加DAPI 200 μL，室溫避光孵育5 min，0.02 mol/L PBS洗2次，每次5 min；(7)100 μL PBS重懸，轉(zhuǎn)移至confocal皿，激光共聚焦顯微鏡觀察。

2.5逆轉(zhuǎn)錄和熒光定量PCR檢測細(xì)胞株中CD99和BCL-6 mRNA的表達(dá)差異 取培養(yǎng)細(xì)胞懸液5 mL，離心去上清，每107細(xì)胞中加入1 mL RNAiso Plus試劑，用移液器反復(fù)吹吸，室溫靜置5 min，向上述裂解液加入200 μL的氯仿，蓋緊離心管蓋，劇烈振蕩15 s，室溫靜置5 min，12 000 r/min、4 ℃離心15 min。吸取上層無色上清液至一新離心管，加入等體積的異丙醇，混勻，室溫靜置10 min，12 000 r/min、4 ℃ 離心10 min，去上清，緩慢沿離心管壁加入1 mL預(yù)冷75 %乙醇，2 000 r/min、4 ℃離心5 min后小心棄去乙醇，室溫干燥沉淀5 min，加入無RNA酶的水30 μL，待RNA完全溶解后于-80 ℃保存。CD99、BCL-6及內(nèi)參照GAPDH引物序列見表1。細(xì)胞株的RNA按試劑盒步驟逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，作為模板進(jìn)行熒光定量PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增程序如下：使用二步法進(jìn)行檢測，預(yù)變性95 ℃ 30 s；變性95 ℃ 5 s；退火58 ℃(CD99)或55 ℃(BCL-6) 34 s，共40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，立即進(jìn)行擴(kuò)增曲線和融解曲線分析。以GAPDH作為內(nèi)參照，由公式2-ΔΔCt計(jì)算CD99和BCL-6 mRNA在這些細(xì)胞株中的相對表達(dá)量。

表1 熒光定量PCR的引物序列

2.6Western blotting檢測細(xì)胞株中CD99和BCL-6的表達(dá)差異 取L428細(xì)胞、L428-CTR細(xì)胞和L428-CD99+細(xì)胞懸液，離心去上清，提蛋白前將PMSF 1 μL加入100 μL蛋白裂解液RIPA，將混合液加入細(xì)胞，冰上超聲裂解細(xì)胞30次，每次大概0.5 s，間隔1 s，冰上裂解30 min，12 000 r/min離心30 min，取上清。BCA法測定蛋白濃度，酶標(biāo)儀測定波長為570 nm，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。灌制10%分離膠，5%濃縮膠的SDS-PAGE 凝膠。吸取40 μg總蛋白，恒壓80 V 30 min。當(dāng)溴酚藍(lán)前沿進(jìn)入分離膠，把電壓提高到120 V，繼續(xù)電泳60 min直到溴酚藍(lán)到達(dá)分離膠底部。切膠濕轉(zhuǎn)恒流100 mA 120 min，將蛋白從SDS-PAGE 凝膠轉(zhuǎn)至PVDF膜。TBST配制5%的脫脂奶粉封閉。用I抗稀釋液按1∶100稀釋BCL-6抗體，1∶1 000稀釋CD99抗體，抗體和PVDF膜4 ℃孵育過夜。1 ∶5 000稀釋山羊抗兔IgG/辣根酶標(biāo)記II抗，孵育1 h，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光(enhanced chemiluminescence, ECL) 顯影。UVI 凝膠成像系統(tǒng)攝像，Image-Pro Plus 5.10軟件分析。

2.7MTT檢測細(xì)胞株的增殖能力 RPMI-1640培養(yǎng)液將L428細(xì)胞、L428-CTR細(xì)胞和L428-CD99+細(xì)胞懸液調(diào)整為4×107cells/L，接種到96孔板上，每孔加細(xì)胞懸液200 μL，每組共設(shè)置3個復(fù)孔?？瞻讓φ占覲BS 200 μL。隨后，每孔加入20 μL 5 g/L的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，吸去上清，每孔加150 μL DMSO，振蕩10 min，酶聯(lián)免疫儀檢測570 nm波長的吸光度值(A值)，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.8流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞株凋亡 取對數(shù)生長期L428細(xì)胞和L428-CD99細(xì)胞，離心去上清。將105～106個細(xì)胞懸浮于1 mL的RPMI-1640培養(yǎng)基中，再加入10 μL Hoechst 33342染液，混勻，37 ℃孵育15 min。加入1 mL buffer A工作液(用雙蒸水將10×buffer A 稀釋10倍)懸浮細(xì)胞，加入5 μL PI染液，室溫避光放置5～15 min后混勻。上機(jī)，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。MTT實(shí)驗(yàn)采用析因分析，熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)采用One-way ANOVA，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1免疫細(xì)胞化學(xué)檢測CD99和BCL-6在細(xì)胞株中的表達(dá)

CD99在L428表達(dá)陰性(圖1A)，而在L428-CD99+為陽性表達(dá)(圖1B)，并定位于細(xì)胞膜；而BCL-6在L428表達(dá)陰性(圖1C)，在L428-CD99+為陽性表達(dá)(圖1D)，并定位于細(xì)胞核。

Figure 1. The expression of CD99 (A,B) and BCL-6 (C,D) in the cell lines of L428 (A,C) and L428-CD99+(B,D) detected by immunocytochemistry (SP,×400).

