姜劍松

(南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科,江蘇南通,226001)

近年來,我國肺癌的發(fā)病率及病死率已躍居惡性腫瘤的首位[1],手術(shù)治療、化療及放療對患者的5年生存率未見明顯提高。提高5年生存率的關(guān)鍵在于肺癌的早期診斷,尋找和研究在早期階段就能檢測到與肺癌發(fā)生和進(jìn)展相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物,已成為近年來的研究熱點。呼出氣冷凝液(EBC)分析作為一種簡單、完全無創(chuàng)的檢測方法,可提示氣道炎癥和其他呼吸系統(tǒng)疾病,如肺癌的發(fā)生發(fā)展[2-3]。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是目前已知作用最強的促血管內(nèi)皮生長因子,與多種腫瘤的血管生成、腫瘤生長及轉(zhuǎn)移有關(guān)。近年來,肺癌中VEGF表達(dá)的研究報道較多,其在肺癌組織和血清中的表達(dá)增加與肺癌惡性程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良有關(guān)[4]。目前對EBC中VEGF檢測的研究尚不多見,本研究通過檢測NSCLC患者和健康對照組EBC和血清中VEGF水平,探討NSCLC患者EBC中VEGF檢測的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年6月—2012年7月于本科住院治療的40例(A組)NSCLC患者為研究對象,其中男28例,女12例,平均年齡(61.2±9.6)歲;其中鱗癌12例,腺癌28例;按照2009年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)新修訂的肺癌 TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期,Ⅰ期9例,Ⅱ期7例,Ⅲ期18例,Ⅳ期6例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的18例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的22例;有吸煙史的23例,無吸煙史的17例。所有患者均經(jīng)病理或細(xì)胞學(xué)明確診斷。另選擇本院同期住院的穩(wěn)定期慢性阻塞性肺病(COPD)20例為COPD組(B組),其中男14例,女 6例,平均年齡(60.4±11.6)歲。同期從門診體檢中心選擇20例健康體檢者作為健康對照組(C組),其中男11例,女9例,平均年齡(59.7±10.5)歲。

1.2 方法

1.2.1 EBC的收集及保存:采用德國Eric Jaeger公司生產(chǎn)的EBC收集器(HAAK EK20 E-coScreen)收集EBC。首先將收集器預(yù)冷20 min,檢查前受試者需漱口清潔口腔,戴鼻夾,通過咬口器平靜呼吸。將呼出氣直接呼入-20℃冰浴的收集管中,經(jīng)單向活瓣平靜呼吸20 min后,呼出氣經(jīng)冷凝變?yōu)檠钗?取出收集管,待標(biāo)本融化后可以采集到1～3mL的EBC,移至離心管內(nèi),-70℃低溫保存待測。

1.2.2 血清的收集和保存:健康對照組血液標(biāo)本由本院體檢中心提供。NSCLC患者在入院后清晨空腹抽取外周靜脈血5 mL。穩(wěn)定期COPD患者室溫下標(biāo)本靜置1h,3500 r/min離心10 min,分離血清,將血清放入2 mL離心管中,置于-70℃低溫冰箱保存待測。

1.2.3 VEGF檢測:采用ELISA法測定EBC及血清中VEGF濃度。試劑盒為VEGF ELISA Kit(購自武漢貝茵萊生物科技有限公司),嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作,檢測EBC及血清中VEGF濃度。

2 結(jié) 果

2.1 3組EBC及血清VEGF水平比較

NSCLC組EBC和血清VEGF水平高于COPD組及正常對照組(P<0.05);COPD組EBC和血清VEGF水平高于正常對照組(P<0.05),見表 1。

表1 3組EBC及血清中VEGF的測定值(pg/mL,)

表1 3組EBC及血清中VEGF的測定值(pg/mL,)

與COPD組比較,＊P<0.05;與對照組比較,#P<0.05。

組別 n EBC-VEGF 血清VEGF肺癌組 40 11.7±6.1＊# 310.5±23.9＊#COPD組 20 6.3±4.9# 217.1±14.7#對照組 20 3.6±1.2 162.5±16.5

表2 NSCLC患者EBC及血清VEGF水平與臨床病理特征的關(guān)系(pg/mL,)

表2 NSCLC患者EBC及血清VEGF水平與臨床病理特征的關(guān)系(pg/mL,)