圖1免疫細(xì)胞化學(xué)檢測cHL細(xì)胞株L428和L428-CD99+中CD99和BCL-6的表達(dá)

2免疫熒光共聚焦檢測L428和L428-CD99+細(xì)胞中CD99和BCL-6的表達(dá)

在L428細(xì)胞中，CD99表達(dá)為陰性，而在L428-CD99+細(xì)胞(圖2A)表達(dá)陽性，且在細(xì)胞膜表達(dá)；BCL-6在L428細(xì)胞中表達(dá)為陰性，而在L428-CD99+細(xì)胞中表達(dá)為陽性(圖2B)，且在細(xì)胞核表達(dá)。

Figure 2. The expression of CD99 (A) and BCL-6 (B) in the cell lines of L428 and L428-CD99+detected by confocal immunofluorescence (×1 000).

圖2免疫熒光共聚焦檢測cHL細(xì)胞株L428、L428-CTR和L428-CD99+中CD99和BCL-6mRNA的表達(dá)

3熒光定量PCR檢測L428、L428-CTR和L428-CD99+細(xì)胞中CD99和BCL-6mRNA的表達(dá)

與L428和L428-CTR細(xì)胞相比，L428-CD99+細(xì)胞的CD99 mRNA表達(dá)量明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與L428和L428-CTR細(xì)胞相比，L428-CD99+細(xì)胞的BCL-6 mRNA表達(dá)量明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見圖3。

4Westernblotting檢測L428、L428-CTR和L428-CD99+細(xì)胞中CD99和BCL-6的表達(dá)

在L428細(xì)胞和L428-CTR細(xì)胞中，CD99為陰性表達(dá)，而在L428-CD99+細(xì)胞中，CD99為陽性表達(dá)；在L428細(xì)胞和L428-CTR細(xì)胞中，BCL-6為陰性表達(dá)，而在L428-CD99+細(xì)胞中，BCL-6為陽性表達(dá)，見圖4。

圖3熒光定量PCR檢測細(xì)胞株L428、L428-CTR和L428-CD99+中CD99和BCl-6mRNA的表達(dá)

Figure 4. Expression of CD99 and BCL-6 in the cell lines of L428, L428-CTR and L428-CD99+detected by Western blotting. β-actin was used as loading control.

圖4Westernblotting檢測細(xì)胞株L428、L428-CTR和L428-CD99+中CD99+和BCl-6的表達(dá)差異

5MTT檢測L428、L428-CTR和L428-CD99+細(xì)胞的增殖能力

MTT 法檢測L428、L428-CTR和L428-CD99+細(xì)胞體外增殖能力，經(jīng)析因設(shè)計(jì)方差分析，結(jié)果顯示不同細(xì)胞組之間差異顯著(F=427.671，P<0.01)；不同時(shí)點(diǎn)組對細(xì)胞體外增殖的影響差異顯著(F=2029.134,P<0.01)；細(xì)胞各組與各時(shí)點(diǎn)兩因素交互效應(yīng)顯著(F=75.515,P<0.01)。3組細(xì)胞經(jīng)多重比較顯示，L428-CD99+細(xì)胞的增殖能力低于L428及L428-CTR細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而L428和L428-CTR的增殖能力差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖5。

圖5MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞株L428、L428-CTR和L428-CD99+增殖能力的差異

6流式細(xì)胞術(shù)檢測L428、L428-CTR和L428-CD99+細(xì)胞凋亡

結(jié)果可見L428-CD99+細(xì)胞凋亡率明顯高于L428及L428-CTR細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而L428和L428-CTR細(xì)胞的凋亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖6。

圖6流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞株L428、L428-CTR和L428-CD99+的凋亡率

討 論

CD99的表達(dá)缺失是cHL發(fā)生發(fā)展的重要條件之一。1998年Kim 等[4]首先發(fā)現(xiàn)Hodgkin/Reed-sternberg(H/RS)細(xì)胞形態(tài)的發(fā)生與CD99表達(dá)缺失有關(guān)。本課題組前期也發(fā)現(xiàn)cHL病變組織內(nèi)的H/RS細(xì)胞及cHL細(xì)胞株L428中CD99表達(dá)缺失[7-8]，進(jìn)一步證實(shí)了CD99在cHL中扮演了重要的角色。本課題組前期研究將小鼠B淋巴瘤細(xì)胞株A20的mCD99L2基因沉默，下調(diào)CD99的表達(dá)誘導(dǎo)了H/RS樣細(xì)胞的產(chǎn)生[9-10]。上述研究在人和鼠驗(yàn)證了H/RS腫瘤細(xì)胞形態(tài)的發(fā)生與CD99表達(dá)缺失有關(guān)。本課題探究cHL細(xì)胞株L428中CD99過表達(dá)前后BCL-6的表達(dá)差異并探討其對細(xì)胞增殖及凋亡的影響。