臨床病理 生理特征 n EBC-VEGF P值 血清VEGF P值性別 男 28 11.1±4.8 >0.05 306.1±19.6 >0.05女12 10.3±5.2 312.4±21.3年齡 <60歲 15 9.8±5.7 >0.05 315.8±25.7 >0.05≥60歲 25 10.2±4.6 312.5±23.0吸煙史 有 23 11.5±5.9 >0.05 302.5±18.3 >0.05無17 10.8±4.7 296.7±26.8病理類型 鱗癌 12 9.5±5.8 >0.05 302.3±28.6 >0.05腺癌 28 10.3±6.1 313.5±36.2 TNM分期 Ⅰ期 9 5.6±3.2 <0.05 282.3±30.9 <0.05Ⅱ期 7 10.5±3.7 308.4±28.6Ⅲ期 18 14.2±4.0 342.6±25.7Ⅳ期 6 18.7±3.6 375.5±17.6淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有 18 17.4±5.1 <0.05 347.8±21.1 <0.05無22 8.3±4.6 283.6±35.1

2.2 NSCLC組EBC中VEGF水平與臨床病理特征的關(guān)系

EBC和血清 VEGF水平與NSCLC患者的TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P<0.05),與肺癌病理類型及患者性別、年齡吸煙史無密切關(guān)系(P>0.05),見表2。

3 討 論

EBC檢測技術(shù)與傳統(tǒng)方法相比,具有以下優(yōu)勢:①EBC的收集過程完全無創(chuàng),不影響氣道功能或?qū)е卵装Y;②可在短期內(nèi)重復(fù)進(jìn)行;③可作為肺部疾病特異性的檢測手段;④檢測方法簡便,費用低,速度快,患者易于接受,便于推廣。通過EBC檢測肺癌腫瘤標(biāo)志物,對于肺癌的早期診斷、病情評估、療效評價和預(yù)后判斷具有重要意義。研究表明,腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移部位的生長依賴于組織血管新生[4]。目前已分離純化出30多種促血管內(nèi)皮生長因子及相關(guān)因子,如VEGF、堿性纖維母細(xì)胞生長因子、酸性纖維母細(xì)胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子等,其中以VEGF作用最強、特異性最高。VEGF通過增加內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂及遷移,重塑細(xì)胞外基質(zhì)和增加血管的通透性,以此調(diào)節(jié)病理性血管的生成[5],影響腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移等過程[6],因此VEGF可以作為肺癌診斷和組織學(xué)分類的標(biāo)志物。大量研究表明肺癌患者血清及癌組織中VEGF有高水平的表達(dá),其在肺癌中的表達(dá)增加與肺癌惡性程度、易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良有關(guān)。Jin等[7]研究發(fā)現(xiàn)癌組織VEGF的高表達(dá)與病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)(P<0.01)。

目前國內(nèi)外對EBC中VEGF檢測的研究尚不多。Dalaveris等[8]檢測30例肺癌患者和15例對照組的EBC和血清的VEGF水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清和EBC的VEGF水平具有顯著的相關(guān)性(r=0.52,P=0.019)。EBC-VEGF可監(jiān)測肺癌的病情進(jìn)展。Gessner等[9]對 17例 NSCLC患者、15例經(jīng)兩個療程化療的NSCLC患者、穩(wěn)定期和急性加重期COPD患者各15例及12例健康對照組的EBC水平進(jìn)行比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn)NSCLC患者EBC-VEGF水平顯著高于其他各組。經(jīng)過兩療程化療并且腫瘤原發(fā)病灶縮小>25%的肺癌患者,其EBC-VEGF顯著低于COPD急性加重期。以上研究表明VEGF參與了NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程,檢測EBC-VEGF的水平對肺癌診斷及預(yù)后評估具有一定價值。

本研究采用ELISA方法檢測EBC及血清中的VEGF,結(jié)果顯示,EBC和血清中的VEGF水平在肺癌組均高于COPD組及健康對照組,EBC和血清中VEGF水平在COPD組均高于健康對照組,說明EBC-VEGF可作為腫瘤標(biāo)志物用于肺癌的輔助診斷及肺部良惡性疾病的鑒別診斷。檢測VEGF的結(jié)果還顯示,EBC和血漿VEGF水平隨肺TNM分期呈增高趨勢,Ⅳ期患者VEGF水平最高,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的的肺癌患者其VEGF水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。說明VEGF促進(jìn)了肺癌生長轉(zhuǎn)移,VEGF水平越高,轉(zhuǎn)移的可能性越大,預(yù)后也越差。因而EBC-VEGF可作為肺癌轉(zhuǎn)移監(jiān)測和預(yù)后評估的指標(biāo)。

綜上,檢測EBC中VEGF是一種方便、無創(chuàng)的輔助診斷NSCLC的方法,并對病情進(jìn)展、轉(zhuǎn)移監(jiān)測及預(yù)后評估有一定提示作用。

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