BCL-6 的生物學(xué)功能是調(diào)節(jié)淋巴結(jié)生發(fā)中心B細(xì)胞的分化和發(fā)育成熟，故生發(fā)中心B細(xì)胞表達(dá)BCL-6[11]。本課題揭示了過表達(dá)CD99后L428 的BCL-6表達(dá)水平增高，誘導(dǎo)殘疾B細(xì)胞起源的cHL細(xì)胞株L428[12]向生發(fā)中心B細(xì)胞分化。BCL-6和細(xì)胞的凋亡也有著密切的關(guān)系，BCL-6的靶基因多數(shù)是抗凋亡基因如bcl-2或bcl-XL，BCL-6的表達(dá)增高往往伴隨著Bcl-2或Bcl-XL的表達(dá)下降，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增加[13]。

本課題用熒光定量PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光共聚焦和Western blotting等方法從基因和蛋白水平驗(yàn)證了過表達(dá)CD99后的L428細(xì)胞BCL-6的表達(dá)水平增高，并且從MTT實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡率證實(shí)了過表達(dá)CD99后L428增殖能力減弱，細(xì)胞凋亡增加。這揭示了在L428細(xì)胞中，CD99過表達(dá)導(dǎo)致BCL-6的表達(dá)增高，有助于抑制細(xì)胞的增殖能力并促進(jìn)細(xì)胞的凋亡，其原因可能是：一方面在cHL中NF-κB信號通路是持續(xù)激活的[14]，而BCL-6是轉(zhuǎn)錄因子抑制劑，可抑制cHL賴以生存的NF-кB信號通路的轉(zhuǎn)錄[15]，從而使cHL持續(xù)激活的NF-кB信號通路失活，從而影響細(xì)胞增殖能力和促進(jìn)細(xì)胞凋亡；另一方面，Bcl-XL蛋白是一抗凋亡蛋白，在其啟動子區(qū)包含BCL-6蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，也就是說Bcl-XL蛋白是BCL-6的靶蛋白，所以BCL-6能直接結(jié)合bcl-XL的啟動子區(qū)并抑制其表達(dá)。所以BCL-6表達(dá)增高，靶蛋白Bcl-XL表達(dá)就減少，抗凋亡的作用也減弱了，從而可促進(jìn)細(xì)胞凋亡[16]。研究也顯示BCL-6的表達(dá)可以作為DLBCL獨(dú)立的預(yù)后因子，BCL-6在非霍奇金淋巴瘤中的高表達(dá)往往提示較好的預(yù)后[17]。Lossos等[18]研究表明在DLBCL中BCL-6蛋白高表達(dá)者比低表達(dá)者有更長的無病生存期，這也從臨床上進(jìn)一步證明了BCL-6有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，使預(yù)后變好。

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DifferentialexpressionofBCL-6incelllinesofclassicalHodgkin’slymphomaL428andL428

LI Feng1, 2, HUANG Zuo-ping1, HUANG Xue-ping1, WANG Zhi-qiang1, ZHONG Lin1, ZHOU Xin-hua1, WU Zi-qing1, ZHU Mei-gang1, ZHAO Tong1

(1DepartmentofPathology,NanfangHospitalAffiliatedtoSouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China;2DepartmentofOncology,GuangdongProvincialArmedForcesHospital,Guangzhou510507,China.E-mail:zhaotongketizu@126.com)

AIM: To investigate the expression of BCL-6 in classical Hodgkin’s lymphoma (cHL) cell lines, L428 (negative expression of CD99) and L428-CD99+(overexpression of CD99).METHODSThe expression of CD99 and BCL-6 at protein and mRNA levels was detected in the cell lines of L428 and L428-CD99+by the methods of immunocytochemistry, confocal immunofluorescence, real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting. MTT assay was used to determine the difference of proliferation between the cell lines of L428 and L428-CD99+. Apoptosis was analyzed by flow cytometry in the cell lines.RESULTSThe results of immunocytochemistry and confocal immunofluorescence showed that the expression of CD99 and BCL-6 was negative in L428 cell line, but positive in L428-CD99+cell line. The CD99 was localized in the membrane while BCL-6 expression was in the nucleus. The results of real-time fluorescence quantitative PCR showed that the mRNA expression levels of BCL-6 and CD99 in L428-CD99+cells were significantly higher than those in L428 cells (P<0.01). MTT assay showed that the proliferation capacity of L428 cells was higher than that of L428-CD99+cells (P<0.01). More apoptotic cells in L428-CD99+cell line than that in L428 cell line (P<0.01) were found.CONCLUSIONThe increased expression of CD99 and BCL-6 may lead to lower proliferation capacity and higher apoptotic rate of cHL, which are expected to be helpful in prevention and treatment of cHL.

L428 cell line; CD99; BCL-6

R363

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2012.03.005